Methods for Electroporation and Transformation Confirmation in <em>Limosilactobacillus reuteri</em> DSM20016

Alexander Duggan; David McMillen

doi:10.3791/65463

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Methods for Electroporation and Transformation Confirmation in Limosilactobacillus reuteri DSM20016

罗伊氏乳酸杆菌电穿孔和转化确认的方法DSM20016

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11:04 min

June 23, 2023

DOI: 10.3791/65463-v

Alexander Duggan¹, David McMillen¹

¹University of Toronto Mississauga

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

在这里，我们提出了使用 罗伊氏利莫西乳杆菌 DSM20016的方案，详细介绍了生长、质粒转化、集落PCR、荧光报告蛋白测量和有限的质粒迷你制备，以及常见问题和故障排除。这些方案允许测量DSM20016中的报告蛋白，或者在没有报告基因的情况下通过集落PCR进行确认。

L.Reuteri，特别是菌株，DSM20016是一种健壮的、天然的人类肠道共生菌，在整个胃肠道中具有巨大的治疗递送和疾病检测前景。这项工作将有助于将DSM20016定位为这些应用的合成生物学底盘。乳酸杆菌没有特定的模式生物。

首选物种确实存在，但它们的选择通常偏向于特定的研究目标。细菌家族内的变异导致了碎片化的协议，其中一些协议的修改迭代可以追溯到出版物。对于刚开始的人来说，很难准确过滤什么是有用的，什么是没有用的。

确实存在一篇关于DSM20016转型的论文，但它不是现代的。存在其他乳酸杆菌家族成员的现代协议，但它们并不DSM20016。在这里，我们努力为DSM20016电穿孔提供一套易于使用、集中化、现代化、完整的实验方案。

与以前的DSM20016探索协议相比，该协议集提供了实质性的现代化，并阐明了一些悬而未决的线程，并强调了以前不太清晰的部分。该协议集也是完整的，专门针对DSM20016，其他非DSM20016协议并不完全兼容。我们的主要目标之一是使用微生物作为廉价的传感器和输送系统。

我们正在与肠道疾病专家合作，使用DSM20016来感知胃肠道的状况，并根据需要提供治疗。

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