Host Cell Protein Analysis using Enrichment Beads Coupled with Limited Digestion

Sisi Zhang; Hui Xiao; Ning Li

doi:10.3791/65544

JoVE Journal
Chemistry

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Host Cell Protein Analysis using Enrichment Beads Coupled with Limited Digestion

使用富集微球与有限消化相结合的宿主细胞蛋白分析

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09:45 min

January 19, 2024

DOI: 10.3791/65544-v

Sisi Zhang¹, Hui Xiao¹, Ning Li¹

¹Analytical Chemistry,Regeneron Pharmaceuticals Inc.

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

提出了一种从药物产品（DP）中富集宿主细胞蛋白（HCP）和使用蛋白质组富集珠检测肽的方案。该方法使用内部制造的单克隆抗体（mAb）原料药（DS）进行演示，该物质是一种表征良好的参考物质，用于评估和比较不同方法的性能。

我们开发了一种高度灵敏的方法，使用蛋白质组富集微球从药物产品中检测那些低丰度的宿主细胞蛋白。这种方法有助于我们找到与药品相关的根本原因和风险。有多种方法可以提高HCP分析的检测限，非靶向方法包括但不限于蛋白A去除、有限消化、截留分子量、免疫沉淀。

靶向检测宿主细胞蛋白的方法，包括液相色谱法、多反应监测和非液相色谱平行反应监测。与这些HCP分析相关的主要挑战是抗体药物和宿主细胞蛋白之间的显着动态范围。因此，大多数方法旨在减少抗体的量，并在LCMS分析前富集HCP，以减小抗体肽和HCP肽之间的动态范围。

因此，与其他方法相比，ProteoMiner 技术和有限的酶解方案显着提高了 HCP 分析的检测限。与免疫沉淀法相比，它是无偏倚的，与蛋白A去除法相比，它可以应用于不同的药物模块。该协议也简单明了。

因此，ProteoMiner 技术和有限的消化方案有助于我们鉴定几种降解聚山梨酯和片段抗体药物的 HCP。结合纳米LCMPRM方法，富集方法还可以提供定量结果，以找到有问题的宿主细胞蛋白的生物学相关浓度。

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