使用荧光成像快速体外细胞毒性评估表达嵌合抗原受体的 Jurkat
October 27th, 2023
一种评估靶向单个肿瘤抗原的表达嵌合抗原受体 （CAR） 的 Jurkat 细胞定量肿瘤细胞杀伤的方案。该方案可用作筛选平台，用于在外周血来源的T细胞中确认之前快速优化CAR铰链结构。
CAR T细胞正在不断改进，以在人体临床试验中实现更好的反应。我们正在确定在实验室中使用无偏高通量方法进行评估的方法，例如使用荧光成像来筛选最有效的组合。通过修改细胞外和铰链结构域的几何形状，可以为任何单链可变片段设计几种构建体组合。
我们设计了这个方案，以确定使用Jurkat细胞消除靶细胞最有效的组合。这是一种快速、高通量的方案，使用 Jurkat 细胞根据其靶细胞细胞毒性筛选 CAR 构建体，然后用常规 T 细胞进行验证。使用这种技术可以在 96 孔板中同时测试十几种不同的 CAR 构建体。
在 Akhavan 实验室，我们以绝对数量量化表达 CAR 的 Jurkat 细胞以高通量方式对靶细胞的直接环化，以筛选多种 CAR 构建体。我们实验室的主要目标是改善CAR T细胞疗法针对高级别脑肿瘤的临床转化。我们利用高通量药物筛选作为一种方式来改善CAR T细胞的细胞毒性，并靶向肿瘤微环境。
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概述
该协议概述了一种高通量方法，用于评估CAR表达的Jurkat细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。它允许快速筛选各种CAR构建体，以识别针对特定肿瘤抗原的最有效组合。
关键研究组成部分
科学领域
- 免疫学
- 癌症生物学
- 细胞治疗
背景
- CAR T细胞正在改进以获得更好的临床结果。
- 高通量筛选方法对于优化CAR构建体至关重要。
- Jurkat细胞作为评估CAR功效的模型。
- 本研究侧重于CAR构建体对靶细胞的细胞毒性。
研究目的
- 开发一个有效筛选CAR构建体的协议。
- 量化CAR表达的Jurkat细胞的细胞毒作用。
- 识别针对肿瘤抗原的最佳CAR配置。
所用方法
- 用于高通量筛选的荧光成像。
- 在96孔板格式中评估多个CAR构建体。
- 量化CAR表达的Jurkat细胞对靶细胞的杀伤。
- 与常规T细胞反应进行比较以验证。
主要结果
- 识别有效的CAR构建体用于肿瘤细胞的杀伤。
- 使用Jurkat细胞展示高通量能力。
- 对不同构建体进行细胞毒性的定量评估。
- 在临床应用之前快速优化CAR设计的潜力。
结论
- 该协议能够有效筛选CAR构建体。
- Jurkat细胞为评估CAR功效提供了可靠的模型。
- 这种方法可以加速CAR T细胞疗法的开发。
常见问题
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:42
Plating CFSE‐Labelled Tumor Cells and Co‐Culturing CAR‐Expressing Jurkats for In Vitro Cytotoxicity Evaluation
5:19
Preparation of Plate for Fluorescent Imaging and Cell Viability Assessment in CAR‐Jurkat Co‐Culture with CFSE‐Labeled Tumor Cells
![使用[18F]四氟硼酸盐正电子发射断层扫描/计算机断层扫描对嵌合抗原受体T细胞进行动态成像](/_next/image?url=https%3A%2F%2Fcloudfront.jove.com%2FCDNSource%2Fteasers%2F62334.jpg%3Fv%3D2026-06-23T21%253A59%253A25.773Z&w=384&q=75)
