Name: 偏振敏感双光子显微镜用于无标记淀粉样蛋白结构表征 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-08T12:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 54 s
Description: 了解偏振敏感双光子显微镜技术用于无标记淀粉样蛋白超结构表征的方法。该技术可检测纤维取向，降低光毒性并实现深层成像，为阿尔茨海默病等疾病研究提供新工具。

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本工作由波兰国家科学中心资助的 Sonata Bis 9 项目（2019/34/E/ST5/00276）支持。

Characterizing Spherulites with Polarization-Sensitive Two-Photon Microscopy

<ol><li>Petazzi, R. A., Aji, A. K., Chiantia, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPetazzi%2C+RA+%22Progress+in+Molecular+Biology+and+Translational+Science%22">Progress in Molecular Biology and Translational Science</a>. Giraldo, J., Ciruela, F. 169, Academic Press. 1-41 (2020).</li>
<li>Kress, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+orientational+behavior+of+MHC+class+I+protein+and+lipid+probes+in+cell+membranes+by+fluorescence+polarization-resolved+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Probing orientational behavior of MHC class I protein and lipid probes in cell membranes by fluorescence polarization-resolved imaging.</a> Biophysical Journal. 101 (2), 468-476 (2011).</li>
<li>Duboisset, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thioflavine-T+and+Congo+Red+reveal+the+polymorphism+of+insulin+amyloid+fibrils+when+probed+by+polarization-resolved+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+B%22%5BJournal%5D)">Thioflavine-T and Congo Red reveal the polymorphism of insulin amyloid fibrils when probed by polarization-resolved fluorescence microscopy.</a> The Journal of Physical Chemistry B. 117 (3), 784-788 (2013).</li>
<li>De Luca, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+ensemble+polymorphism+and+single+aggregate+structural+heterogeneity+in+insulin+amyloid+self-assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Colloid+and+Interface+Science%22%5BJournal%5D)">Probing ensemble polymorphism and single aggregate structural heterogeneity in insulin amyloid self-assembly.</a> Journal of Colloid and Interface Science. 574, 229-240 (2020).</li>
<li>Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+tissue+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Deep tissue two-photon microscopy.</a> Nature Methods. 2 (12), 932-940 (2005).</li>
<li>Obstarczyk, P., Lipok, M., Grelich-Mucha, M., Samoć, M., Olesiak-Bańska, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+excited+polarization-dependent+autofluorescence+of+amyloids+as+a+label-free+method+of+fibril+organization+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Two-photon excited polarization-dependent autofluorescence of amyloids as a label-free method of fibril organization imaging.</a> The Journal of Physical Chemistry Letters. 12 (5), 1432-1437 (2021).</li>
<li>Obstarczyk, P., Lipok, M., Żak, A., Cwynar, P., Olesiak-Bańska, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+fibrils+in+superstructures+-+local+ordering+revealed+by+polarization+analysis+of+two-photon+excited+autofluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials+Science%22%5BJournal%5D)">Amyloid fibrils in superstructures - local ordering revealed by polarization analysis of two-photon excited autofluorescence.</a> Biomaterials Science. 10 (6), 1554-1561 (2022).</li>
<li>Le Floc'h, V., Brasselet, S., Roch, J. -F., Zyss, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+orientation+in+molecular+ensembles+by+polarization+sensitive+nonlinear+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+B%22%5BJournal%5D)">Monitoring of orientation in molecular ensembles by polarization sensitive nonlinear microscopy.</a> The Journal of Physical Chemistry B. 107 (45), 12403-12410 (2003).</li>
<li>Chen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+near-infrared+two-photon+imaging+of+amyloid+plaques+in+deep+brain+of+Alzheimer%27s+disease+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chemical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">In vivo near-infrared two-photon imaging of amyloid plaques in deep brain of Alzheimer's disease mouse model.</a> ACS Chemical Neuroscience. 9 (12), 3128-3136 (2018).</li>
<li>Gasecka, P., Balla, N. K., Sison, M., Brasselet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipids-fluorophores+interactions+probed+by+combined+nonlinear+polarized+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+B%22%5BJournal%5D)">Lipids-fluorophores interactions probed by combined nonlinear polarized microscopy.</a> The Journal of Physical Chemistry B. 125 (50), 13718-13729 (2021).</li>
<li>Mojzisova, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization-sensitive+two-photon+microscopy+study+of+the+organization+of+liquid-crystalline+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Polarization-sensitive two-photon microscopy study of the organization of liquid-crystalline DNA.</a> Biophysical Journal. 97 (8), 2348-2357 (2009).</li>
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<li>Olesiak-Banska, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanorods+as+multifunctional+probes+in+a+liquid+crystalline+DNA+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Gold nanorods as multifunctional probes in a liquid crystalline DNA matrix.</a> Nanoscale. 5 (22), 10975-10981 (2013).</li>
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<li>Krebs, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+formation+of+spherulites+by+amyloid+fibrils+of+bovine+insulin%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">The formation of spherulites by amyloid fibrils of bovine insulin.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (40), 14420-14424 (2004).</li>
<li>Aït-Belkacem, D., Gasecka, A., Munhoz, F., Brustlein, S., Brasselet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+birefringence+on+polarization+resolved+nonlinear+microscopy+and+collagen+SHG+structural+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Influence of birefringence on polarization resolved nonlinear microscopy and collagen SHG structural imaging.</a> Optics Express. 18 (14), 14859-14870 (2010).</li>
<li>Schön, P., Munhoz, F., Gasecka, A., Brustlein, S., Brasselet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization+distortion+effects+in+polarimetric+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Polarization distortion effects in polarimetric two-photon microscopy.</a> Optics Express. 16 (25), 20891-20901 (2008).</li>
<li>Svoboda, K., Yasuda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+two-photon+excitation+microscopy+and+its+applications+to+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Principles of two-photon excitation microscopy and its applications to neuroscience.</a> Neuron. 50 (6), 823-839 (2006).</li>
<li>Zipfel, W. R., Williams, R. M., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonlinear+magic%3A+multiphoton+microscopy+in+the+biosciences%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Nonlinear magic: multiphoton microscopy in the biosciences.</a> Nature Biotechnology. 21 (11), 1369-1377 (2003).</li>
<li>Ferrand, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultimate+use+of+two-photon+fluorescence+microscopy+to+map+orientational+behavior+of+fluorophores%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Ultimate use of two-photon fluorescence microscopy to map orientational behavior of fluorophores.</a> Biophysical Journal. 106 (11), 2330-2339 (2014).</li>
<li>Chipman, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depolarization+index+and+the+average+degree+of+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Optics%22%5BJournal%5D)">Depolarization index and the average degree of polarization.</a> Applied Optics. 44 (13), 2490-2495 (2005).</li>
<li>de Reguardati, S., Pahapill, J., Mikhailov, A., Stepanenko, Y., Rebane, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-accuracy+reference+standards+for+two-photon+absorption+in+the+680%26%23x2013%3B1050+nm+wavelength+range%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">High-accuracy reference standards for two-photon absorption in the 680&#x2013;1050 nm wavelength range.</a> Optics Express. 24 (8), 9053-9066 (2016).</li>
<li>Mansfield, J. C., Mandalia, V., Toms, A., Winlove, C. P., Brasselet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+reorganization+in+cartilage+under+strain+probed+by+polarization+sensitive+second+harmonic+generation+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+The+Royal+Society+Interface%22%5BJournal%5D)">Collagen reorganization in cartilage under strain probed by polarization sensitive second harmonic generation microscopy.</a> Journal of The Royal Society Interface. 16 (150), 20180611(2019).</li>
<li>Duboisset, J., Aït-Belkacem, D., Roche, M., Rigneault, H., Brasselet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generic+model+of+the+molecular+orientational+distribution+probed+by+polarization-resolved+second-harmonic+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Review+A%22%5BJournal%5D)">Generic model of the molecular orientational distribution probed by polarization-resolved second-harmonic generation.</a> Physical Review A. 85 (4), 043829(2012).</li>
<li>Loksztejn, A., Dzwolak, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chiral+Bifurcation+in+aggregating+insulin%3A+an+induced+circular+dichroism+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Chiral Bifurcation in aggregating insulin: an induced circular dichroism study.</a> Journal of Molecular Biology. 379 (1), 9-16 (2008).</li>
</ol>

作者声明无利益冲突。

偏振敏感双光子显微镜是研究淀粉样超结构内部纤维局部有序性的有力工具，仅需对标准多光子系统进行少量改造即可实现。由于该技术基于非线性光学现象，与单光子激发荧光显微技术相比，可实现更弱的角度光选择效应和更高的轴向分辨率。此外，与单光子激发荧光显微技术相比，该方法还具有光散射更少、光毒性更低以及样品穿透深度更大的优势19,20。正如我们此前已证实的，该技术非常适合对蛋白质致密聚集物（如球晶）进行无标记检测21。
然而，为了有效使用此处所述的方法，应注意几个关键问题。首先从样品制备及其质量开始，即孵育过程，必须确保淀粉样超结构已正确生长。对于球晶，我们使用带有交叉偏振器的偏光光学显微镜来定位成熟的球晶，这些球晶呈现出特征性的马耳他十字图案，半径约为 ~5 µm16。然而，球晶具有异质性，在样品中可观察到不同的结构。因此，选择分离且未变形的个体至关重要。至于测量系统本身，控制入射光...

在过去的几十年中，尽管已开发出多种用于蛋白质及其聚集体生物成像的荧光显微技术1只有少数被用于确定它们在样品中的局部排列顺序2,3荧光寿命成像显微镜4 用于研究淀粉样超结构——球晶的内在结构异质性。此外，利用偏振敏感方法可实现对球晶等复杂且高度密集的生物结构内部局部有序性的定量测定。3然而，由于采用紫外-可见光波长激发荧光团，传统的荧光技术受限于较浅的组织穿透深度 体内 导致组织对光的散射显著增强5此外，此类成像通常需要设计并结合针对特定生物分子的荧光探针，从而增加了成像所需的成本和工作量。
最近，为了解决这些问题，我们的团队已将偏振敏感双光子激发荧光显微技术（ps-2PFM）应用于生物结构的无标记成像6,7。ps-2PFM 能够测量双光子荧光强度对激发光束线性偏振方向的依赖性，并分析发射荧光的偏振特性8。该技术的实现需要在标准多光子显微镜激发光路（图1）中增加一个半波片，以调控入射光的偏振面。随后，通过两个雪崩光电二极管采集信号，获得荧光偏振的两个相互垂直分量，并据此生成偏振图，用以描绘双光子激发荧光强度随激发激光偏振方向的变化关系。
最后一步是数据分析过程，需考虑光学元件（如二向色镜或高数值孔径物镜）对偏振的影响。由于双光子过程的特性，该方法不仅降低了角度光选择效应，还提高了轴向分辨率，因为焦点平面以外的荧光分子发生双光子激发的概率受到限制。此外，已有研究证明，类似方法可成功应用于 体内 近红外探针（NIR）的深组织成像9. Ps-2PFM 之前已用于成像细胞膜中的荧光团10 和 DNA11,12，以及生物系统的非标准荧光标记物，如金纳米颗粒13然而，在所有这些例子中，关于生物大分子组织结构的信息都是间接获得的，并且需要预先设定荧光团与生物大分子之间的相对取向。
在我们近期发表的一篇论文中，已证明皮秒级偏振双光子荧光显微术（ps-2PFM）可成功用于测定淀粉样超结构的自发荧光以及硫黄素T（Thioflavin T，一种特异性结合淀粉样纤维的染料）在球晶中结合后的荧光局部偏振特性6。此外，在另一项研究中，我们证实ps-2PFM可用于检测亚微米尺度下淀粉样球晶内部淀粉样纤维的取向，该结果通过与透射电子显微镜（TEM）成像的相关性分析得到了验证7。实现这一成果的关键在于：i）球晶-淀粉样蛋白在单光子或双光子激发下表现出固有的自发荧光，其发射光谱最大值位于450至500 nm范围内，且双光子吸收截面与标准荧光染料相当14；ii）此前建立的数学模型可用于描述标记生物膜和DNA结构的染料的ps-2PEF行为，这些模型同样适用于球晶本身及其结合染料所表现出的荧光特性8,11,15。因此，在开展分析之前，我们强烈建议仔细阅读本课题第一篇论文的正文及支持信息中所阐述的相关理论内容6。本文中，我们展示了如何应用ps-2PFM技术对牛胰岛素淀粉样球晶进行无标记的结构表征的实验方案。

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;样品制备&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>盖玻片，24 × 24 mm</td><td>Chemland</td><td>04-298.202.04</td><td></td></tr><tr><td>组织学用DPX封片剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>6522</td><td>载玻片封片剂</td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock离心管，1.5 mL，聚丙烯材质</td><td>Chemland</td><td>02-63102</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf ThermoMixer&amp;nbsp;C</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>用于球晶孵育</td></tr><tr><td>HLP 5UV 水纯化系统</td><td>Hydrolab</td><td></td><td>样品制备中所用去离子水的来源</td></tr><tr><td>盐酸（&amp;ge;37%，APHA &amp;le;10）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30721-M</td><td></td></tr><tr><td>牛胰腺来源胰岛素粉末（&amp;ge;25 单位/mg（HPLC））</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5500</td><td></td></tr><tr><td>甲醇（HPLC级）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>270474</td><td></td></tr><tr><td>凹面载玻片，76 × 26 × 1 mm</td><td>Chemland</td><td>04-296.202.09</td><td></td></tr><tr><td>Olympus BX60</td><td>Olympus</td><td></td><td>图2中使用的偏光光学显微镜</td></tr><tr><td>PTFE螺纹密封带，12 mm × 12 mm × 0.1 mm，60 g/m&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;</td><td>Chemland</td><td>VIT131097</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;显微镜ps-2PFM系统配置&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chameleon Ultra II</td><td>Coherent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FELH0800 - &amp;Oslash;25.0 mm 长通滤光片</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FESH0700 - &amp;Oslash;25.0 mm 短通滤光片</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IDQ100 光子计数雪崩光电二极管&amp;nbsp;</td><td>ID Quantique</td><td></td><td></td></tr><tr><td>多光子短通发射滤光片 720 nm&amp;nbsp;</td><td>Semrock</td><td></td><td></td></tr><tr><td>安装式消色差半波片，690–1200 nm</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Plan Apo 油浸物镜 100×/1.4 NA</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>压电三维载物台</td><td>Piezosystem Jena</td><td></td><td></td></tr><tr><td>偏振分束器</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>S130C - 超薄光电二极管功率传感器，Si，400–1100 nm，500 mW</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;软件&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabView 2018</td><td>National Instruments</td><td></td><td>版本 18.0.1f2</td></tr><tr><td>Matplotlib 库</td><td></td><td></td><td>版本 3.3.2</td></tr><tr><td>NumPy 库</td><td></td><td></td><td>版本 1.19.2</td></tr><tr><td>SciPy 库</td><td></td><td></td><td>版本 1.5.2</td></tr><tr><td>Spyder Python 3 集成开发环境</td><td></td><td></td><td>版本 4.1.5</td></tr></tbody></table>

偏振敏感双光子显微镜用于无标记淀粉样蛋白结构表征

Polarization-Sensitive Two-Photon Microscopy for a Label-Free Amyloid Structural Characterization

与单光子激发相比，双光子激发在生物成像实验中具有优势，因其光毒性更低、组织穿透更深、在密集系统中操作更高效，并且能减少荧光分子的角向光选择效应。因此，在双光子荧光显微镜（2PFM）中引入偏振分析，相较于基于线性光学过程的标准成像方法，能够更精确地确定样品中分子的排列结构。本文重点研究偏振敏感型双光子荧光显微镜（ps-2PFM）及其在复杂生物结构——淀粉样蛋白球晶——内部分子有序性测定中的应用。阿尔茨海默病或帕金森病等神经退行性疾病通常通过检测淀粉样蛋白进行诊断，这类蛋白是由于蛋白质错误折叠过程受阻而形成的聚集体。对其结构的深入研究有助于更好地理解其形成途径，进而推动更灵敏诊断方法的开发。本文展示了适用于牛胰岛素球晶及球形淀粉样蛋白聚集体内部原纤维有序性分析的ps-2PFM技术，并证明该方法能够解析球晶内部原纤维的三维空间组织结构。

本方案详细介绍了用于ps-2PFM测试的淀粉样超结构制备步骤、显微系统的搭建以及对合适样品的测量过程。然而，在进行最终测量之前，必须使用各向同性参考样品对APD进行正确校准，以确保两个探测器上收集到的信号在形状和强度上均对称（图4C）。即使X轴和Y轴探测器测得的信号强度存在微小差异，也应在后续测量尤其是数据分析中作为校正因子予以考虑。样品载入后，若其中含有单个球晶，在偏光显微镜（POM）下呈现如图2B所示的典型马耳他十字图案，再进行2PFM光栅扫描后，所得图像应与图5A所示结果相似，这与已报道的球晶2PFM光栅扫描图像6,7以及其它有序生物分子的扫描结果一致11,12。可以观察到最亮轴的位置可能发生一定变化，这是由于荧光信号强度...

本文介绍了如何应用偏振敏感双光子显微镜来表征无标记淀粉样超结构——球晶内部的局部有序性。同时描述了样品的制备与测量方法、所需装置的组装过程，以及数据分析流程，以获取关于淀粉样纤维局部排列结构的信息。

与单光子激发相比，双光子激发由于具有较低的光毒性、更深的组织穿透能力……，在生物成像实验中更具优势。

我们的目标是开发用于检测称为淀粉样蛋白的蛋白质聚集体的新光学标记物和技术。这些淀粉样蛋白与多种疾病相关，例如阿尔茨海默病和2型糖尿病。因此，为了治愈这些疾病，我们需要能够可视化淀粉样蛋白的技术。我们证明了双光子显微镜可用于检测淀粉样超结构内部淀粉样纤维的取向。该方法不仅可使用淀粉样特异性染料实现，还可利用淀粉样蛋白自身的自发荧光。由于本技术基于非线性光学现象，与单光子荧光显微技术相比，能够减少角度光选择效应，提高轴向分辨率，降低光散射和光毒性，并实现更深的样品穿透。偏振敏感双光子荧光显微镜是一种有前景的工具，可用于成像多种复杂生物结构的内部构造，不仅包括蛋白质聚集体，还包括DNA囊泡和脂质膜。

polarization-sensitive-two-photon-microscopy-for-label-free-amyloid

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本视频介绍了一种使用发光共轭寡噻吩染料——七聚体甲酰基噻吩乙酸（hFTAA）对组织切片中的淀粉样蛋白进行荧光染色的技术。淀粉样蛋白是富含β-折叠结构的异常蛋白质聚集体。在组织样本中检测淀粉样蛋白有助于淀粉样蛋白相关疾病或蛋白质病变的诊断与治疗。...

hFTAA 染色法检测淀粉样沉积物：一种利用基于寡噻吩的荧光染料对组织切片中的淀粉样纤维进行荧光成像的可视化技术

来源：Nyström, S., 等 利用高光谱共聚焦显微镜和荧光寿命成像技术对经发光共轭寡噻吩染色的淀粉样组织进行成像。 J. Vis. Exp.

利用荧光寿命成像显微镜分析组织切片中的淀粉样结构

淀粉样蛋白沉积是多种疾病的特征，并可累及多个不同器官。本文介绍了荧光标记的共轭寡噻吩染色法结合荧光显微镜技术的应用。该染色方法在临床和科研环境中均为检测和研究蛋白质聚集体的有力工具。...

利用高光谱共聚焦显微镜和荧光寿命成像技术对经发光共轭寡噻吩染色的淀粉样组织进行成像

本文介绍了一种通过简单且创新的二次谐波产生显微成像方法，在微管蛋白病模型中检测微管负载的少突胶质细胞的实验方案。...

无标记非线性光学技术用于研究中枢髓鞘中微管蛋白依赖性缺陷

跨膜蛋白结构域之间相互作用的生物物理与生化研究面临诸多技术挑战，首要挑战即获得合适的实验材料。本文介绍了一种用于制备和纯化二硫键稳定的跨膜肽复合物的实验方案，该复合物适用于溶液核磁共振（NMR）及其他分析技术的结构研究。...

用于结构研究的二硫键稳定跨膜肽复合物的制备

8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶活性的时间进程呈双相特征，表现为产物生成的快速爆发相和线性的稳态相。利用淬灭-流动技术，可分别测定爆发相速率和稳态速率，它们对应于8-氧代鸟嘌呤的切除以及糖基化酶从产物DNA上的释放。...

稳态、预稳态与单次转换动力学测量用于DNA糖基化酶活性研究

肽-金属配合物结构与配位测定的1D与2D 1H NMR方法

DNA 折纸是一种通过编程 DNA 分子自组装来制备精确纳米级结构的强有力方法。本文描述了一种利用 DNA...

DNA折纸法制备生物响应型机器人的折叠与表征

本文介绍了一种用于量化化学品在不同材料中传质参数的方法。该过程涉及采用基于逆向分析的扩散模型，对在高真空条件下通过实时质谱记录的蒸气释放谱图进行分析。...

一种用于表征涂料中化学物质传输的逆向分析方法

故意设计的金属有机框架材料的合成、活化与表征具有挑战性，特别是当构筑单元不相容或热力学上不利于目标物相而有利于非期望多晶型时。本文描述了溶剂辅助配体交换、毛细管粉末X射线衍射及活化方法的应用 通过 超临界CO₂2...

功能化金属有机框架的合成与表征

了解偏振敏感双光子显微镜技术用于无标记淀粉样蛋白超结构表征的方法。该技术可检测纤维取向，降低光毒性并实现深层成像，为阿尔茨海默病等疾病研究提供新工具。

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