2023年10月6日
本文介绍了大规模人工饲养巴西黄蝎(Tityus serrulatus Lutz 和 Mello,1922)的成功维持与毒液提取方案,旨在为后续抗蛇毒血清的生产提供毒液,以满足巴西卫生系统的需求。
本方案描述了用于大量提取毒液的蝎子饲养方法,所提取的毒液用于制备中和性马源衍生物免疫球蛋白或抗蛇毒血清。在热带国家,对蝎子抗毒血清的需求量很高,该血清是治疗人类中毒病例的关键手段。饲养过程通过模拟最佳自然条件,实现蝎子的人工圈养。
因此,我们充分考虑了动物福利和良好实验室规范。同时,通过电刺激蝎子尾部进行毒液提取,对动物的伤害极小。该方案使我们在人工饲养条件下所维持的动物数量在10年内实现了指数级增长,从4,000只增加到20,000只个体。
与此同时,已提取足量的毒液用于免疫马匹,以获得含有特异性抗体的血浆,该血浆是制造抗蛇毒血清的起始原料,每年可生产约十万瓶抗蛇毒血清。这种取毒方法与文献中描述的其他方法不同,后者需切除尾刺,从而限制了每只动物可进行取毒的次数。
我们机构技术人员积累的经验使我们能够在不麻醉动物或进行其他侵入性操作的情况下,于一至一个半小时内从 200 到 300 只动物中采集毒液。首先准备用于饲养蝎子的围栏。为了使作为围栏的聚丙烯容器内壁更加光滑,需在其内表面以及容器的上部角落贴上 10 厘米宽的自粘塑料胶带。
然后用美纹纸胶带将工艺纸固定在聚丙烯容器底部的四周边缘。在容器的一侧放置四个纸板托盘作为垂直基质,每个托盘之间插入一块硬纸板隔开。在 enclosure 的另一侧放置一个浅的聚丙烯托盘,内含浸湿的棉花,作为水源。
将蝎子放入准备好的围栏中,并将容器置于保持在24摄氏度的房间内。进行完全维护时,首先将蝎子从水盘中移出,然后使用长镊子将水盘从围栏中取出。
将蝎子放入清洁的饲养箱中。清除饲养箱底部残留的所有蝎子,并将其移至清洁的饲养箱内。然后清除饲养箱中剩余的活体猎物。
将所有一次性基质从饲养箱中移除并妥善丢弃,然后使用0.5%次氯酸盐溶液对可重复使用的物品(如水盘和容器)进行消毒。首先,将蝎子放入聚丙烯材质的群养容器中作为饲养箱。根据蝎子的能量摄入量计算所需饲料的量。
然后统计作为猎物的蟑螂数量。接着在围栏顶部周围涂抹含酒精的碳酸钙,以防止蟑螂逃出围栏。将蟑螂放入围栏内饲养两天。
在取毒当天,先清点饲养箱中存活的蝎子数量,并使用长柄镊子将其转移至玻璃容器中。随后,将毒液提取所需的全部设备摆放于气流柜操作台面上。最后,将电刺激仪的电源线插入电源插座。
然后打开气流柜和电刺激器。在电刺激器设备上设置毒液提取所需的显示参数。使用镊子夹住蝎子的尾部,再用弯头镊子固定其尾刺,并用手将其固定。
固定后,将尾刺直接接触电刺激器的导体,并将毒液滴收集到塑料微量离心管中。用手将尾刺转移至弯头镊子,轻轻将蝎子放回玻璃容器底部。待所有蝎子完成取毒后,将其放回饲养箱中。
将毒液在零下20摄氏度保存,直至冻干。巴西黄蝎(Tityus serrulatus)每年产生的液态毒液超过80克,相当于超过13克的冻干毒液。每只动物平均挤出的毒液量、每月提取的毒液量以及每月提取的蝎子数量等生产指标均呈现积极上升趋势,表明其生产能力良好。
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本研究详细介绍了巴西黄蝎(Tityus serrulatus)的饲养维护与毒液提取方案,旨在支持巴西卫生系统的抗蛇毒血清生产。优化后的操作流程在兼顾动物福利的同时,提高了毒液提取的产能。
Tityus serrulatus 的标准化人工饲养与毒液采集是满足大规模公共卫生需求的抗蛇毒血清可靠生产的基础。完善的饲养与采集方案可确保毒液的稳定供应,支持下游免疫球蛋白的生产及产品线的持续性。这些实践直接影响生物制药研发中生物制剂工作流程的可扩展性与可重复性。
所述方案将毒液提取定位为抗蛇毒药物生产流程中连接生物来源与免疫球蛋白制造的基础步骤。