Name: 采用中药蛋糕分离艾灸治疗慢性肾功能衰竭大鼠 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-22T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: 了解中药蛋糕分离艾灸治疗慢性肾功能衰竭大鼠的方法。该实验平台支持多穴位艾灸操作，在保障动物福利的同时有效减少肾纤维化与炎症反应，为针灸研究提供可靠的技术支持。

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我们感谢黄副教授和崔女士对本文的严格指导与支持。本研究得到以下资助：1. 国家自然科学基金委员会（NSFC），82160938， &#34;从交互效应探讨隔饼灸治疗肾间质纤维化的机制研究&#160; TGF-β1介导的ERK和Smad信号通路&#34;；2. 云南省卫生健康委员会 &#34;2020年高层次中医药人才&#34;孵化项目（云卫中医发展〔2021〕1号）；3. 云南省科学技术厅—中医药应用基础研究联合专项资金（No.2019FF002-022，No.202101AZ70001-286，No.202301AZ070001-030）；4.&#160;中国云南针灸推拿防治脑病创新团队（2023）

该方案遵循云南中医药大学的动物护理指南，并已获得云南中医药大学动物伦理委员会的批准。实验动物福利与伦理审查编号为 R-062021G098。
1. 艾灸实验平台装置（图1）
注意：我们根据大鼠前后肢之间的距离及其行为学和生理学特征，设计并构建了大鼠艾灸实验平台装置。
<ol>
	<li>艾灸装置的尺寸
	<ol>
		<li>使用防撞板材料和木板制作装置；整体尺寸为 52 cm 长 × 23.5 cm 宽 × 64 cm 高，装置底部面积为 1222&#160;cm2. 
		注意：艾灸操作在此高度的平台上进行，可使大鼠保持安静。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>艾灸装置的主体框架
	<ol>
		<li>使用防撞板材制作整个装置的底座：底板尺寸为长52 cm、宽23.5 cm，表面为白色。确保底座占装置总重量的较大比例，以稳定整个装置。</li>
		<li>使用实木制作设备的 elevated platform，尺寸为 60&#160;厘米高。 
		注意：这是整个仪器的主框架，用于稳定整个装置，并支撑大鼠直立放置。</li>
		<li>在高台上方设置五个放置槽，尺寸为 10 cm 长 × 6 cm 宽 × 10 cm 高。使用&#160;用于分隔放置槽的间隔板（10 cm 长 × 1.3 cm 宽 × 10 cm 高），其尺寸对应大鼠直立时前肢与后肢之间的距离。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>艾灸装置的组成部分
	<ol>
		<li>在放置槽顶部固定两条不锈钢条。每条固定的不锈钢条为直角等边钢条，长40 cm，宽1.4 cm（两侧宽度相同），带有15个孔。固定条上的三个孔对应每个槽位，用于固定李子形手柄螺钉和移动软管。相邻孔之间的距离为7&#160;厘米</li>
		<li>将可调梅花手柄螺钉置于由304不锈钢制成的隔热网两端，并连接至固定隔热网和固定条。</li>
		<li>将每个放置槽的上端与由镀锌板框架包围的可升降隔热网连接，并将该框架与两端的梅花手柄螺钉相连。在隔热网中部放置304不锈钢圆形网片材料&#160;防止艾灰掉落烫伤大鼠，并固定大鼠以方便进行艾灸。</li>
		<li>将不锈钢可动软管（34 cm长）的底端用不锈钢固定条固定，顶端用管夹连接板固定。 
		注意：可移动的软管便于在悬灸操作过程中调整艾条的位置。</li>
		<li>使用铝合金制成的管夹将不锈钢可动软管与艾灸夹连接。</li>
		<li>将不锈钢艾灸夹连接至管夹连接板，可同时固定8-10根艾条进行艾灸。 
		注意：可移动软管、管夹连接板和艾灸夹可用于大鼠悬灸操作。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 建立大鼠慢性肾衰竭模型
<ol>
	<li>将24只SPF级SD雄性大鼠（3-4周龄，体重180-200 g）适应性饲养1周。饲养环境温度保持在18-24 °C，相对湿度40-70%，光照周期为12小时光照/12小时黑暗。每笼饲养6只，自由饮水和摄食普通饲料。</li>
	<li>建立慢性肾功能衰竭（CRF）大鼠模型。根据随机数字表并按照本方案，选取6只大鼠作为对照组，其余18只作为模型组。对照组（n = 6）给予蒸馏水（10 mL∙kg-1∙day-1）和普通饲料，模型组（n = 18）给予腺嘌呤混悬液（150 mg kg-1∙day-1）和高蛋白饲料，连续干预21天。</li>
	<li>每日观察并记录大鼠体重、精神状态及饮食情况。21天干预结束后，所有动物禁食12小时，随后进行眼眶采血。</li>
	<li>采集眼眶血液样本。
	<ol>
		<li>用异氟烷短暂麻醉大鼠。用非优势手抓住大鼠背部，用拇指和食指对称固定大鼠头部和面部，充分暴露一侧眼角，保持该体位。</li>
		<li>用优势手将长度为3 cm的熔点毛细管夹在拇指与食指之间，缓慢旋转毛细管，以45°角插入大鼠内眼角静脉丛，直至血液缓慢流出毛细管。</li>
		<li>将150-200 µL血液收集至0.5 mL抗凝采血管中，轻柔拔出毛细管，并用棉球压迫眼眶止血。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>迅速充分震荡抗凝管，使用全自动生化分析仪检测血浆肌酐（Scr）和血尿素氮（BUN）。 
	注：Scr和BUN水平升高表明CRF模型建立成功。</li>
	<li>将大鼠分为四组：A：对照组，6只，不予任何处理；18只模型大鼠分为三组：B：（模型组，不给予药物或艾灸治疗）、C：（氯沙坦钾组，经灌胃针12 G给予2.33 mg∙kg-1∙day-1）和D：（隔药饼灸组，在双侧Shenshu [B23] 和双侧Pishu [B20] 穴位施以隔药饼灸）。</li>
</ol>
3. 治疗阶段
注意：A组和B组不给予任何处理，而C组和D组每天处理一次，持续24天，每处理12天后休息2天。
<ol>
	<li>治疗前的准备工作
	<ol>
		<li>准备300 g黄芪干根、300 g党参干根、200 g熟地黄干根、100 g炙淫羊藿草和100 g 山茱萸混合这些粉末。</li>
		<li>放入500 g的 艾叶 将艾叶放入中药粉碎机（转速34,000转/分钟）粉碎5分钟，将粉碎后的粉末转移至平板上，用600目筛网过筛。经过两轮筛分后，弃去粗艾绒，将细艾绒装入袋中备用（图2).</li>
		<li>用细艾绒填充模具，制成直径0.5 cm、高0.5 cm的小艾炷。或者，也可用双手拇指与食指揉搓艾绒，捏成艾炷图3A).</li>
		<li>通过将一支5 mL注射器切割成四个厚度为0.5 cm的圆形塑料环，并将这四个环粘合在同一水平面上（呈边长为26 cm的正方形四角），制备中药饼模具&#160;毫米 图 3D).</li>
		<li>按1:1比例将药粉与水混合制成药泥，填入中药饼模具中图 3E将药饼留在模具中，并存放于干燥处。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>标记穴位
	<ol>
		<li>按以下方法定位穴位： 申述 （B23），第二腰椎两侧，每侧一个穴位； 皮书 （B20），两侧第11胸椎的肋间各一穴位，每侧一个穴位图 4). 
		注意：有关穴位位置，请参考 实验动物针灸操作手册20.</li>
		<li>用厚橡胶手套戴在非惯用手，轻轻罩住大鼠头部，用惯用手定位大鼠背部的穴位，然后用彩色标记笔标记穴位。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>放置大鼠
	<ol>
		<li>戴上厚橡胶手套。用惯用手的拇指和其他四指轻轻夹住大鼠背部和颈部的皮肤。用非惯用手的拇指和食指轻轻夹住大鼠的尾巴。</li>
		<li>将大鼠提起，使大鼠头部对准放置位置&#160;特殊艾灸平台的插槽，并缓慢将大鼠向前移动，确保大鼠前爪接近放置位置的边缘&#160;狭缝以及大鼠爬入狭缝的行为。 
		注意：开始前对整个艾灸平台进行消毒。抓取大鼠前，轻轻触摸大鼠背部或轻声与其说话以使其镇静。将隔热网高度从低位（未使用时）调节至最高，便于大鼠进入。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>大鼠固定
	<ol>
		<li>用双手的拇指和食指分别捏住保温网两端的梅花螺钉。旋松梅花螺钉，将保温网降至适当位置，贴近大鼠背部但不造成压迫，然后拧紧螺钉。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>放置艾绒锥和药饼。
	<ol>
		<li>将制备好的药饼模具根据大鼠体表穴位标记，放置于对应双侧脾俞（B20）和肾俞（B23）穴位的隔热网上。共四个穴位，每个穴位对应一个药饼。</li>
		<li>将艾绒锥平稳地放置在药饼上。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>艾灸
	<ol>
		<li>用打火机点燃艾炷，开始进行艾灸，直至艾炷完全燃尽，余热自然散去（湿药饼变干）。</li>
		<li>在同一个穴位上更换新的艾炷和药饼，继续施灸，直至艾炷燃尽且药饼变干。每个穴位共重复操作5次。 
		注意：在更换新的艾炷和药饼之前，需对可拆卸的隔热网进行清洁和消毒。</li>
		<li>每个穴位灸治五壮后，将艾炷和药饼熄灭并浸入盛有水的废弃物容器中。 
		注意：每个穴位施以五壮艾灸；每壮艾炷燃尽后可更换新的艾炷。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将大鼠放回笼中
	<ol>
		<li>将空的饲养笼置于大鼠前方，靠近艾灸平台放置槽的下端，并保持静止。轻拍大鼠臀部，使其从放置槽移动至饲喂笼内。待大鼠进入后，放下笼子。用惯用手抓住大鼠背部的毛发，牢固固定大鼠，并将其放在地面上进行进一步观察。</li>
		<li>观察大鼠是否有呼吸急促、情绪是否稳定、皮肤表面是否被烫伤。若无异常，将其放回笼中；若出现烫伤，立即在皮肤表面涂抹烫伤药膏，并将其置于单独的笼子中。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. 取样阶段
<ol>
	<li>经过24天治疗后，准备&#160;大鼠饲养12小时&#160;采样前需禁食数小时。</li>
	<li>将异氟烷倒入气体麻醉机中，使用2-3%异氟烷对大鼠进行麻醉。2-3分钟后，确认反射消失（用手术镊夹住尾巴以检查是否无任何反射），并继续&#160;存在&#160;心跳，并以1-1.5%异氟烷转为维持麻醉。</li>
	<li>从准腹主动脉插入针头，采集5 mL血液。将血液静置2 h后，在2490 × g 4 °C下离心10分钟，将血清上清液转移至1.5 mL微量离心管中用于后续分析。</li>
	<li>在维持麻醉状态下对大鼠进行深度麻醉，经腹主动脉取血。随后通过颈椎脱位法处死大鼠。</li>
	<li>用手术剪刀和镊子剥离双侧肾筋膜及脂肪组织，收集双肾组织，并用0.9%生理盐水冲洗。称量左、右肾重量，记录重量及形态学特征。</li>
	<li>将左肾切成六部分，放入含有4%多聚甲醛的50 mL离心管中浸泡、固定并保存，以保护肾组织。用一把刀沿纵向和两把刀沿横向将右肾切成六块，分别放入六个2 mL冻存管中，立即置于液氮中，随后转移至-80 °C冰箱中保存。</li>
</ol>
5. 检测阶段
<ol>
	<li>取适当大小的右肾组织用于蛋白质提取、凝胶电泳、转膜、封闭、一抗孵育、二抗孵育、化学发光、显影、定影及胶片扫描。</li>
	<li>使用凝胶图像分析系统（例如 Image-Pro Plus 6.0）分析条带的灰度值，并计算每种蛋白质的含量。</li>
	<li>将左肾组织进行脱水、透明、石蜡包埋、切片（厚度为 4 µm），经苏木精-伊红染色和马松三色染色后，在光学显微镜下以 200 倍放大观察肾组织的病理变化21。</li>
</ol>

A Moxibustion Platform for Herbal Cake-Based Treatment of Rats with Renal Failure

<ol><li>Run-Ming, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+and+development+of+Chinese+acupuncture+and+moxibustion%5BTitle%5D)+AND+%22Ancient+Science+of+Life%22%5BJournal%5D)">The origin and development of Chinese acupuncture and moxibustion.</a> Ancient Science of Life. 4 (4), 224-228 (1985).</li>
<li>Zhang, Q. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+QW+%22Moxibustion+Theories+of+Different+Schools%22">Moxibustion Theories of Different Schools</a>. , China Press of Traditional Chinese Medicine. Beijing. (2016).</li>
<li>Ren, H. W., Cai, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+discuss+on+treating+febrile+diseases+with+moxibustion%5BTitle%5D)+AND+%22China%27s+Naturopathy%22%5BJournal%5D)">Brief discuss on treating febrile diseases with moxibustion.</a> China's Naturopathy. 29 (02), 1-2 (2021).</li>
<li>Ouyang, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moxibustion+may+delay+the+aging+process+of+Wistar+rats+by+regulating+intestinal+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy+%3D+Biomedecine+%26+Pharmacotherapie%22%5BJournal%5D)">Moxibustion may delay the aging process of Wistar rats by regulating intestinal microbiota.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy = Biomedecine & Pharmacotherapie. 146, 112147(2022).</li>
<li>Qi, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiome+alterations+in+colitis+rats+after+moxibustion+at+bilateral+Tianshu+acupoints%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Gut microbiome alterations in colitis rats after moxibustion at bilateral Tianshu acupoints.</a> BMC Gastroenterology. 22 (1), 62(2022).</li>
<li>Wang, G. Y., Meng, Z., Xu, Q. Y., Dou, L., Cui, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scar+moxibustion+Zusanli+treatment+of+diarrhea-predominant+irritable+bowel+syndrome+20+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Scar moxibustion Zusanli treatment of diarrhea-predominant irritable bowel syndrome 20 cases.</a> Modern Chinese Medicine. 33 (03), 79-80 (2013).</li>
<li>Xue, K. Y., Fu, J., Lan, L., Tang, J. X., Cui, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meta-analysis+of+the+efficacy+and+safety+of+barrier+moxibustion+in+the+treatment+of+chronic+fatigue+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Guizhou+University+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Meta-analysis of the efficacy and safety of barrier moxibustion in the treatment of chronic fatigue syndrome.</a> Journal of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine. 44 (03), 53-59 (2022).</li>
<li>Liu, J. W., Tian, Y., Peng, Y. Y., Ye, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observation+on+moxibustion+sensitivity+and+curative+effect+of+thermal+sensitive+moxibustion+and+knee+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Acupuncture+%26+Moxibustion%22%5BJournal%5D)">Observation on moxibustion sensitivity and curative effect of thermal sensitive moxibustion and knee osteoarthritis.</a> Chinese Acupuncture & Moxibustion. 41 (10), 1063-1068 (2021).</li>
<li>Liu, W. A., Chang, X. R., Liu, M., Zhang, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+herbal-cake-separated-moxibustion+sized+cones+at+different+dosages+on+blood+fat+and+hemorheology+in+patients+with+hyperlipemia%5BTitle%5D)+AND+%22Liaoning+Journal+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effects of herbal-cake-separated-moxibustion sized cones at different dosages on blood fat and hemorheology in patients with hyperlipemia.</a> Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine. 40 (9), 1787-1790 (2013).</li>
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<li>Huang, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+herbal+cake-partitioned+moxibustion+on+renal+function+and+expression+of+renal+connective+tissue+growth+factor%2C+integrin-linked+kinase+and+bone+morphogenetic+protein-7+in+chronic+renal+failure+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Zhen+Ci+Yan+Jiu+%3D+Acupuncture+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of herbal cake-partitioned moxibustion on renal function and expression of renal connective tissue growth factor, integrin-linked kinase and bone morphogenetic protein-7 in chronic renal failure rabbits.</a> Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 44 (8), 577-582 (2019).</li>
<li>Li, L. R., Huang, X. X., Wei, T. T., Zhang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+progress+of+TCM+external+treatment+for+chronic+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Guangxi+University+of+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Research progress of TCM external treatment for chronic renal failure.</a> Journal of Guangxi University of Chinese Medicine. 23 (04), 51-54 (2020).</li>
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</ol>

作者声明不存在利益冲突。大鼠艾灸实验平台装置的专利&#160;号为 ZL202320880924.X。

临床上，&#160;针灸治疗要求患者保持平静、放松，避免过度愤怒和饥饿，强调“平和”的状态。然而，目前的&#160;针灸实验实践仍以束缚动物为前提，这不仅违背了实验的初衷，也不符合临床实际。束缚动物会导致动物恐惧和愤怒，迅速升高实验动物体内肾上腺素等激素水平，从而影响实验结果22。在进行动物针灸实验操作时，必须尽快解决这些问题，以确保实验的准确性并保障动物福利。艾灸对大鼠的刺激较强，加之其性情较为暴烈，若实验过程中无法对大鼠进行安全有效的固定，可能导致操作者受伤、增加疾病传播风险，并影响实验数据的准确性。由于中药饼隔姜灸治疗时间较长、疗程较长，因此需要一种能够耐受长期艾灸的固定装置。研究团队发明的大鼠艾灸实验平台能够克服这一难题，更贴近临床实际。
实验过程中需牢记以下要点。首先，泥的干湿程度目前尚无准确的定量标准。文中提到的泥中粉末与水的比例约为1:1，仅为大致比例，具体数值取决于实验大鼠的数量及操作者的经验。制备时需使泥干燥但不结块，湿润但不挤出水分；过湿或过干均会影响实验结果。使用模具制成的艾炷相对较松，容易散开，但仍需用力捏紧。...

艾灸随着火的应用而出现。古代医生偶然发现，身体某些部位经火灼烧后可缓解不适症状。经过长期实践，逐渐选用&#34;Artemisiae Argyi Folium&#34;作为主要的艾灸材料1。艾灸是中医学的重要组成部分，与中药汤剂和穴位针刺并列，这三大中医疗法在多种疾病中被广泛应用。
早在《黄帝内经》时期，中国医生就常使用艾灸疗法治疗疾病。艾叶（Artemisiae Argyi Folium）是一种具有温经止血、散寒止痛功效的中草药，常用于中医外治法，也可用于中药汤剂的配制。艾灸是一种外治法2，将艾绒或其他药物置于体表穴位上燃烧，利用艾火的温和热力及药物作用来治疗疾病3。
作为常用的治疗方法之一，艾灸已在临床实践中广泛应用。随着艾灸治疗应用范围的不断扩大，越来越多的研究致力于探讨艾灸的作用机制，并开展了大量动物实验4,5。
艾灸方法可分为直接艾灸和间接艾灸。将艾炷直接置于皮肤上施灸的方法称为直接艾灸。间接艾灸则是在艾炷与穴位之间垫上药物或其他材料。艾灸可用于治疗多种疾病，如肠易激综合征6、慢性疲劳综合征7和膝骨关节炎8。
本文主要探讨隔药饼灸的作用机制。隔药饼灸属于间接灸法，是将艾炷置于药饼上进行施灸的一种方法。目前研究表明，艾炷燃烧产生的红外辐射和温热效应、艾叶焦油的化学成分以及对穴位的刺激，可通过增强药物向穴位的渗透而达到防治疾病的效果9。因此，隔药饼灸主要通过艾灸、药物和穴位三者共同产生&#34;综合作用&#34;10。
既往研究表明，艾灸是治疗慢性肾功能衰竭（CRF）的有效方法11,12,13,14,15，但其潜在作用机制尚不明确。我们一直致力于慢性肾功能衰竭的临床与动物研究。目前，我们正基于内质网应激介导的蛋白激酶RNA样内质网激酶（PERK）信号通路，开展艾炷隔药饼灸对慢性肾功能衰竭大鼠的实验研究。通过本项动物实验，旨在初步阐明艾灸治疗慢性肾脏病的潜在作用机制。在本实验中，对大鼠实施艾炷隔药饼灸&#160;是关键操作步骤。
在先前的实验16中，使用饲养笼的盖子来捆绑并固定大鼠。为了保护操作人员，在捆绑前需要对大鼠进行麻醉。然而，Sprague-Dawley（SD）大鼠容易产生恐惧和惊吓反应，捆绑操作极易引起大鼠躁动不安。常出现大鼠体位固定不良、穴位定位偏移、实验时间延长以及操作人员受伤等问题。
此外，若束缚过紧，容易导致大鼠呼吸困难，不利于动物福利；若束缚过松，大鼠易发生挣扎和身体移动，导致艾炷脱落并灼伤皮肤，影响实验结果。根据文献报道，动物实验中仍普遍采用束缚方式16,17,18，且大多数实验装置仅能实现固定，难以兼顾艾灸等其他技术的实施19。因此，在确保动物福利和实验规范性与效率的前提下，实现固定与艾灸功能的整合，已成为研究人员关注的重点方向之一。

<table><tbody><tr><td>0.5 mL 肝素锂生化管</td><td>石家庄康为士医疗器械有限公司</td><td>220518</td><td>血液采集</td></tr><tr><td>0.9%生理盐水</td><td>昆明南疆制药有限公司</td><td>/</td><td>冲洗</td></tr><tr><td>1.5 mL Eppendorf管</td><td>北京兰杰科生物科技有限公司</td><td>12100024</td><td>子包装</td></tr><tr><td>2 mL 冻存管</td><td>巴洛克生物技术有限公司</td><td>88-0151</td><td>包装好的肾脏&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>4 &amp;deg;C型冰箱</td><td>海尔集团有限公司</td><td>BCD-236WDGL</td><td>储存</td></tr><tr><td>5 mL 注射器</td><td>四川新世纪医用高分子制品有限公司</td><td>20211115</td><td>灌胃&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>&amp;nbsp;50 mL 离心管</td><td>北京朗科生物技术有限公司</td><td>CT-002-50A</td><td>包装好的肾脏&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>12 G 灌胃针</td><td>北京中科恒天科技有限公司</td><td>12#55mm</td><td>灌胃&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>96孔板</td><td>北京兰杰科生物科技有限公司</td><td>11510</td><td>蛋白质浓度测定</td></tr><tr><td>&amp;nbsp;-80 &amp;deg;C 冷冻室</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>991</td><td>储存</td></tr><tr><td>腺嘌呤</td><td>北京博奥拓技术有限公司</td><td>A0607</td><td>药物成型</td></tr><tr><td>BCA 显色剂</td><td>碧云天生物工程有限公司</td><td>P0010</td><td>蛋白质浓度测定</td></tr><tr><td>BCL-2蛋白抗体试剂</td><td>Abcam 上海贸易有限公司</td><td>ab196495</td><td>蛋白质印迹法</td></tr><tr><td>Caspase-3 蛋白抗体试剂</td><td>Abcam 上海贸易有限公司</td><td>ab184787</td><td>蛋白质印迹法</td></tr><tr><td>化学发光成像系统</td><td>上海勤翔科学仪器有限公司</td><td>100240073</td><td>蛋白质条带成像</td></tr><tr><td>中药粉</td><td>云南中医药大学第二附属医院</td><td>/</td><td>治愈</td></tr><tr><td>直接上样彩色预染蛋白分子量标准</td><td>北京康润诚业生物科技有限公司（GenStar）</td><td>M221</td><td>蛋白质印迹法</td></tr><tr><td>一次性采血针</td><td>中国台湾柳营三里医疗科技发展有限公司</td><td>YZB/国 0411-2010</td><td>采血</td></tr><tr><td>一次性人体静脉血液样本采集容器</td><td>中国台湾柳营三里医疗科技发展有限公司</td><td>20210901</td><td>血液采样</td></tr><tr><td>DK-30 自动制冰机</td><td>河南兄弟仪器设备有限公司</td><td>SHDX0023</td><td>制冰</td></tr><tr><td>ECL 化学发光底物试剂盒</td><td>北京兰杰科生物科技有限公司</td><td>BL520B</td><td>将曝光胶片中的潜影转化为可见影像</td></tr><tr><td>电子天平</td><td>上海然昊电子有限公司</td><td>JCS-31002C</td><td>测量大鼠的体重和肾脏重量</td></tr><tr><td>冷冻切片机&amp;nbsp;</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>HM525 NX</td><td>切片机</td></tr><tr><td>全自动生化分析仪</td><td>天津微纳芯科技有限公司</td><td>PV2112001Z02410305</td><td>肾功能检测</td></tr><tr><td>气体麻醉系统</td><td>中实科技有限公司</td><td>ZS-MV-1</td><td>麻醉</td></tr><tr><td>甘氨酸</td><td>北京索莱宝科技有限公司</td><td>货号 G8200</td><td>运行缓冲液，Western 转膜缓冲液</td></tr><tr><td>HE染色试剂</td><td>北京索莱宝科技有限公司</td><td>G1120&amp;nbsp;</td><td>染色</td></tr><tr><td>高蛋白饲料</td><td>江苏协同生物工程有限公司</td><td>XT19008</td><td>喂养</td></tr><tr><td>智能型实验室超纯水机</td><td>重庆华畅水处理工程有限公司</td><td>15L</td><td>过滤</td></tr><tr><td>内参 &amp;beta;-肌动蛋白</td><td>江苏秦科生物研究有限公司</td><td>AF7018</td><td>蛋白质印迹法</td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>江苏中牧倍康药业有限公司</td><td>20220701</td><td>麻醉</td></tr><tr><td>液氮</td><td>昆明博泰干冰销售有限公司</td><td>/</td><td>肾脏组织冷冻</td></tr><tr><td>氯沙坦钾片</td><td>默克雪兰诺 &amp;默沙东（中国）投资有限公司</td><td>J20180054</td><td>治愈</td></tr><tr><td>低温高速组织研磨仪</td><td>武汉赛维尔生物科技有限公司</td><td>SKZ3F20200191</td><td>组织研磨</td></tr><tr><td>马松染色试剂盒</td><td>北京索莱宝科技有限公司</td><td>G1340</td><td>染色</td></tr><tr><td>甲醇</td><td>广东光华科技股份有限公司</td><td>20220519</td><td>Western 转膜缓冲液</td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra</td><td>博乐生命医药产品（上海）有限公司</td><td>552BR 233193</td><td>电泳</td></tr><tr><td>艾灸</td><td>云南中医药大学第二附属医院</td><td>/</td><td>治愈</td></tr><tr><td>Multiskan Spectrum 微孔板分光光度计</td><td>TECAN</td><td>火花</td><td>检测组织蛋白的吸光度和浓度</td></tr><tr><td>手术剪</td><td>张家港市金丰鹿刀切割厂</td><td>201118</td><td>切开皮肤</td></tr><tr><td>多聚甲醛</td><td>北京兰杰科生物科技有限公司</td><td>BL539A</td><td>固定组织</td></tr><tr><td>PERK蛋白抗体试剂</td><td>上海普迈生物科技有限公司（CST中国代理商）</td><td>3192</td><td>蛋白质印迹</td></tr><tr><td>正荧光显微镜</td><td>卡尔·蔡司苏州有限公司</td><td>5446000456</td><td>拍摄图片</td></tr><tr><td>预制胶水</td><td>德润诚（北京）生物科技有限公司（ACE中国代理）</td><td>B230418</td><td>蛋白质印迹法</td></tr><tr><td>ProteinFind 山羊抗兔 IgG(H+L)，HRP 标记</td><td>上海鼎然电子科技有限公司（TRAN）</td><td>HS101</td><td>蛋白质印迹法</td></tr><tr><td>研磨机</td><td>合肥荣事达小家电有限公司</td><td>RS-FS1401</td><td>粉碎的中药</td></tr><tr><td>PVDF膜</td><td>默克密理博公司&amp;nbsp;</td><td>IPVH00010&amp;nbsp;</td><td>蛋白质印迹</td></tr><tr><td>冷藏离心机</td><td>Hettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTD</td><td>MIKRO 220R</td><td>离心</td></tr><tr><td>RIPA 裂解液</td><td>北京索莱宝科技有限公司（Solarbio）</td><td>R0010</td><td>裂解组织</td></tr><tr><td>毛细管采样</td><td>江苏康健华医疗器械有限公司</td><td>20160157</td><td>内眦取血</td></tr><tr><td>烫伤膏（紫连膏）</td><td>云南省中医医院</td><td>/</td><td>用于治疗艾灸引起的烫伤</td></tr><tr><td>脱脂奶粉</td><td>广州赛国生物科技有限公司（BIOFROXX）</td><td>1172GR500</td><td>Western 封闭缓冲液</td></tr><tr><td>手术刀片</td><td>上海医疗器械有限公司</td><td>JOBO10</td><td>切口肾脏组织</td></tr><tr><td>手术刀柄</td><td>上海医疗器械有限公司</td><td>J11010</td><td>安装刀片</td></tr><tr><td>TS-200 轨道摇床</td><td>海门麒麟铃制造有限公司</td><td>TS-8S</td><td>凝胶固定</td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>MedChemExpress</td><td>HY-Y1819</td><td>&amp;nbsp;TBST&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>镊子</td><td>上海医疗器械有限公司</td><td>JD1050&amp;nbsp;</td><td>夹取艾绒</td></tr><tr><td>兽药*微核心肾功能检测试剂盘</td><td>天津微纳芯科技有限公司</td><td>47031-35.5-0145-0227-62-220750</td><td>肾功能检测</td></tr></tbody></table>

使用隔药饼灸法治疗慢性肾衰竭大鼠

Using Herbal-Cake-Separated Moxibustion for the Treatment of Rats with Chronic Renal Failure

在临床实践中进行艾灸时，受试者需要保持情绪稳定和体位舒适，以避免艾灰掉落、烫伤皮肤以及疗效不佳等问题。在大鼠艾灸实验中也存在类似问题。为了模拟临床实践，动物实验中需要引入一种实验装置，即具有固定大鼠与同步实施艾灸治疗功能的艾灸装置，使实验大鼠在非麻醉状态下能够安静、舒适地接受艾灸治疗。
本研究团队设计了一种大鼠艾灸实验平台。该装置由木板框架、支撑底板、多个固定组件和分隔组件构成，能够实现对大鼠进行无束缚艾灸的操作模式，避免使用麻醉和造成烫伤，同时暴露背部多个穴位。该操作可避免对大鼠及操作人员造成身心损伤，提高研究效率，进一步推动艾灸动物实验的发展与研究。
该装置结构简单，易于操作和推广，设计全面且具有创新性，可重复使用，适用于以艾灸为主的实验大鼠研究。本文主要介绍用于大鼠艾灸的实验平台装置的结构、利用该装置进行实验大鼠隔药饼灸的基本操作流程，并描述大鼠慢性肾功能衰竭（CRF）模型的建立方法及典型的实验结果。

肾脏形态学 
如图所示 图5与其他组相比，第X组肾脏的大小、颜色和质地 D （隔药饼灸组）的指标更接近于正常组。模型组和氯沙坦钾组的肾脏形态显示出不同程度的白色纤维化。
肾脏重量 
图6 表明A组左肾重量与B组存在显著差异，说明慢性肾功能衰竭（CRF）模型建立成功。A组左肾重量 D 更接近于第2组 A，而各组左肾重量 B 和 C 与对照组相比具有显著差异 D.
B组的右肾重量与A组相比存在显著差异，表明慢性肾功能衰竭（CRF）模型...

艾灸实验平台能够无束缚地固定大鼠，使大鼠在清醒状态下接受多穴位艾灸，既保障大鼠福利，保护操作人员安全，又确保治疗效果，提高实验效率。

在临床艾灸操作过程中，受试者需保持情绪稳定、体位舒适，以避免艾灰掉落等问题……

我们研究了隔药饼灸对慢性肾衰竭大鼠的影响。本实验旨在探讨隔药饼灸的作用机制。该方案的优点在于，大鼠在非束缚、无麻醉的条件下接受艾灸，使动物实验更接近临床实际。艾灸平台的应用不仅保护了大鼠的动物福利，还简化了艾灸操作流程，节省了操作人员的时间和精力，在一定程度上推动了动物艾灸实验的发展。未来，本实验室将进一步拓展该平台的使用范围，探索实验大鼠的针灸效应，在使用大鼠并保持相同条件的情况下，开展利用该装置与其他艾灸方法在大鼠身上进行艾灸效果的对比研究。开始制作设备时，使用抗压板材料和木板。构建机架时，用白色表面的抗压板制作设备底座，尺寸为52厘米×23.5厘米。用实木制作高60厘米的抬高平台。在 elevated platform 上方设置五个放置槽。使用间隔板将放置槽分隔开，间隔距离对应大鼠直立时前肢与后肢之间的距离。接着，在放置槽顶部固定两条不锈钢条，每条不锈钢条上设有15个用于固定组件的孔。固定条上的三个孔对应每个插槽，用于固定 plum 柄螺丝和移动软管。相邻孔之间的距离为七厘米。每个放置插槽的上端连接一个可升降的隔热网，隔热网周围由镀锌板框架包围。将可调节的梅花手柄螺钉安装在由304钢制成的隔热网两端。在隔热网中部插入304不锈钢圆形网状材料。使用不锈钢固定条将不锈钢可动软管的底端固定，上端则与管夹连接板相连。将不锈钢艾灸夹连接到管夹连接板上，可同时固定8至10根艾条进行艾灸。开始时，将大鼠放置于实验台上，用非优势手佩戴橡胶手套轻轻罩住大鼠头部。然后用优势手确定大鼠背部的穴位。找到双侧第二腰椎旁的肾俞穴（B23）以及双侧第11胸椎棘突下旁开的脾俞穴（B20）。用彩色标记笔标出这些穴位。接下来，用惯用手的拇指和手指轻轻捏住大鼠背部和颈部的皮肤。同时，用非惯用手的拇指和食指轻轻捏住大鼠的尾巴。保持此姿势将大鼠提起，并缓慢向前移动。将大鼠的头部对准艾灸平台上的放置槽。确保大鼠的前爪靠近放置槽边缘，使大鼠能够爬入槽内。随后，用双手的拇指和食指分别按住隔热网两端的梅花螺钉。拧开梅花螺钉，将隔热网降至靠近大鼠背部的适当位置，然后拧紧螺钉以固定大鼠。将含有药饼的模具放置在隔热网上，使其位置对应于脾俞穴和肾俞穴。然后将艾炷平稳地放置在药饼上。接着用打火机点燃艾炷，开始进行艾灸，直至艾炷完全燃尽，余热自然散去。通过检查湿润的药饼是否已完全干燥，确认操作完成。更换烧尽的艾柱和药饼，继续进行艾灸，直至艾柱燃尽、药饼变干。操作完成后，将艾柱和药饼放入盛有水的废物缸中熄灭。在大鼠前方放置一个空的饲养笼，靠近艾灸平台放置槽的下端，并保持笼体静止。轻轻拍打大鼠臀部，使其从放置槽移动至喂食笼。待大鼠进入后，放下笼子。用惯用手抓住大鼠背部的毛发。牢固地抓住大鼠，将其放置在实验台上。观察大鼠是否有呼吸急促、情绪是否稳定，以及皮肤表面是否有烫伤。若无异常，将大鼠放回笼中。经过隔药饼灸治疗后，治疗组大鼠的肾脏在大小、颜色和质地方面与对照组大鼠相似，而慢性肾功能衰竭大鼠的肾脏则出现白色纤维化。此外，与慢性肾功能衰竭大鼠相比，治疗组大鼠的Bcl-2表达上调，而PERK和Caspase-3表达下调，表明细胞凋亡减少。同时，H&E染色显示，治疗组炎性细胞浸润较慢性肾功能衰竭大鼠减少。同样，Masson染色显示胶原纤维沉积减少，表明该操作具有抗纤维化作用，因此可用于治疗肾功能衰竭。

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医学

采用中药蛋糕分离艾灸治疗慢性肾功能衰竭大鼠

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显微镜下囊肿切除术治疗附睾囊肿患者

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使用隔药饼灸法治疗慢性肾衰竭大鼠

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