全面分析脑血栓细胞成分的方法

我们的研究主要集中在脑血栓。许多研究表明，脑部血凝块的细胞成分与脑血栓的诊断、治疗及预后相关。在本研究中，我们建立了一种分析脑部血凝块细胞成分的新方法。

分析脑血栓中细胞成分的一个挑战是从血栓中释放出完整的细胞。这是因为交联的纤维蛋白紧密包裹着血栓中的血细胞。目前研究血栓细胞成分的方法主要基于原位染色，这种方法不适合对细胞成分进行全面研究。

相反，我们的方法能够对脑血栓中的细胞成分进行定性和定量分析。该方法利用纤溶酶降解血栓中的纤维蛋白，从而释放出完整的细胞。通过对细胞成分的分析所获得的数据，将有助于在分子水平上研究脑血栓形成的机制。

我们的团队将继续致力于纤溶作用和凝血系统的研究。首先，使用镊子将收集的脑部血栓样本放置于洁净的培养皿中。然后，用移液器加入5 mL生理盐水，并轻轻摇动培养皿。

用移液管吸除生理盐水。使用剪刀将凝块剪成小块。再次向凝块中加入5 mL生理盐水，轻轻摇动培养皿，然后用移液管吸除生理盐水。

然后使用镊子将血块碎片转移至新的洁净U型板中。用生理盐水将sFE的浓度调整至每毫升2000单位，配制sFE工作液。向预处理的血块中加入300 µL的sFE工作液。

为了启动第一轮降解，将sFE与血块的混合物在37摄氏度下孵育30分钟。随后，轻轻振荡以混匀经sFE处理的样品，并使用洁净的移液器将液体部分转移至无菌管中。将剩余的血块保留，用于下一轮降解。

在4°C条件下，以200 G离心收集的液体5分钟。接着，使用移液器将上清液或回收的sFE溶液转移至另一干净离心管中。用50微升生理盐水通过轻柔混匀重悬所得的细胞沉淀。

此后，使用先前回收的SFE溶液对剩余血凝块进行后续多轮降解。收集每轮降解后的细胞混合物，以制备血细胞样本。取5 µL获得的细胞样本加入至多聚赖氨酸包被的玻片上，用盖玻片将细胞涂布均匀。

在室温下让液体自然蒸发。进行细胞染色时，向细胞涂片中轻柔地加入100微升瑞氏染料。在室温下染色30分钟后，用清水轻柔冲洗去除染料。

最后，使用光学显微镜观察染色后的细胞。在降解早期阶段，观察到致密的红色血凝块及无色的工作溶液。经过30分钟孵育后可见血凝块溶解，延长孵育至5小时可使大部分血凝块溶解；而在阴性对照组中，即使经过10小时孵育也未观察到显著变化。

经过瑞氏染色后，在光学显微镜下可清晰识别成熟的红细胞、血小板及各种粒细胞。借助自动血液学分析仪，可对细胞成分进行定量分析。