Name: 一种分析脑血凝块细胞成分的综合方法 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-21T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: 学习一种分析脑血栓细胞成分的综合方法，通过纤溶酶降解纤维蛋白释放完整细胞，结合细胞染色和血常规检测实现定量定性分析，为脑血管疾病的诊断和治疗提供新策略。

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本研究由厦门市科学技术局（3502Z20227197）和福建省科学技术厅（编号：2019J01070，编号：2021Y0027）资助。

研究遵循华侨大学医学伦理委员会的机构指南进行。脑部血栓在取得患者知情同意后，于福建医科大学附属泉州市第一医院通过手术切除并收集。
1. 血凝块预处理
<ol>
	<li>将凝块置于洁净的培养皿中，用镊子加入 5 mL 生理盐水，轻轻摇动培养皿，然后用移液器吸除盐水。 
	注意：重复洗涤三次。</li>
	<li>用剪刀将凝块剪成更小的碎片（小于 5 mm × 5 mm × 5 mm）。加入 5 mL 生理盐水，轻轻摇动培养皿，然后用移液器吸除盐水。 
	注意：重复洗涤三次。确保在洗涤过程中未吸入任何凝块碎片。</li>
	<li>将凝块转移至另一洁净的 U 型板中。 
	&#8203;注意：此处可暂停实验流程（将培养板储存于 2–8 °C），之后可继续操作。</li>
</ol>
2. 溶栓治疗
<ol>
	<li>用生理盐水将sFE的浓度调整至2000 U/mL，制备sFE工作液。 
	注意：sFE的制备依据Tang实验室已建立的成熟方案15。</li>
	<li>向预处理的血凝块中加入300 µL sFE工作液。</li>
	<li>进行第一轮降解。
	<ol>
		<li>将sFE与血凝块的混合物在37 °C孵育0.5 h。 
		注意：以生理盐水处理的对照组作为阴性对照。样品在摇床中孵育时不得旋转。</li>
		<li>轻轻混匀样品，用洁净的移液器将液体部分转移至另一干净离心管中。 
		注意：剩余的血凝块用于下一轮降解。</li>
		<li>将液体部分在4 °C、200 × g条件下离心5 min。</li>
		<li>用移液器将上清液转移至另一干净离心管，得到回收的sFE溶液。</li>
		<li>用50 µL生理盐水轻轻重悬细胞沉淀。 
		注意：细胞混合物储存于2–8 °C，以备后续使用。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>进行后续降解。
	<ol>
		<li>用回收的sFE溶液（步骤2.3.4）在37 °C对剩余血凝块（步骤2.3.2）进行0.5 h的降解。 
		注意：后续步骤与第一轮降解相同。降解过程持续至全部血凝块完全降解为止。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>进行细胞收集。
	<ol>
		<li>通过收集每轮降解所得的细胞混合物，制备血细胞样品。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 瑞氏染色
<ol>
	<li>进行细胞涂片。
	<ol>
		<li>将细胞调整至密度为 1 x 106 个细胞/mL。</li>
		<li>取 5 µL 细胞悬液滴加到聚-L-赖氨酸包被的玻片上，然后用盖玻片涂抹均匀。</li>
		<li>室温下自然蒸发干燥液体。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>进行染色。
	<ol>
		<li>轻轻加入 200 µL 瑞氏染液（见材料表），再加入 600 µL 瑞氏B液，混匀，室温染色 10 分钟。</li>
		<li>用清水轻轻冲洗染液。 
		注意：染色后的细胞涂片可在室温下保存，以备后续使用。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>进行显微成像。
	<ol>
		<li>使用光学显微镜（见材料表）观察染色后的细胞。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. 常规血液检查
<ol>
	<li>将细胞调整至密度为 1 x 106 个细胞/mL。</li>
	<li>根据制造商说明书，使用全自动血液学分析仪分析血小板、红细胞、白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞以及幼稚粒细胞等细胞成分（参见 材料表）。</li>
</ol>

A Fibrinolytic Enzyme-Based Method to Study Cerebral Thrombus Cell Components

<ol><li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Edoxaban+versus+dual+antiplatelet+therapy+for+leaflet+thrombosis+and+cerebral+thromboembolism+after+TAVR%3A+The+ADAPT-TAVR+Randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial.</a> Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).</li>
<li>Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+venous+sinus+thrombosis+incidence+is+higher+than+previously+thought%3A+a+retrospective+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral venous sinus thrombosis incidence is higher than previously thought: a retrospective population-based study.</a> Stroke. 47 (9), 2180-2182 (2016).</li>
<li>Sacco, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+updated+definition+of+stroke+for+the+21st+century%3A+a+statement+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association%2FAmerican+Stroke+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">An updated definition of stroke for the 21st century: a statement for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44 (7), 2064-2089 (2013).</li>
<li>Thalin, C., Hisada, Y., Lundstrom, S., Mackman, N., Wallen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps%3A+villains+and+targets+in+arterial%2C+venous%2C+and+cancer-associated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis+Thrombosis+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps: villains and targets in arterial, venous, and cancer-associated thrombosis.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 39 (9), 1724-1738 (2019).</li>
<li>Mocsai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+novel+functions+of+neutrophils+in+immunity%2C+inflammation%2C+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation, and beyond.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (7), 1283-1299 (2013).</li>
<li>Dhanesha, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKM2+promotes+neutrophil+activation+and+cerebral+thromboinflammation%3A+therapeutic+implications+for+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">PKM2 promotes neutrophil activation and cerebral thromboinflammation: therapeutic implications for ischemic stroke.</a> Blood. 139 (8), 1234-1245 (2022).</li>
<li>Ducroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombus+neutrophil+extracellular+traps+content+impair+tpa-induced+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Thrombus neutrophil extracellular traps content impair tpa-induced thrombolysis in acute ischemic stroke.</a> Stroke. 49 (3), 754-757 (2018).</li>
<li>Solomon, C., Ranucci, M., Hochleitner, G., Schochl, H., Schlimp, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+methodology+for+calculating+platelet+contribution+to+clot+strength+%28platelet+component%29+in+thromboelastometry+and+thrombelastography%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+and+Analgesia%22%5BJournal%5D)">Assessing the methodology for calculating platelet contribution to clot strength (platelet component) in thromboelastometry and thrombelastography.</a> Anesthesia and Analgesia. 121 (4), 868-878 (2015).</li>
<li>Daraei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+fiber+diameter+and+porosity+measurements+of+plasma+clots+in+scanning+electron+microscopy+images%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Automated fiber diameter and porosity measurements of plasma clots in scanning electron microscopy images.</a> Biomolecules. 11 (10), 1536(2021).</li>
<li>Abbasi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+thrombus+composition+in+thrombectomy+stroke+patients+with+longer+time+to+recanalization%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Diverse thrombus composition in thrombectomy stroke patients with longer time to recanalization.</a> Thrombosis Research. 209, 99-104 (2022).</li>
<li>C W Francis, a, Marder, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concepts+of+clot+lysis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Concepts of clot lysis.</a> Annual Review of Medicine. 37 (1), 187-204 (1986).</li>
<li>Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en (2019).</li>
<li>Fotso Fotso, A., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Diagnosis+of+tick-borne+african+relapsing+fevers%3A+latest+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Laboratory Diagnosis of tick-borne african relapsing fevers: latest developments.</a> Front Public Health. 3, 254(2015).</li>
<li>Liou, G. Y., Byrd, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+bioliquid+markers+for+pancreatic+cancer%3A+What+we+have+vs.+what+we+need%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Diagnostic bioliquid markers for pancreatic cancer: What we have vs. what we need.</a> Cancers (Basel). 15 (9), 2446(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> Journal of Visualized Experiments. 196, e65631(2023).</li>
<li>Ge, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+antithrombotic+protease+from+marine+worm+Sipunculus+Nudus%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">A Novel antithrombotic protease from marine worm Sipunculus Nudus.</a> International Journal Of Molecular Sciences. 19 (10), 3023(2018).</li>
<li>Talukder, M. A., Menyuk, C. R., Kostov, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinguishing+between+whole+cells+and+cell+debris+using+surface+plasmon+coupled+emission%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Distinguishing between whole cells and cell debris using surface plasmon coupled emission.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1977-1991 (2018).</li>
<li>Shapiro, D. J., Hicks, L. A., Pavia, A. T., Hersh, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+prescribing+for+adults+in+ambulatory++care+in+the+USA%2C+2007-09%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Antibiotic prescribing for adults in ambulatory care in the USA, 2007-09.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (1), 234-240 (2014).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

sFE 是一种纤溶剂，可直接且有效地降解纤维蛋白12,16。本研究中，采用 sFE 降解脑血栓中的交联纤维蛋白，释放血栓内包裹的细胞，并对血栓中的细胞成分进行定性和定量分析。显微镜数据和常规血液检查表明，血栓内包裹的细胞已被成功释放。此外，经 sFE 处理后，所释放细胞的细胞类型和结构未受到显著影响。因此，首次建立了一种独特、简便且有效的方法，用于分析脑血栓的细胞成分。
由于释放的细胞在体外不如在凝块中稳定，因此需要优化降解条件以降低细胞破裂比例，例如温度、sFE 用量、旋转速度和降解时间。Wright 染色结果显示，10 小时降解组的背景比 5 小时降解组更浑浊。这些差异可能源于细胞碎片及其他细胞组分。此外，流式细胞术数据表明，细胞碎片随降解时间延长而增加（图 2B）。10 小时降解组的细胞碎片率（32.5%）显著高于 5 小时降解组（11.2%）。因此，尽快将释放的细胞从工作液中分离至关重要。为此，在本...

脑血管疾病是威胁人类健康的三大主要疾病之一，其中缺血性脑血管疾病占比超过80%。目前最受关注的缺血性脑血管疾病为脑血栓形成和脑静脉血栓形成，主要由脑部血栓引起1,2。若治疗不当，患者出院后致残率和死亡率高，且复发率较高3。
近年来，越来越多的研究表明，脑血栓的细胞成分与脑血栓的诊断、治疗及预后密切相关4,5,6因此，血栓成分尤其是细胞成分的数据对于临床诊断和治疗具有重要意义。然而，目前可用的方法尚无法对血凝块成分进行定性和定量的全面分析。例如，基于马修斯猩红蓝（Martius Scarlett Blue）的 原位 染色仅能研究血凝块特定切片中的红细胞/白细胞7基于免疫组织化学（IHC） 原位 染色只能利用特定抗体研究血凝块某些切片中有限的血液成分8基于显微图像的方法仅关注血凝块的特定结构9此外，所有这些方法都费力且耗时10迄今为止，尚无关于定量和定性研究脑血栓细胞成分的实验方法报道。普遍认为，交联纤维蛋白紧密包裹着血栓中的血细胞11因此，交联纤维蛋白的特异性降解及完整细胞的释放对于细胞组分的准确分析至关重要。
既往研究从无管虫（Sipunculus nudus）中分离出一种纤溶酶（sFE），该酶可特异性且快速地降解纤维蛋白12。本文提出了一种基于sFE独特活性分析脑血栓细胞成分的方法。该方案首先利用sFE降解血栓中的纤维蛋白，随后通过瑞氏染色和常规血液检测分析细胞成分13,14。根据该方法，可对脑血栓的细胞成分进行定性和定量研究。这一简单而有效的方案也可应用于其他血栓的细胞成分分析。

<table><tbody><tr><td>凝集反应板</td><td>ROTEST</td><td>RTB-4003</td><td></td></tr><tr><td>全自动血液分析仪</td><td>SYSMEX</td><td>XNB2</td><td></td></tr><tr><td>自动立式压力蒸汽灭菌器&amp;nbsp;</td><td>SANYO</td><td>MLS-3750</td><td></td></tr><tr><td>离心管（1.5 mL）</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>洁净工作台</td><td>AIRTECH</td><td>BLB-1600</td><td></td></tr><tr><td>恒温培养箱</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>培养皿（100 mm）</td><td>NEST</td><td>704001</td><td></td></tr><tr><td>DHG系列电热恒温鼓风干燥箱&amp;nbsp;</td><td>SENXIN</td><td>DGG-9140AD</td><td></td></tr><tr><td>电子分析天平</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>滤膜（0.22 &amp;micro;m）</td><td>Millex GP</td><td>SLGP033NK</td><td></td></tr><tr><td>微量冷冻离心机&amp;nbsp;</td><td>Cence</td><td>H1650-W</td><td></td></tr><tr><td>显微镜载玻片</td><td>CITOGLAS</td><td>01-30253-50</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Reference</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>生理盐水</td><td>CISEN</td><td>H37022337</td><td></td></tr><tr><td>光学显微镜</td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE E100</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm封口膜</td><td>Bemis</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液</td><td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td></td></tr><tr><td>移液器吸头（1 mL）</td><td>Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>移液器吸头（200 &amp;micro;L）</td><td>Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>移液器（1 mL）</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>移液器（200 &amp;micro;L）</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>手术刀</td><td>MARTOR</td><td>23111</td><td></td></tr><tr><td>小型旋涡振荡器</td><td>Kylin-Bell</td><td>VORTEX KB3</td><td></td></tr><tr><td>镊子</td><td>Hystic</td><td>HKQS-180</td><td></td></tr><tr><td>瑞氏染色液</td><td>Beyotime</td><td>C0135-500ml</td><td></td></tr></tbody></table>

全面分析脑血栓细胞成分的方法

A Comprehensive Approach to Analyze the Cell Components of Cerebral Blood Clots

脑血栓是指脑动脉或静脉中的血凝块，是最常见的脑梗死类型。研究脑血栓中细胞成分对于疾病的诊断、治疗和预后具有重要意义。然而，目前研究血栓细胞成分的方法主要依赖于原位染色技术，由于细胞被紧密包裹在血栓内部，该方法难以全面分析细胞成分。先前研究已成功从疣吻沙蚕（Sipunculus nudus）中分离出一种纤溶酶（sFE），该酶可直接降解交联的纤维蛋白，从而释放出其中包裹的细胞成分。本研究建立了一种基于sFE的综合性方法，用于分析脑血栓的细胞成分。该方案包括血栓溶解、细胞释放、细胞染色及常规血液学检查。通过该方法，可对血栓中的细胞成分进行定性和定量研究。本文展示了应用该方法所获得的代表性实验结果。

在降解过程的初始阶段，发现血凝块具有红色致密结构，而工作溶液无色。孵育30分钟后，工作溶液变为淡红色，表明交联的血细胞已释放到工作溶液中。当孵育时间延长至5小时后，大部分血凝块被溶解，工作溶液呈现淡红色。相反，即使孵育10小时后，生理盐水组（NC）也未见明显变化（图1）。这些结果表明，本方案能够成功释放血凝块中包裹的血细胞。
经瑞氏染色后，在光学显微镜下可清晰观察到细胞组分（图2A）。在所释放的血细胞中，可见大量表面呈轻微凹陷的圆盘状成熟红细胞。载玻片上还观察到大量形状不规则的紫红色小颗粒，即从血凝块中释放出的血小板。白细胞表现出较大的胞浆和浓缩的细胞核。同时还观察到多种类型的粒细胞，如成熟的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核细胞。
借助全自动血细胞分析仪，对细胞成分进行了定量分析。在检测到的细胞中，血小板和红细胞分别占51.25%和45.24%。这些数据与瑞氏染色结果一致。其他血细胞，如白细胞、淋巴细胞、中性粒...

本研究介绍了一种通过溶解血栓、细胞染色和常规血液检查来快速有效地分析脑血栓细胞成分的方法。

脑血栓，即脑动脉或静脉中的血凝块，是最常见的脑梗死类型。对……的细胞组分的研究

我们的研究主要集中在脑血栓。许多研究表明，脑部血凝块的细胞成分与脑血栓的诊断、治疗及预后相关。在本研究中，我们建立了一种分析脑部血凝块细胞成分的新方法。分析脑血栓中细胞成分的一个挑战是从血栓中释放出完整的细胞。这是因为交联的纤维蛋白紧密包裹着血栓中的血细胞。目前研究血栓细胞成分的方法主要基于原位染色，这种方法不适合对细胞成分进行全面研究。相反，我们的方法能够对脑血栓中的细胞成分进行定性和定量分析。该方法利用纤溶酶降解血栓中的纤维蛋白，从而释放出完整的细胞。通过对细胞成分的分析所获得的数据，将有助于在分子水平上研究脑血栓形成的机制。我们的团队将继续致力于纤溶作用和凝血系统的研究。首先，使用镊子将收集的脑部血栓样本放置于洁净的培养皿中。然后，用移液器加入5 mL生理盐水，并轻轻摇动培养皿。用移液管吸除生理盐水。使用剪刀将凝块剪成小块。再次向凝块中加入5 mL生理盐水，轻轻摇动培养皿，然后用移液管吸除生理盐水。然后使用镊子将血块碎片转移至新的洁净U型板中。用生理盐水将sFE的浓度调整至每毫升2000单位，配制sFE工作液。向预处理的血块中加入300 µL的sFE工作液。为了启动第一轮降解，将sFE与血块的混合物在37摄氏度下孵育30分钟。随后，轻轻振荡以混匀经sFE处理的样品，并使用洁净的移液器将液体部分转移至无菌管中。将剩余的血块保留，用于下一轮降解。在4°C条件下，以200 G离心收集的液体5分钟。接着，使用移液器将上清液或回收的sFE溶液转移至另一干净离心管中。用50微升生理盐水通过轻柔混匀重悬所得的细胞沉淀。此后，使用先前回收的SFE溶液对剩余血凝块进行后续多轮降解。收集每轮降解后的细胞混合物，以制备血细胞样本。取5 µL获得的细胞样本加入至多聚赖氨酸包被的玻片上，用盖玻片将细胞涂布均匀。在室温下让液体自然蒸发。进行细胞染色时，向细胞涂片中轻柔地加入100微升瑞氏染料。在室温下染色30分钟后，用清水轻柔冲洗去除染料。最后，使用光学显微镜观察染色后的细胞。在降解早期阶段，观察到致密的红色血凝块及无色的工作溶液。经过30分钟孵育后可见血凝块溶解，延长孵育至5小时可使大部分血凝块溶解；而在阴性对照组中，即使经过10小时孵育也未观察到显著变化。经过瑞氏染色后，在光学显微镜下可清晰识别成熟的红细胞、血小板及各种粒细胞。借助自动血液学分析仪，可对细胞成分进行定量分析。

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Research

科研

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

一种分析脑血凝块细胞成分的综合方法

来源： Kim, D., et. al. 结合近红外荧光成像与微型计算机断层扫描直接可视化脑血栓栓塞。 J. Vis. Exp.

利用微型计算机断层扫描成像技术在小鼠中显示脑血栓

脑卒中后脑内髓系细胞的表征可通过体视学结合光学分数器方法，或通过脑白细胞悬液的流式细胞分析来实现。这两种技术均有助于对缺血性脑组织中主要髓系细胞亚群进行准确的表型区分。...

短暂性或永久性脑缺血模型中白细胞亚群的体视学与流式细胞术表征

炎症在缺血性脑卒中的发病机制中起着核心作用。越来越多的证据表明，炎症具有双重作用：一方面会加剧早期脑损伤，另一方面也参与后期的修复过程。本方案描述了从缺血脑组织中分离免疫细胞，并对其进行后续流式细胞术表型分析的方法。...

从小鼠缺血脑组织中分离免疫细胞及其流式细胞术分析

本方案描述了联合近红外荧光（NIRF）成像与微型计算机断层扫描（microCT）技术用于可视化脑血栓栓塞的应用。该技术可实现对血栓负荷及其演变过程的定量分析。NIRF成像技术可用于观察离体脑组织中荧光标记的血栓，而microCT技术则利用金纳米颗粒在活体动物体内实现血栓的可视化。...

结合近红外荧光成像与显微计算机断层扫描直接可视化脑血栓栓塞

本文旨在介绍一种方法，该方法可在小鼠微计算机断层扫描后实现脑血管树的三维重建，并测定整个血管节段的体积，可用于量化蛛网膜下腔出血小鼠模型中的脑血管痉挛。...

一种用于量化蛛网膜下腔出血小鼠模型中脑血管痉挛的容积法

我们提出一种体外血管疾病模型，用于研究全血与患者来源内皮细胞的相互作用。该系统可在不同条件下研究原代内皮细胞的血栓形成特性。该方法特别适用于评估凝血不同阶段的原位血栓形成能力及抗凝治疗效果。...

用于实时研究全血-内皮相互作用与血凝块动态的体外微流控疾病模型

本方案描述了一种在同一批啮齿类动物脑样本上测量缺血性脑损伤三个最重要参数的新技术。仅使用一个脑样本在伦理和经济成本方面具有显著优势。...

在一组啮齿类动物脑样本中同时测量卒中后脑水肿、梗死区域及血脑屏障破坏

本方案介绍了用于表征轻度创伤性脑损伤后神经炎症和血流动力学反应的方法，并将这些数据整合到基于偏最小二乘回归的多变量系统分析中。...

创伤性脑损伤后神经炎症与血流动力学反应的系统分析

纤维蛋白在止血和血栓形成过程中负责凝块的形成。浊度测定和血栓弹力图（TEG）可作为协同工具，对凝块提供互补性评估。这两种技术结合使用，能够更深入地揭示凝血条件如何影响纤维蛋白凝块的形成。...

利用浊度和血栓弹力图进行互补性凝块表征

传统的光化学血栓性卒中（PTS）模型主要诱导形成对组织型纤溶酶原激活物（tPA）溶栓治疗具有高度抵抗性的致密血小板聚集体。本文介绍了一种通过共注射凝血酶和光敏染料进行光激活的改良小鼠PTS模型。该凝血酶增强型PTS模型可形成血小板与纤维蛋白混合的血栓，且对tPA溶栓治疗高度敏感。...

一种富含纤维蛋白且对tPA敏感的光化学血栓性卒中模型

本研究描述了一种微流控检测方法，该方法利用剪切应力诱导血液中血栓形成，并通过多维度读数对血栓进行表征。该检测可测量血液样本的促血栓倾向，因此在血栓相关疾病的诊断、药物研发以及基础机制研究中具有重要应用价值。...

血栓特征分析检测：一种基于微流控技术的生物力学血栓形成全面表征平台

学习一种分析脑血栓细胞成分的综合方法，通过纤溶酶降解纤维蛋白释放完整细胞，结合细胞染色和血常规检测实现定量定性分析，为脑血管疾病的诊断和治疗提供新策略。

全面分析脑血栓细胞成分的方法

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