豚鼠圆窗膜外植体获取用于离体研究

本研究团队正在探索用于治疗内耳疾病（如听力损失）的药物及药物递送载体。圆窗膜是阻止局部应用药物进入耳蜗的关键屏障，目前我们正致力于研究如何设计纳米粒子递送载体以穿透这一屏障。深入了解圆窗膜在药物转运方面的作用机制，对于开发有效的耳部药物递送策略至关重要。

豚鼠是研究药物递送至耳部的重要临床前动物模型。然而，分离这种仅17微米厚的脆弱膜结构以进行药物转运研究仍是一项重大挑战。本文介绍了一种提取豚鼠圆窗膜的方法，可实现高效的台面药物转运研究。

目前对药物递送至内耳的研究主要依赖于体内实验模型，随后进行前庭淋巴液取样，但这些方法无法对圆窗膜的转运机制进行特异性和靶向性研究。在本研究中，我们展示了提取带有周围骨性支撑结构的豚鼠圆窗膜的方法。该方法可保持组织原有结构的完整性，从而实现对药物通过圆窗膜递送过程的精确且靶向性的研究。

首先，取一只经适当安乐死的豚鼠颅骨中分离出的颞骨，并去除多余的软组织。接着，使用6毫米金刚砂钻头磨除颞骨鼓室的腹侧部分，完全暴露中耳腔和外耳道。在咬骨钳的辅助下，轻柔地移除外耳道及鼓环。

同时分离锤砧关节。使用镊子分离砧镫关节并移除砧骨，以识别圆窗的骨性隐窝。然后使用直径为6毫米的金刚砂钻头，磨除连接耳蜗与鼓室内侧壁至鼓张肌管方向的骨性板层。

仔细减压鼓膜张肌的骨性通道，并用镊子去除鼓膜张肌。接着磨除连接耳蜗与鼓室下壁的骨板，直至耳蜗旁残留约一毫米的骨性边缘。使用直径为2 mm的金刚砂钻头，在耳蜗基回处造耳蜗开窗术，保留距圆窗约2 mm的骨质。

沿与圆窗膜平行的平面继续向下扩大耳蜗造口，以分离耳蜗的基底部分与顶端部分。将耳蜗造口切口延伸穿过密度更高的颅底骨质，从而获得耳蜗基转的横截面视图。从颅底侧观察标本，并辨认内听道。

钻至耳蜗孔。使用28号针头去除耳蜗神经。从眼内侧检查标本。

使用28号针头或镊子，辨认并去除基底回的骨螺旋板及残余的蜗轴。大量冲洗统一的鼓阶与前庭阶腔体，以清除碎屑。从鼓室侧检查标本，磨开外半规管和面神经管，直至卵圆窗水平。

使用28号针头轻柔地移除镫骨，暴露卵圆窗隐窝。使用1毫米金刚砂钻头，沿圆窗面方向扩展卵圆窗，进一步开放前庭。注意保留1至2毫米的耳蜗骨壁，紧邻圆窗隐窝。

通过将卵圆窗切口与蜗窗两侧的切除切口连接，完成颞骨的切割。磨除内听道附近颅底骨的最后附着部分，并轻轻修整，最终获得一个被切除的蜗窗膜标本。该方法成功获取了带有周围一圈坚硬骨环的完整豚鼠蜗窗膜。

标本的组织学分析显示，上皮结构呈清晰的三层，且邻近的圆窗隐窝完整。