模拟丁氏滚压法对竹叶青蛇毒诱导大鼠肌肉损伤的影响

我们的研究范围是推拿治疗肌肉骨骼类疾病的生物学机制。在此，我们尝试使用自制的推拿装置，在实验动物上实现标准化且有效的推拿治疗。针对无法在大鼠身上实施丁氏滚法操作的问题，我们研制了一种可模拟丁氏滚法的传力装置，并在肌肉损伤的大鼠模型上验证该装置的有效性。

我们的研究重点是，在未来标准化研究中，不同参数下滚轮按摩器对大鼠骨骼肌损伤的疗效如何。首先，选择一个由长度为3 cm、直径为1.6 cm的橡胶滚轮、叉形支架以及长度为3 cm、直径为0.9 cm的弹簧组成的按摩器。该滚轮还应包含一个长3 cm、宽2 cm的限位挡板。

一个调整夹板、一颗螺钉和一个丙烯酸手柄，手柄长12厘米，直径0.9厘米。为控制丁氏滚压法中的力度，需在称重控制器上测试按摩头的最大压力，并通过调节限位挡板的角度，使作用力保持在约0.3牛顿。

接下来，在回滚时确保最小压力约为 0.08 牛顿。治疗前，熟悉节拍器应用程序，将滚动频率控制在每分钟 140 次，并练习超过三次以标准化操作。首先将大鼠随机分为三组，每组八只，包括对照组、notexin 组以及 notexin联合推拿组。

麻醉大鼠后，使用脱毛膏去除右侧后肢的毛发，然后用碘伏消毒液和75%酒精交替擦拭三遍，以环形向外的方式对皮肤进行消毒。为建立骨骼肌损伤模型，使用1毫升注射器配30号针头，将notexin溶液单侧注射至腓肠肌内。注射后等待三秒钟再拔出针头。

向对照组大鼠注射 200 微升生理盐水。将麻醉后的大鼠转移至铺有清洁垫料的空笼中。在大鼠恢复足够意识之前，肉眼观察其组织颜色和呼吸频率。

将大鼠放回饲养笼中，通常饲养24小时。通过苏木精-伊红染色观察大鼠骨骼肌损伤后的形态学特性。与对照组相比，经notexin注射损伤的腓肠肌显示出大量肌细胞破裂。

细胞呈现萎缩、坏死，排列不规则，且在病变区域周围有大量中性粒细胞和淋巴细胞浸润。首先，使用notexin诱导大鼠骨骼肌损伤。进行治疗时，将大鼠俯卧于实验平台上，用黑色布料覆盖其头部，以暴露腓肠肌。

接下来，握住按摩器，将滚轮置于大鼠的腓肠肌上。向前滚动，直至弹簧接触限位挡板，然后撤回力量并返回初始位置，从而实现往复运动。以每分钟140次滚动的速度操作按摩器。

连续三天，每天进行三次操作，每次持续三分钟。每次处理后将大鼠放回饲养笼，末次处理后禁食八小时。使用滚轮按摩器进行推拿治疗后，经竹节毒素注射损伤的腓肠肌肌细胞形态得到改善。

通过苏木精-伊红染色观察发现，与损伤肌肉相比，萎缩、坏死的破裂细胞更少，且仅观察到少量炎性细胞。此外，采用ELISA法分析了骨骼肌损伤标志物CK和FABP3的水平。与notexin组相比，推拿组中这些标志物水平显著降低，提示推拿可减轻骨骼肌损伤。

首先将麻醉后的动物置于手术台上。用碘伏消毒液和75%酒精交替擦拭皮肤三次进行消毒。使用两把止血钳在腹部中线处提起皮肤。

使用手术刀从腹白线至耻骨联合处切开腹部皮肤和肌肉。打开腹腔后，用无菌棉球将肠管分离，暴露腹后壁的腹主动脉。定位腹主动脉，并采集5 mL大鼠血液至采血管中。

将含有血液的试管静置1小时，然后在3,000G条件下离心10分钟以获取血浆。采集腓肠肌时，用手术剪沿下腹部切口向右侧下肢外侧方向剪开皮肤，暴露下肢肌肉。用镊子仔细分离筋膜后，使用手术刀切割，完整取出腓肠肌。

用无菌生理盐水冲洗腓肠肌，以去除附着的毛发和血液，并将剥离的腓肠肌放入含有4%多聚甲醛的15毫升离心管中。