Name: 拆装时间推移显微镜监测肌动蛋白 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-08T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: 学习使用石蜡膜和加热密封技术构建用于正置显微镜成像的流动腔室。该方法可创建稳定的成像环境，适用于肌动蛋白聚合等神经生物学研究，为研究人员提供可重复的标准化实验方案。

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<ol><li>按照视频中所示构建流动腔室。&nbsp; 确保石蜡密封紧密，并使用经过清洗的盖玻片。</li><li>将肌动蛋白结合剂在腔室内孵育5-10分钟。</li><li>用封闭蛋白封闭盖玻片上的非特异性结合位点。</li><li>通过注入含G-肌动蛋白的聚合缓冲液，在腔室内进行肌动蛋白聚合。</li><li>用过量缓冲液冲洗，去除未聚合的肌动蛋白。</li></ol>

利用延时显微镜监测肌动蛋白解聚过程

Monitoring Actin Disassembly with Time-lapse Microscopy

好的，今天我想向您展示如何构建一个用于直立显微镜成像的流动腔室，即融合腔室。接下来，我会利用薄膜创建两个空间。具体操作是：取一段Parafilm，将其切成小条状。接下来，我将进行这一步骤，这基本上会形成通道的壁，我用倾斜的气流将其干燥。将盖玻片放在石蜡上，这是完成后的样品。然后将其放在加热块上加热，使石蜡熔化，从而基本形成密封。这里所示的是盖玻片，盖玻片上方有两层菲姆膜（phim），如图所示。在此之上，还有一个22毫米×22毫米的盖玻片，就是这个，我将其压紧在灌流腔上以形成密封。好的，液体从这个方向加入，然后我可以通过这个方向的滤纸将其吸出。稍后我会演示具体操作方法。我喜欢将其放入一个非常简单的加湿孵育盒中。取两种不同类型的高架条带，并在其下方放置一张滤纸。为了保持环境嘈杂，我将盖玻片盖在流动腔室上。现在，向腔室内引入溶液的方法是：将移液器吸头置于腔室的入口处，然后轻轻排入溶液。现在，我将密闭培养室孵育10分钟。通常，为了从另一侧吸出液体，我会取一张滤纸并将其剪成这样的细条。然后取其中一条细纸条，在入口处加入溶液的同时，将滤纸条置于出口端，以吸出交换的溶液。因此，您将看到液体流过溶液。然后，我需要等待五分钟以完成中间封闭步骤。现在，我准备将肌动蛋白（actin）加入，实际上，我需要在流动池内使肌动蛋白聚合，其操作步骤与之前完全相同。因此，由于是像这样操作，现在反应物已经聚合，我使用大量缓冲液将所有未反应的过量丙烯酸彻底洗去。这里我大约使用了100微升，相当于数倍反应室体积的缓冲液。当滤纸饱和后，就需要更换方向，明白了吗？现在我已准备好进行成像。将连接有肌动蛋白的灌流腔室置于载玻片上。接下来，我将载玻片安装到显微镜下，由于我将使用油镜进行成像，因此需要在盖玻片的上表面滴加浸油，轻轻接触，以便对腔室内肌动蛋白上的溶液、蛋白质或其他物质进行观察。因此，我可以在进行延时成像的同时更换溶液环境。

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拆装时间推移显微镜监测肌动蛋白

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表达GFP-肌动蛋白的活内皮细胞中肌动蛋白细胞骨架的研究

微管是本质上不稳定的多聚体，其在生长与缩短之间的转换具有随机性且难以控制。本文描述了使用带有可光解稳定帽的节段化微管的实验方案。通过高时间和空间分辨率触发节段化微管的去聚合，从而有助于分析由微管解聚末端所驱动的运动过程。...

制备分段微管以研究由微管末端解聚驱动的运动

我们介绍了如何利用微操作和光操控技术（如荧光漂白恢复技术FRAP和光激活技术），来测定迁移细胞内蛋白质的运动参数及其时空动态。实验读出结果包括运动调控因子或其下方肌动蛋白细胞骨架的亚细胞动态行为与更新速率。...

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我们报告了一种基于荧光光谱法的简单、高效且高通量的检测方法，用于定量微丝中的肌动蛋白 离体...

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本文介绍了一种针对持续性运动的肌球蛋白-5分子马达进行超快力钳实验的完整方案，该方案可轻松拓展应用于其他类型的持续性分子马达研究。本方案详细描述了从实验装置的搭建、样品制备，到数据采集与分析的全部必要步骤。...

利用超快力钳光谱技术解析行进性肌球蛋白的力-酶特性

我们介绍了简单的肌动蛋白丝微流控实验方案，结合荧光显微镜技术，可实时准确监测单个肌动蛋白丝，并依次将其暴露于不同的蛋白质溶液中。...

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本方案描述了支撑脂双层的形成，以及细胞骨架丝和马达蛋白的添加，用于通过荧光显微镜研究重建的膜锚定细胞骨架网络的动力学。...

在支撑脂双层上重建膜锚定的最小肌动蛋白皮层

本方案旨在通过可视化动态微丝和微管提供操作指南 体外 全内反射荧光（TIRF）显微镜检测...

可视化肌动蛋白与微管耦合动力学 体外 通过全内反射荧光（TIRF）显微镜技术

本文介绍了可调控的三维共缠结肌动蛋白丝与微管复合网络的构建与表征方法。该复合材料在肌球蛋白II和驱动蛋白马达的驱动下发生主动重构和弹道运动，并可通过调节肌动蛋白、微管、马达蛋白和被动交联分子的相对浓度进行调控。...

重构与表征具有可调马达驱动动力学和力学性能的微丝-微管复合物

用于模拟细胞骨架的（多孔）弹性收缩性肌动球蛋白网络的力学特性

本文介绍了利用纯化蛋白制备准二维（2D）缠结、交联及液晶状肌动蛋白组装体的方法。...

调控基于肌动蛋白的活性组装体的收缩性与变形模式 体外从二维活性网络到液晶液滴

学习使用石蜡膜和加热密封技术构建用于正置显微镜成像的流动腔室。该方法可创建稳定的成像环境，适用于肌动蛋白聚合等神经生物学研究，为研究人员提供可重复的标准化实验方案。

利用延时显微镜监测肌动蛋白解聚过程

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