Name: 东莨菪碱诱导泪腺功能障碍的大鼠干眼模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-09T13:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 6 s
Description: 了解通过皮下注射东莨菪碱建立大鼠泪腺功能障碍干眼模型的方法。该模型可用于研究水液缺乏型干眼的发病机制及潜在治疗方案。

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本研究由广东省高水平临床重点专科（SZGSP014）和深圳市自然科学基金（JCYJ20210324125805012）资助。

所有按照本方案进行的动物实验均须经机构动物护理和使用委员会（IACUC）批准后方可开展。
1. 动物准备
<ol>
	<li>准备12只健康的6周龄SPF级Wistar雌性大鼠，体重为160 g ± 20 g。</li>
	<li>使用裂隙灯和检眼镜检查所有大鼠的眼部状况，确保无眼前段或视网膜疾病。</li>
	<li>将所有大鼠在充足的食物和水源条件下饲养1周。</li>
	<li>将所有大鼠随机分为正常组、东莨菪碱药物浓度2.5 mg/mL组、东莨菪碱药物浓度5 mg/mL组和东莨菪碱药物浓度7.5 mg/mL组，每组3只动物。</li>
</ol>
2. 溶液配制
<ol>
	<li>通过将氢溴酸东莨菪碱溶解于0.9%氯化钠溶液中，配制浓度为7.5 mg/mL、5 mg/mL和2.5 mg/mL的溶液。</li>
	<li>配制不含氢溴酸东莨菪碱的0.9%氯化钠溶液，用于大鼠对照组的注射。</li>
</ol>
3. 仪器与材料准备
<ol>
	<li>准备一台小动物显微镜。</li>
	<li>准备实验所需材料，包括1 mL一次性带针注射器（26 G）；荧光素钠眼科试纸；Schirmer泪液检测试纸条；无水乙醇；4%多聚甲醛；二甲苯；中性树胶；苏木精、伊红；以及过碘酸-雪夫染色试剂盒。</li>
</ol>
4. 皮下注射
注意：该操作需要第二人协助以固定大鼠。
<ol>
	<li>固定大鼠身体，抓住并拉伸其左侧（或右侧）后肢。 
	注意：可由助手协助固定动物。</li>
	<li>用酒精清洁注射部位。</li>
	<li>使用1 mL一次性带针注射器（26 G）插入拇指与食指间皮肤皱褶基部。</li>
	<li>回抽注射器活塞进行抽吸。若注射器内出现血液，表明针头位置不当；应退出并重新调整针头位置。</li>
	<li>以稳定流畅的动作注射0.9%氯化钠溶液，可含或不含氢溴酸东莨菪碱。</li>
	<li>根据不同的浓度对所有大鼠进行注射，每次0.5 mL，每日四次（分别于9:00、12:00、15:00和18:00），连续19天，左右肢体交替注射。 
	注意：各组命名如下： 
	不含氢溴酸东莨菪碱组：0组（对照组） 
	含氢溴酸东莨菪碱2.5 mg/mL组：2.5组 
	含氢溴酸东莨菪碱5 mg/mL组：5组 
	含氢溴酸东莨菪碱7.5 mg/mL组：7.5组</li>
	<li>将动物放回笼中，并观察其呼吸和行为5–10分钟。</li>
</ol>
5. 泪液分泌试验（Schirmer 泪液试验，STT）
<ol>
	<li>为大鼠制备改良的滤纸条11。将用于人类的滤纸条沿中线剪去一半（1 mm × 15 mm），并修剪条带头部使其平滑。 
	注意：在进行泪液分泌试验前，需手动固定大鼠身体，防止其移动，并确保大鼠眼睛充分暴露。</li>
	<li>将滤纸条置于大鼠下眼睑结膜囊的外1/3处。</li>
	<li>计时5分钟。在整个操作过程中控制大鼠眼睛保持闭合。</li>
	<li>测量完成后，用镊子将滤纸条夹入微量离心管中，并在管壁上标记以记录泪液体积。</li>
	<li>在第0天、第1天、第3天、第5天、第7天、第11天、第15天和第19天测量泪液分泌量。</li>
</ol>
6. 角膜荧光素染色
<ol>
	<li>将0.5 µL的0.5%荧光素钠溶液滴入每只大鼠的下结膜囊内。</li>
	<li>滴入荧光素后，在蓝光下观察角膜3分钟。</li>
	<li>记录每只大鼠角膜的荧光染色情况，并观察是否存在角膜缺损。</li>
	<li>分别在第0、1、3、5、7、11、15和19天进行角膜荧光素染色检查。</li>
</ol>
7. 结膜组织的组织学观察
<ol>
	<li>模型制备完成后，通过腹腔注射10%水合氯醛（0.4 mL/100 g）对大鼠进行深度麻醉，以缓解动物的紧张状态。随后通过颈椎脱位法处死大鼠。</li>
	<li>取各鼠相同部位的球结膜组织，大小约为2 mm × 2 mm。</li>
	<li>立即将组织用4%多聚甲醛固定24小时，并进行石蜡包埋13。</li>
	<li>切取5 µm厚的切片，进行苏木精-伊红（HE）染色14和过碘酸-雪夫（PAS）染色（按试剂说明书操作）。</li>
</ol>
8. 角膜和泪腺组织的组织学观察
<ol>
	<li>模型构建完成后，按照步骤 7.1 所述方法处死大鼠。</li>
	<li>取每只大鼠右侧角膜，并立即置于 4% 多聚甲醛溶液中固定。</li>
	<li>沿耳部与眼外角连线切开头侧皮肤及皮下组织，向两侧扩大切口，进一步分离淡黄色的眶外腺。</li>
	<li>彻底去除大鼠毛发，并用 0.9% 氯化钠溶液分离眶外腺。</li>
	<li>将分离出的眶外腺组织置于 4% 多聚甲醛溶液中固定 24 小时，随后进行石蜡包埋。</li>
	<li>切取约 5 µm 厚的连续切片，对角膜和眶外腺组织标本进行苏木精-伊红（HE）染色。</li>
</ol>
9. 统计分析
<ol>
	<li>使用适当的软件对数据进行统计分析。
	<ol>
		<li>采用单因素方差分析（ANOVA）对数据进行分析，并使用最小显著差异（LSD）法进行组间比较。显著性水平设为 α = 0.05，当 P &#60; 0.05 时认为差异具有统计学意义。 
		注：实验数据的统计分析采用 SPSS 20 软件完成。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Scopolamine-Induced Lacrimal Gland Dysfunction in Rats

<ol><li>Papas, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+prevalence+of+dry+eye+disease%3A+A+Bayesian+view%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Physiol+Opt%22%5BJournal%5D)">The global prevalence of dry eye disease: A Bayesian view.</a> Ophthalmic Physiol Opt. 41 (6), 1254-1266 (2021).</li>
<li>Sy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expert+opinion+in+the+management+of+aqueous+deficient+dry+eye+disease+%28DED%29%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Expert opinion in the management of aqueous deficient dry eye disease (DED).</a> BMC Ophthalmol. 15 (1), 133(2015).</li>
<li>Seo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+HIF-1alpha+%28hypoxia+inducible+factor-1alpha%29+prevents+dry+eye-induced+acinar+cell+death+in+the+lacrimal+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Activation of HIF-1alpha (hypoxia inducible factor-1alpha) prevents dry eye-induced acinar cell death in the lacrimal gland.</a> Cell Death Dis. 5 (6), 1309(2014).</li>
<li>Rahman, M. M., Kim, D. H., Park, C. -K., Kim, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models%2C+induction+protocols%2C+and+measured+parameters+in+dry+eye+disease%3A+Focusing+on+practical+implications+for+experimental+research%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Experimental models, induction protocols, and measured parameters in dry eye disease: Focusing on practical implications for experimental research.</a> Int J Mol Sci. 22 (22), 12102(2021).</li>
<li>Sullivan, D. A., Bloch, K. J., Allansmith, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormonal+influence+on+the+secretory+immune+system+of+the+eye%3A+androgen+regulation+of+secretory+component+levels+in+rat+tears%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Hormonal influence on the secretory immune system of the eye: androgen regulation of secretory component levels in rat tears.</a> J Immunol. 132 (3), 1130-1135 (1984).</li>
<li>Sullivan, D. A., Allansmith, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormonal+modulation+of+tear+volume+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Hormonal modulation of tear volume in the rat.</a> Exp Eye Res. 42 (2), 131-139 (1986).</li>
<li>Maitchouk, D. Y., Beuerman, R. W., Ohta, T., Stern, M., Varnell, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tear+production+after+unilateral+removal+of+the+main+lacrimal+gland+in+squirrel+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Tear production after unilateral removal of the main lacrimal gland in squirrel monkeys.</a> Arch Ophthalmol. 118 (2), 246-252 (2000).</li>
<li>Barabino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+controlled-environment+chamber%3A+a+new+mouse+model+of+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The controlled-environment chamber: a new mouse model of dry eye.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46 (8), 2766-2771 (2005).</li>
<li>Viau, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+ocular+surface+and+lacrimal+gland+changes+in+a+new+scopolamine-induced+dry+eye+model%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Time course of ocular surface and lacrimal gland changes in a new scopolamine-induced dry eye model.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 246 (6), 857-867 (2008).</li>
<li>Altinors, D. D., Bozbeyoglu, S., Karabay, G., Akova, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+ocular+surface+changes+in+a+rabbit+dry+eye+model+using+a+modified+impression+cytology+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of ocular surface changes in a rabbit dry eye model using a modified impression cytology technique.</a> Curr Eye Res. 32 (4), 301-307 (2007).</li>
<li>Daull, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+a+new+topical+cationic+emulsion+of+cyclosporine+A+on+dry+eye+clinical+signs+in+an+experimental+mouse+model+of+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Efficacy of a new topical cationic emulsion of cyclosporine A on dry eye clinical signs in an experimental mouse model of dry eye.</a> Exp Eye Res. 153, 159-164 (2016).</li>
<li>Dursun, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+keratoconjunctivitis+sicca%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">A mouse model of keratoconjunctivitis sicca.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 43 (3), 632-638 (2002).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+sections+of+paraffin-embedded+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Cutting sections of paraffin-embedded tissues.</a> CSH Protoc. 2008, (2008).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> CSH Protoc. 2008, (2008).</li>
<li>Shinomiya, K., Ueta, M., Kinoshita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+dry+eye+mouse+model+produced+by+exorbital+and+intraorbital+lacrimal+gland+excision%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A new dry eye mouse model produced by exorbital and intraorbital lacrimal gland excision.</a> Sci Rep. 8 (1), 1483(2018).</li>
<li>Ramos, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonproliferative+and+Proliferative+Lesions+of+the+Rat+and+Mouse+Special+Sense+Organs%28Ocular+%5Beye+and+glands%5D%2C+Olfactory+and+Otic%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Nonproliferative and Proliferative Lesions of the Rat and Mouse Special Sense Organs(Ocular [eye and glands], Olfactory and Otic).</a> J Toxicol Pathol. 31, (2018).</li>
<li>Stapleton, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TFOS+DEWS+II+Epidemiology+report%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">TFOS DEWS II Epidemiology report.</a> Ocul Surf. 15 (3), 334-365 (2017).</li>
<li>Foulks, G. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+guidelines+for+management+of+dry+eye+associated+with+Sjogren+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Clinical guidelines for management of dry eye associated with Sjogren disease.</a> Ocul Surf. 13 (2), 118-132 (2015).</li>
<li>Huang, W., Tourmouzis, K., Perry, H., Honkanen, R. A., Rigas, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+dry+eye+disease%3A+Useful%2C+varied+and+evolving+%28Review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Ther+Med%22%5BJournal%5D)">Animal models of dry eye disease: Useful, varied and evolving (Review).</a> Exp Ther Med. 22 (6), 1394(2021).</li>
<li>Brayer, J. B., Humphreys-Beher, M. G., Peck, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sjogren%27s+syndrome%3A+immunological+response+underlying+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Immunol+Ther+Exp+%28Warsz%22%5BJournal%5D)">Sjogren's syndrome: immunological response underlying the disease.</a> Arch Immunol Ther Exp (Warsz. 49 (5), 353-360 (2001).</li>
<li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+dry+eye+model+induced+by+topical+administration+of+benzalkonium+chloride%29%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">A mouse dry eye model induced by topical administration of benzalkonium chloride).</a> Mol Vis. 17, 257-264 (2011).</li>
</ol>

作者与本实验所用药物和材料无任何潜在的利益冲突。

水液缺乏型干眼（ADDE）是一种重要的干眼类型，约占全部干眼患者总数的1/317，其主要病因是泪腺的病理性损伤和炎症13。对于此类干眼，临床上最常用的治疗方法是使用人工泪液以缓解症状，或局部应用类固醇或环孢素18，然而针对泪腺损伤的治疗选择仍十分有限。因此，探索泪腺功能重建对干眼的影响，并建立泪腺功能障碍的动物模型具有重要意义。我们采用反复给药的方法抑制大鼠泪腺分泌，成功构建了一种慢性泪腺功能障碍性干眼动物模型。
我们选择大鼠构建此干眼模型，与其他动物模型相比具有更多优势19。例如，兔的体型较大，需要更高剂量的药物或更频繁的注射才能达到预期效果。此外，兔的成本略高，会增加实验开支。小鼠也常用于眼科研究，但通常用于构建干燥综合征模型20，这些模型主要通过比较器官炎症和淋巴细胞浸润来探讨免疫病理机制。小鼠体型小，泪腺解剖结构复杂，且泪液分泌量低，难以...

截至2021年，约有12%的人群受到干眼症的显著影响1，使其成为最常见的慢性眼病之一。根据致病因素的不同，干眼症可分为两种类型：水液缺乏型干眼（ADDE）和蒸发过强型干眼（EDE）2。ADDE又可进一步分为干燥综合征（SS）和非SS型，但在临床上大多数干眼患者为非SS型患者3。慢性干眼症状严重影响患者的视觉质量。目前，干眼症（DED）的常规治疗包括使用人工泪液润滑眼表以及对眼睑进行物理治疗。然而，在许多情况下，干眼症可能无法完全治愈。因此，研究干眼病的发病机制对于开发新的治疗方法和药物至关重要。干眼症的动物模型为深入研究提供了基础。
构建干眼综合征动物模型的方法有很多4，包括通过改变激素水平来调节泪液分泌量。例如，切除大鼠的睾丸可减少雄激素分泌，增加泪液分泌量，并降低泪液中游离分泌成分（SC）和IgA的浓度5,6另一种方法是通过去除控制泪腺的眼表神经来提示泪腺中的自身免疫反应。此外，可通过手术切除泪腺直接减少泪液分泌。7环境条件的改变也可能加速泪液蒸发。例如，在低湿度和干燥通风条件下培养动物，可建立蒸发过强型干眼模型。8，可与其他方法联合使用以加重干眼症状。用于诱导干眼实验模型的主要药物为阿托品和东莨菪碱9作为副交感神经抑制剂，两者均可在泪腺中诱导胆碱能（毒蕈碱型）受体的药理学阻断，从而抑制泪液分泌。与阿托品肌肉注射所致的干眼相比10，东莨菪碱对分泌腺的抑制作用更强，药效持续时间更长，对心脏、小肠和支气管平滑肌的作用较弱。它是干眼动物模型中最为成熟的药物之一。
可采用多种方法使用东莨菪碱诱导干眼，例如皮下注射、药物泵或贴剂给药4,11,12。为了减少对实验动物的给药频率，许多研究人员选择将透皮贴剂贴于小鼠尾部，或使用药物泵。然而，这两种方法均存在局限性。例如，透皮贴剂的吸收需考虑个体小鼠的吸收差异，可能导致药物剂量不一致。尽管药物泵能够精确控制每次给药的剂量，但其并不总是与所用药物或浓度相容。此外，药物泵需通过手术植入，对动物更具侵入性，需要麻醉操作，且存在术后并发症（如伤口裂开）的风险。皮下注射虽然操作较为繁琐，但可确保每次给药剂量准确，并维持不同大鼠间给药的一致性。同时，该方法成本较低，适用于开展大量动物实验。
本研究通过反复皮下注射东莨菪碱建立干眼大鼠模型。我们分析了角膜缺损、泪液分泌水平以及角膜、结膜和泪腺的病理形态等干眼相关指标。结合药物浓度、病理表现及干眼症状，进一步详细阐述该干眼大鼠模型，为干眼治疗及病理机制研究提供更为准确的实验数据。同时，本文还详细描述了造模过程，以供后续研究者参考。

<table><tbody><tr><td>0.9% 氯化钠溶液</td><td>SJZ No.4 制药厂</td><td>H13023201</td><td></td></tr><tr><td>4% 多聚甲醛</td><td>武汉赛维尔生物科技有限公司</td><td>G1113</td><td></td></tr><tr><td>无水乙醇</td><td>国药集团化学试剂有限公司</td><td>10009218</td><td></td></tr><tr><td>荧光素钠眼科试纸条</td><td>天津伊诺新康医疗器械科技有限公司</td><td>YN-YG-I</td><td></td></tr><tr><td>苏木精和伊红</td><td>南京建成生物工程研究所</td><td>D006</td><td></td></tr><tr><td>中性树胶</td><td>北京索莱宝科技有限公司 &amp;科技有限公司&amp;nbsp;</td><td>G8590</td><td></td></tr><tr><td>石蜡</td><td>北京索莱宝科技有限公司 &amp;科技有限公司</td><td>YA0012</td><td></td></tr><tr><td>过碘酸-雪夫染色试剂盒</td><td>碧云天生物技术</td><td>C0142S</td><td></td></tr><tr><td>Schirmer 泪液检测试纸条</td><td>天津银诺新康医疗器械科技有限公司</td><td>YN-LZ-I</td><td></td></tr><tr><td>氢溴酸东莨菪碱</td><td>上海麦克林生化有限公司</td><td>S860151</td><td></td></tr><tr><td>小型动物显微镜</td><td>Head Biotechnology Co,. Ltd</td><td>ZM191</td><td></td></tr><tr><td>二甲苯</td><td>国药集团化学试剂有限公司</td><td>10023418</td><td></td></tr></tbody></table>

一种由东莨菪碱诱导泪腺功能障碍的大鼠干眼模型

A Rat Dry Eye Model with Lacrimal Gland Dysfunction Induced by Scopolamine

水液缺乏型干眼症（ADDE）是一种可导致泪液分泌量和质减少的干眼病。长期异常的泪液分泌可引起眼表环境紊乱，包括角膜损伤和炎症反应。在严重情况下，ADDE可导致视力下降甚至失明。目前，干眼症的治疗主要局限于使用滴眼液或物理疗法，这些方法仅能缓解眼部不适症状，无法从根本上治愈干眼综合征。为了恢复干眼症患者泪腺的功能，我们建立了由东莨菪碱诱导的大鼠泪腺功能障碍动物模型。通过对泪腺、角膜、结膜及其他相关因素的综合评估，旨在全面揭示ADDE的病理变化。与现有的干眼小鼠模型相比，该ADDE动物模型包含了对泪腺功能的评估，为研究ADDE中泪腺功能障碍提供了更理想的平台。

Schirmer I 试验，SIT I 
在实验开始后的第 0、3、5、7、11、15 和 19 天测量大鼠的泪液量。实验结果表明，与对照组（0 组）相比，东莨菪碱组（2.5 组、5 组、7.5 组）的泪液分泌量显著降低，差异具有统计学意义（P &lt; 0.01）。2.5 组、5 组与 7.5 组之间差异无统计学意义（P &gt; 0.05）。各组在不同时间点之间的差异均无显著性（P &gt; 0.05）（图 1，表 1）。
角膜荧光素染色 
在实验的第0、3、5、7、11、15和19天进行角膜荧光素染色。结果显示，各组均未出现角膜荧光素染色，表明在为期20天的不同浓度东莨菪碱药物实验过程中，未形成明显的角膜上皮缺损（图2）。
角膜上皮的病理学分析 
实验...

本研究建立了一种大鼠泪腺功能障碍模型，为研究水样液缺乏型干眼症提供基础。

水液缺乏型干眼（ADDE）是一种可导致泪液分泌量和质减少的干眼病。长期异常……

建立干眼动物模型的过程较为漫长。需要持续对小鼠后肢进行皮下注射东莨菪碱，以抑制眼部泪腺的分泌。因此，实验人员需要有足够的耐心，在较长时间内定期给予药物。本方案是一种非常实用的方法，可根据不同的药物浓度建立不同程度的干眼模型。这将有助于未来的研究人员更便捷地开展干眼病治疗的相关研究。我们的团队将继续探索泪腺再生领域。我们非常期待开展三维类器官的重建以及移植实验。我们的最终目标是为干眼症患者开发出更先进、更有效的治疗方案。首先，固定大鼠的身体，并拉直其后肢。用酒精擦拭注射部位。然后，在拇指和食指之间的皮肤皱褶基部，插入带有26号针头的1毫升注射器。拉动注射器活塞以抽吸针头。必要时移除并重新放置针头。以单次稳定动作注射 0.5 毫升 0.9% 氯化钠溶液，可含或不含氢溴酸东莨菪碱。进行泪液分泌试验时，首先沿中心线剪开一条滤纸条的一半。修剪试纸条的头部，使其边缘平滑。将滤纸条置于大鼠下眼睑结膜囊的外三分之一处。五分钟后，用镊子将滤纸条夹入微量离心管中。在管壁上做标记以记录泪液体积。为染色大鼠眼部的角膜，将0.5微升0.5%荧光素钠溶液滴入每只眼睛的下结膜囊内。三分钟后，在蓝光下观察角膜。取安乐死大鼠眼球的球结膜。切除每只大鼠右侧的角膜，并立即用4%多聚甲醛固定。沿耳部与外眼角之间的连线，从皮下组织上剪下头侧表皮。然后向两侧扩大切口，分离淡黄色的眼眶外腺体。接着，彻底去除大鼠的毛发，并用0.9%氯化钠溶液分离眼眶外腺体。东莨菪碱组的泪液分泌量显著减少。东莨菪碱未引起任何角膜上皮缺损，表现为无角膜染色现象。东莨菪碱组的角膜上皮相对较薄，其中7.5组还在基底层显示出细胞间连接松散及空泡样结构。对照组的角膜上皮明显更厚。东莨菪碱似乎引起泪腺的炎性改变，提示存在功能性泪腺损伤。在2.5和5组中观察到黏液样物质减少，并伴有游离淋巴细胞浸润。此外，7.5组显示出细胞排列紊乱，上皮细胞形态不规则。东莨菪碱还引起了结膜的形态学改变。

a-rat-dry-eye-model-with-lacrimal-gland-dysfunction-induced

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东莨菪碱诱导泪腺功能障碍的大鼠干眼模型

本视频演示了一种在大鼠中诱导慢性实验性自身免疫性干眼病的技术。通过在预定时间间隔向大鼠注射含有自身抗原和外来抗原的抗原-佐剂乳剂，随后将相同抗原注射到眼部表面组织，可在免疫大鼠中诱导产生慢性眼表炎症。...

一种在大鼠中诱导慢性实验性自身免疫性干眼症的技术

在不使用麻醉的情况下，将乳剂皮下注射至大鼠尾根部。随后，在第14天以相同方式注射200微升相同抗原与不完全弗氏佐剂的混合物。同一天，将300纳克百日咳毒素溶于100微升磷酸盐缓冲液（PBS）中，进行腹腔注射。...

本视频展示了一种在大鼠中诱导慢性实验性自身免疫性干眼病的技术。通过在预定时间间隔向大鼠注射含有自身抗原和外来抗原的抗原-佐剂乳剂，随后将相同抗原注射至眼部表面组织，可在免疫大鼠中诱导产生慢性眼表炎症。...

本视频展示了一种在自身免疫性大鼠模型中评估角膜光滑度和泪膜稳定性的方法。该方法强调了腺体功能障碍对泪膜稳定性的影响，对于理解干眼症具有重要意义。...

自身免疫性干眼大鼠模型中角膜与泪膜光滑度的评估

本视频展示了使用荧光素染料对受损角膜进行染色，以评估大鼠模型中自身免疫性干眼病的严重程度。染色后胶原纤维呈现的绿色荧光斑点表明角膜上皮细胞受损。...

荧光素染色在自身免疫性干眼大鼠模型中评估角膜损伤

本报告描述了一种通过免疫诱导Lewis大鼠产生慢性实验性自身免疫性干眼症的方法：首先使用大鼠泪腺提取物、卵清蛋白和完全弗氏佐剂的乳剂进行免疫，六周后再次向结膜穹隆下和泪腺内注射泪腺提取物和卵清蛋白。...

一种眼组织中效应记忆T细胞增加的慢性自身免疫性干眼大鼠模型

本文介绍了一种通过向兔眼眶泪腺系统的全部部位注射刀豆球蛋白A来诱导急性或慢性干眼病的方法。该方法优于已报道的其他方法，可建立可重复且稳定的干眼动物模型，适用于药理学药物的研究。...

一种通过刀豆蛋白A注射至泪腺诱导的水样缺乏型干眼病兔模型：在药物疗效研究中的应用

提出一种通过手术切除所有眶部泪腺在兔体内诱导慢性干眼病的新型方法。该方法不同于以往报道的方法，可产生稳定且可重复的水样缺乏型干眼模型，非常适合用于研究泪液生理学与病理生理学以及眼表治疗药物。...

通过完全性泪腺切除术建立兔严重干眼模型

本文介绍了一种通过切除眶外腺和眶下泪腺建立水液缺乏型干眼小鼠模型的方法，并评估水液缺乏型干眼中眼表的变化。...

建立干眼症中水样液缺乏型小鼠模型

我们介绍一种通过将磁性微球注入大鼠眼内以诱导眼内压（IOP）升高的方法，用于模拟青光眼。该方法可引起显著的眼压升高，并导致广泛的神经元死亡。本方案操作简便，无需重复注射，且可产生稳定、持久的眼压升高。...

通过眼内注射磁性微球诱导实验性青光眼

了解通过皮下注射东莨菪碱建立大鼠泪腺功能障碍干眼模型的方法。该模型可用于研究水液缺乏型干眼的发病机制及潜在治疗方案。

一种由东莨菪碱诱导泪腺功能障碍的大鼠干眼模型

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