Name: 使用远端中动脉闭塞技术诱导小鼠急性缺血性卒中 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-15T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: 了解使用经颅电凝法在C57BL/6J小鼠中建立远端中动脉闭塞模型的详细方案，评估神经行为与组织病理学特征。该方法为缺血性卒中研究提供高重复性的可靠实验模型。

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本研究由湖北省自然科学基金（2022CFC057）资助。

实验方案经江汉大学机构动物护理与使用委员会批准，并遵循中国疾病预防控制中心发布的实验动物伦理指南进行。本实验使用10周龄、体重24–26 g的成年雄性C57BL/6J小鼠。所有小鼠均饲养于12小时光照/12小时黑暗循环控制的环境中，并自由获取食物和水 随意摄取
1. 术前准备
注意：本方案所需的关键仪器和设备如图1所示。
<ol>
	<li>手术前，通过高压灭菌法对手术器械进行灭菌。</li>
	<li>术前60分钟，皮下注射美洛昔康（meloxicam），剂量为5 mg/kg，用于镇痛。</li>
	<li>在诱导舱中使用5%异氟烷对小鼠进行麻醉。</li>
	<li>用75%乙醇擦拭加热手术板，并打开加热开关，将温度设定为37 °C。然后将小鼠置于手术板上，呈左侧卧位，头部远离术者，尾部朝向术者。</li>
	<li>将麻醉面罩固定于小鼠面部，持续供给2%异氟烷和0.3 L/min氧气以维持麻醉。在角膜上涂抹眼膏，防止手术过程中角膜干燥。</li>
	<li>使用剃毛器从左侧眼眶至左耳道区域剃除毛发。再使用脱毛膏清除残留毛发，以便消毒。</li>
	<li>使用聚维酮碘消毒剂和75%乙醇重复三次，对手术区域进行准备。</li>
</ol>
2. 远端大脑中动脉阻塞模型
<ol>
	<li>通过脚趾夹捏法检查小鼠的反射，以确认其是否已进入深度麻醉状态。</li>
	<li>使用无菌手术刀片在左侧眼眶与左耳道之间做一垂直切口。</li>
	<li>使用拉钩将皮肤软组织向后牵开，暴露颞肌。</li>
	<li>使用直型显微镊将颞肌的尖部和背部节段从颅骨上分离。</li>
	<li>识别大脑中动脉（MCA）的分叉处，该分叉呈 &#34;Y&#34; 颞骨下方朝向颅底偏斜的形态图 2A). 
	注意：如果大脑中动脉（MCA）的分叉处因解剖学上的正常变异而无法清晰辨认，应确定最靠前的血管。</li>
	<li>使用电动颅骨钻磨薄颅骨，制作一个直径为4 mm的骨窗，直至露出具有半透明质地的硬脑膜。 
	注意：在此过程中，需间歇性地向颅骨滴加生理盐水，以防止过热。</li>
	<li>使用弯头显微镊子去除动脉上方的硬脑膜，以暴露大脑中动脉分支。</li>
	<li>将电凝仪功率设置为 7 W。使用电凝镊在大脑中动脉（MCA）分叉的近端和远端位置对动脉进行电凝。图2A当由于解剖变异导致分叉处不可见时，应在已准确辨认的MCA分支（如上所述）上，于相距约1 mm的两个不同位置进行凝固。13.</li>
	<li>利用激光散斑血流仪监测左侧大脑中动脉皮层支的血流。 
	注意：在电凝后血流减少低于基线值40%的小鼠被排除在研究之外。</li>
	<li>分别使用5-0聚乙醇酸缝线缝合肌肉和皮肤。用无菌棉签将双氯芬酸钠凝胶和莫匹罗星软膏涂抹于皮肤切口处。</li>
	<li>将小鼠放入复苏箱中，监测所有小鼠直至完全清醒。每24小时皮下注射美洛昔康（5 mg/kg）以镇痛。&#160;长达 72 小时。</li>
</ol>
3. 假手术操作
<ol>
	<li>重复上述相同步骤，但不包括动脉凝固过程。</li>
</ol>
4. 行为学实验
注意：在进行dMCAO手术前，小鼠每日接受两次行为学训练，持续3天。在第3天rd dMCAO术后第d，将小鼠转移至行为学测试室，适应环境2 h后再进行测试。
<ol>
	<li>握力测试14 
	&#8203;注意：握力计包含一个推拉式应变仪和一根金属水平杆。
	<ol>
		<li>抓住小鼠尾部的基部，缓慢将其 lowered 向金属握杆，直至小鼠用两只前爪抓住水平杆（图 2B）。</li>
		<li>以约 2 cm/s 的恒定速度向后拉动小鼠，并保持其身体呈水平状态。</li>
		<li>记录小鼠前爪脱离杆时的最大拉力（单位：克，g）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>转杆测试15
	<ol>
		<li>将小鼠放置于一根垂直木杆的顶端（高 50 cm，直径 1 cm），使其头部朝上，允许其自行向下爬行（图 2B）。</li>
		<li>记录小鼠转身所需时间（T-turn）以及完全爬下杆所需的总时间（T-total），设定上限时间为 60 秒。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>胶带剥离测试16
	<ol>
		<li>握住小鼠，将一块粘性胶带（2 × 2 mm）贴在其右前爪上（图 2B）。</li>
		<li>将小鼠放回饲养笼中，使其自由活动。</li>
		<li>记录小鼠去除胶带所需的时间，上限为 60 秒。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>圆筒测试17
	<ol>
		<li>将小鼠放入一个顶部开放的透明玻璃圆筒中（直径：14 cm；高度：20 cm），使用摄像机记录其 3 分钟内的自发直立探索行为（图 2B）。 
		注意：在实验过程中，圆筒两侧放置两面镜子，以确保前肢运动被充分记录。</li>
		<li>在测试下一只小鼠前，用 75% 乙醇擦拭圆筒，以消除残留的嗅觉线索。</li>
		<li>将视频回放速度降低至实际速度的 1/5，统计小鼠使用左前爪（L）、右前爪（R）或双前爪同时（B）接触筒壁的次数。计算右前爪使用率，公式为 (L - R) / (L + R + B) × 100%。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. 灌注与样品制备
<ol>
	<li>通过腹腔注射过量戊巴比妥（300 mg/kg）处死小鼠。将小鼠仰卧位固定，固定四肢。</li>
	<li>在皮肤上做一正中切口，从腹部中段开始，向上延伸至胸部上区。</li>
	<li>使用手术剪打开胸腔，用止血钳将剑突向上翻起。小心移除肺和膈肌，以暴露心脏。</li>
	<li>将灌注针头插入左心室，并用剪刀穿刺右心房。通过左心室以20 mL生理盐水灌注心脏。</li>
	<li>将小鼠断头，沿两眼之间的正中线切开头皮。从颅底开始，沿两侧颅骨剪开，直至眼眶。</li>
	<li>抬起颅骨穹窿，用镊子轻轻将脑组织从颅底剥离。 
	注：一半小鼠的脑组织用于2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色，另一半小鼠的脑组织进行组织学检查。</li>
	<li>将脑组织浸泡于4%多聚甲醛溶液中过夜，以备后续组织学分析。</li>
</ol>
6. 梗死体积的鉴定
<ol>
	<li>将脑组织置于冰箱的 -20 °C 冷冻室中，冷冻 20 分钟。</li>
	<li>将脑组织放入 1 mm 脑切片模具中，使用切片刀将其切成厚度为 2 mm 的冠状切片。</li>
	<li>将脑切片转移至 24 孔细胞培养板中，加入 2% TTC 溶液以完全覆盖脑组织。将 24 孔板置于恒温培养箱中，在 37 °C 条件下孵育 30 分钟。</li>
	<li>小心取出脑切片，置于 4% 多聚甲醛溶液中固定 15 分钟。</li>
	<li>使用扫描仪以 1200 × 1200 dpi 的分辨率对这些脑切片进行光学扫描。</li>
	<li>使用 Image J 软件（https://imagej.net/software/imagej/index）18，通过累加每一切片的梗死面积（右侧半球面积减去左侧未受损区域面积）来测量脑梗死体积。以梗死体积与右侧半球体积的比值乘以 100%，计算梗死体积百分比。</li>
</ol>
7. 组织病理学与免疫荧光染色分析
<ol>
	<li>从多聚甲醛溶液中取出脑组织样本，用流水冲洗 1 小时。</li>
	<li>将脑组织样本转移至自动组织脱水机中，启动预设程序进行脱水、透明和浸蜡处理。将脱水后的脑组织样本包埋于石蜡中，并用切片机切成 5-µm 厚的切片。</li>
	<li>苏木精-伊红（H&amp;#38;E）染色
	<ol>
		<li>用二甲苯对切片脱蜡，每次 8 分钟，共 3 次。</li>
		<li>依次将切片浸入梯度乙醇（100%、95%、90%、80%、70%）及蒸馏水中，每次 5 分钟，进行再水化。</li>
		<li>用苏木精染液对切片染色 5 分钟。</li>
		<li>用蒸馏水冲洗切片以去除残留的苏木精，随后将切片浸入 5% 盐酸乙醇中分化 5 秒。再用蒸馏水洗涤 2 分钟。</li>
		<li>用伊红染液对切片染色 30 秒，然后用蒸馏水洗去多余的染液。</li>
		<li>依次将切片浸入 90% 乙醇、95% 乙醇、100% 乙醇和二甲苯（2 次）中，每次 5 分钟。最后用中性树胶封片剂封片。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>免疫荧光染色
	<ol>
		<li>用二甲苯对切片脱蜡，每次 8 分钟，共 3 次。</li>
		<li>依次将切片浸入梯度乙醇（100%、95%、90%、80%、70%）及蒸馏水中，每次 5 分钟，进行再水化。</li>
		<li>将柠檬酸抗原修复液放入微波炉中加热至沸腾。将切片浸入抗原修复液中，再以低功率（20 W）继续加热修复液 20 分钟。</li>
		<li>关闭微波炉，使抗原修复液冷却至室温（RT）。</li>
		<li>用 0.1 mM 磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。</li>
		<li>在室温下用封闭液（5% 牛血清白蛋白）孵育切片 1 小时，以阻断免疫球蛋白的非特异性结合。</li>
		<li>在 4˚C 下用兔抗 NeuN 抗体（1:300）、兔抗 Iba-1 抗体（1:500）和小鼠抗 GFAP 抗体（1:500）孵育切片过夜。</li>
		<li>用 0.1 mM PBS 洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。</li>
		<li>在室温下用 Alexa 594 标记的山羊抗兔 IgG（1:500）或 Alexa 488 标记的山羊抗小鼠 IgG（1:500）孵育切片 1 小时。</li>
		<li>用 0.1 mM PBS 洗涤切片，并用含 4',6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）的抗荧光淬灭封片剂封片。</li>
		<li>使用荧光显微镜分别在 594 nm 和 488 nm 波长下，采集缺血半暗带区域内三个显微视野（300 µm × 300 µm）的图像。</li>
		<li>使用 ImageJ 软件（https://imagej.net/software/imagej/index），通过计算缺血半暗带区域内阳性染色细胞数量的平均值，估算细胞密度19。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Occlusion of Distal Middle Artery to Develop an Ischemic Stroke Mouse Model

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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

在当前的开颅电凝法远端大脑中动脉阻塞（dMCAO）模型方案中，手术操作具有最小侵入性，仅需分离部分颞肌，以减轻对咀嚼功能的不良影响。所有小鼠术后恢复良好，未观察到进食困难的情况。小鼠颞骨区域的大脑中动脉（MCA）易于辨识，从而有助于精确确定合适的开颅位置。该dMCAO模型所诱导的缺血性病灶局限于大脑皮层外侧区域，与Llovera G等先前报道的结果一致13。此外，该模型产生的梗死体积约为16%，与大多数人类缺血性脑卒中病例中观察到的梗死体积相近20。
多个实验室已采用开颅电凝法远端大脑中动脉阻塞（dMCAO）模型来研究缺血性脑卒中的病理生理机制及其药物干预。值得注意的是，上述大多数实验研究仅采用多种评分量表来评估脑卒中后小鼠的基本反射和肢体运动功能。6,21从我们的角度来看，这些估计值似乎缺乏精确性，因而不足以用于评估卒中后的神经功能损伤。为解决这一问题，我们设计了一系列...

脑卒中是一种常见的急性脑血管疾病，具有高致残率和高致死率的特点1。在所有脑卒中病例中，近80%属于缺血性脑卒中2。迄今为止，静脉溶栓仍是治疗急性缺血性脑卒中为数不多的有效方法之一。然而，溶栓治疗的效果受限于狭窄的有效时间窗以及出血性转化的发生3。在缺血性脑卒中后的长期康复阶段，大量患者可能出现持久的神经功能障碍4。迫切需要进一步研究以阐明缺血性脑卒中的潜在病理生理机制，并推动针对缺血性脑卒中的新型治疗策略的开发。建立可靠且可重复的缺血性脑卒中模型，对于缺血性脑卒中领域的基础研究及后续的转化研究至关重要。
1981年，Tamura 等人通过在大脑中动脉（MCA）近端部位采用经颅电凝法，建立了局灶性脑缺血模型5。自那时以来，众多研究人员已采用结扎、压迫或夹闭等多种方法诱导远端大脑中动脉闭塞（dMCAO），以建立短暂性或永久性缺血性卒中模型6,7,8。与线栓模型相比，dMCAO 模型具有梗死体积更小、存活率更高的显著优势，因此更适合用于研究缺血性卒中后的长期功能恢复9。此外，dMCAO 模型在老年啮齿类动物中的存活率高于线栓模型，使其成为研究老年及合并症动物模型中缺血性卒中的有利工具10。光化学法（PT）卒中模型已被证明具有手术创伤小、死亡率显著较低的特点。然而，与 dMCAO 模型相比，PT 模型表现出更明显的细胞坏死和组织水肿，导致侧支循环缺失11。此外，值得注意的是，PT 模型中观察到的缺血性病灶主要源于微血管闭塞，这与 dMCAO 模型中由大血管栓塞引起的脑缺血存在显著差异12。
本文介绍了通过小骨窗开颅术凝闭远端大脑中动脉以建立小鼠dMCAO模型的方法学。此外，我们进行了组织学检查和行为学评估，以全面表征该实验模型中的缺血性损伤及脑卒中结局。本研究旨在帮助研究人员熟悉该模型，并推动对缺血性脑卒中病理机制的进一步探索。

<table><tbody><tr><td>2,3,5-三苯基四氮唑&lt;br/&gt; 氯化物（TTC）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108380</td><td>TTC 染色用染料</td></tr><tr><td>24 孔培养板</td><td>Corning (USA)</td><td>CLS3527</td><td>TTC 染色用容器</td></tr><tr><td>4% 多聚甲醛</td><td>武汉赛维尔生物科技&lt;br/&gt; 有限公司</td><td>G1101</td><td>组织固定</td></tr><tr><td>5% 牛血清白蛋白</td><td>武汉博士德生物工程有限公司</td><td>AR004</td><td>非特异性抗原封闭</td></tr><tr><td>5-0 聚乙醇酸缝合线</td><td>金环医疗有限公司</td><td>KCR531</td><td>手术材料</td></tr><tr><td>麻醉机</td><td>Midmark Corporation</td><td>VMR</td><td>动物麻醉</td></tr><tr><td>抗荧光淬灭封片剂</td><td>碧云天生物技术</td><td>P0131</td><td>免疫荧光染色封片</td></tr><tr><td>全自动组织脱水&amp;nbsp;&lt;br/&gt; 机</td><td>Leica Biosystems (德国)</td><td>TP1020</td><td>组织脱水</td></tr><tr><td>脱毛膏</td><td>Veet (法国)</td><td>20220328</td><td>手术材料</td></tr><tr><td>双氯芬酸&amp;nbsp;钠&amp;nbsp;凝胶</td><td>武汉马应龙药业&lt;br/&gt; &amp;nbsp;股份有限公司</td><td>H10950214</td><td>动物镇痛</td></tr><tr><td>钻头（0.8 mm）</td><td>Rwd Life Science Co., Ltd.</td><td></td><td>手术设备</td></tr><tr><td>伊红染色液</td><td>武汉赛维尔生物科技&lt;br/&gt; 有限公司</td><td>G1001</td><td>H&amp;E 染色用染料</td></tr><tr><td>眼膏</td><td>广州医药有限公司</td><td>H44023098</td><td>手术材料</td></tr><tr><td>荧光显微镜</td><td>Olympus (日本)</td><td>BX51</td><td>图像采集</td></tr><tr><td>GFAP 小鼠单克隆抗体</td><td>Cell Signaling Technology Inc.&lt;br/&gt; (Danvers, MA, USA)</td><td>3670</td><td>免疫荧光染色一抗</td></tr><tr><td>山羊抗小鼠 Alexa&lt;br/&gt; 488 标记 IgG</td><td>Cell Signaling Technology Inc.&lt;br/&gt; (Danvers, MA, USA)</td><td>4408</td><td>免疫荧光染色二抗</td></tr><tr><td>山羊抗兔 Alexa&lt;br/&gt; 594 标记 IgG</td><td>Cell Signaling Technology Inc.&lt;br/&gt; (Danvers, MA, USA)</td><td>8889</td><td>免疫荧光染色二抗</td></tr><tr><td>握力计</td><td>上海欣软信息科技有限公司</td><td>XR501</td><td>行为学实验设备</td></tr><tr><td>苏木精染色液</td><td>武汉赛维尔生物科技&lt;br/&gt; 有限公司</td><td>G1004</td><td>H&amp;E 染色用染料</td></tr><tr><td>Iba1 兔单克隆抗体</td><td>Abcam</td><td>ab178846</td><td>免疫荧光染色一抗</td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>Rwd Life Science Co., Ltd.</td><td>R510-22-10</td><td>动物麻醉</td></tr><tr><td>激光多普勒血流仪</td><td>Moor Instruments (英国)</td><td>moorVMS</td><td>血流监测</td></tr><tr><td>美洛昔康</td><td>勃林格殷格翰</td><td>J20160020</td><td>动物镇痛</td></tr><tr><td>微型钻机</td><td>Rwd Life Science Co., Ltd.</td><td>78001</td><td>手术设备</td></tr><tr><td>显微外科器械套装</td><td>Rwd Life Science Co., Ltd.</td><td>SP0009-R</td><td>手术设备</td></tr><tr><td>切片机</td><td>Thermo Fisher Scientific (USA)</td><td>HM325</td><td>组织切片制备</td></tr><tr><td>切片机刀片</td><td>Leica Biosystems (德国)</td><td>819</td><td>组织切片制备</td></tr><tr><td>单极电凝发生器</td><td>Spring Scenery Medical Instrument&lt;br/&gt; Co., Ltd.</td><td>CZ0001</td><td>手术设备</td></tr><tr><td>莫匹罗星软膏</td><td>天津史克&&lt;br/&gt; 弗朗实验室有限公司</td><td>H10930064</td><td>动物抗感染</td></tr><tr><td>NeuN 兔单克隆抗体</td><td>Cell Signaling Technology Inc.&lt;br/&gt; (Danvers, MA, USA)</td><td>24307</td><td>免疫荧光染色一抗</td></tr><tr><td>中性树胶</td><td>Absin 生物科学</td><td>abs9177</td><td>H&amp;E 染色封片剂</td></tr><tr><td>石蜡包埋中心</td><td>Thermo Fisher Scientific (USA)</td><td>EC 350</td><td>制备石蜡包埋块</td></tr><tr><td>戊巴比妥钠</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3761</td><td>动物安乐死</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液</td><td>上海碧云天生物科技有限公司</td><td>C0221A</td><td>组织切片洗涤</td></tr><tr><td>剃毛器</td><td>深圳科多士电器&lt;br/&gt; 有限公司</td><td>CP-9200</td><td>手术设备</td></tr><tr><td>柠檬酸钠溶液</td><td>上海碧云天生物科技有限公司</td><td>P0083</td><td>免疫荧光染色抗原修复</td></tr></tbody></table>

采用远端中动脉阻塞技术诱导小鼠急性缺血性脑卒中

Induction of Acute Ischemic Stroke in Mice Using the Distal Middle Artery Occlusion Technique

缺血性脑卒中仍是全球成年人群中导致死亡和功能障碍的主要原因。仅有少数缺血性脑卒中患者能够在最佳时间窗内接受血管内溶栓或机械取栓治疗。在这些脑卒中幸存者中，约有三分之二在较长时间内存在神经功能障碍。建立稳定且可重复的实验性缺血性脑卒中模型，对于深入研究其病理生理机制以及开发有效的治疗策略具有重要意义。大脑中动脉（MCA）是人类缺血性脑卒中最常见的发病部位，MCA闭塞是局灶性脑缺血常用的模型。在本实验方案中，我们描述了通过经颅电凝法在C57BL/6小鼠中建立远端MCA闭塞（dMCAO）模型的方法。由于闭塞部位位于MCA的皮质分支，该模型产生的梗死病灶范围适中，且局限于大脑皮层。神经行为学和组织病理学特征分析表明，该模型可出现明显的运动功能障碍、神经元变性，以及小胶质细胞和星形胶质细胞的显著活化。因此，该dMCAO小鼠模型为研究缺血性脑卒中提供了有价值的工具，具有推广价值。

进行远端大脑中动脉阻塞（dMCAO）的关键仪器包括显微外科器械套装、异氟烷麻醉蒸发器以及单极显微外科电凝发生器，如图1所示。本研究的实验流程如图2所示。简而言之，采用小骨窗开颅术暴露远端大脑中动脉（MCA），随后对其进行电凝以在C57BL/6小鼠中诱导永久性局灶性脑缺血。此外，在dMCAO术后3天，通过TTC染色、组织学检查和行为学评估来评价缺血性损伤及卒中结局。在手术过程中，仅1只小鼠因手术出血死亡，其余所有小鼠均在术后3天观察期内存活。
大体观察显示，远端大脑中动脉阻塞（dMCAO）在皮层引起明显的充血和水肿（图3A，底部）。假手术组未观察到明显的大体改变（图3A，顶部）。此外，通过TTC染色也证实了dMCAO诱导的皮层梗死（图3B）。dMCAO组术后3天的梗死体积为16.6% ± ...

本文介绍了一种通过经颅电凝法在C57BL/6J小鼠中建立远端大脑中动脉阻塞（dMCAO）模型的实验方案，并对随后的神经行为学表现及组织病理学特征进行评估。

缺血性脑卒中仍是全球成年人群中导致死亡和功能障碍的主要原因。仅有少数缺血性……

本研究旨在提供一套全面且详细的方案，通过经颅电极计算法建立C57BL/6NJ小鼠大脑中动脉闭塞模型，并评估其后续的神经行为学表现及组织病理学特征。大脑中动脉（MCA）被认为是人类缺血性脑卒中的主要受累血管。MCA闭塞方法，包括开颅环绕技术、局部化学诱导以及形态学闭塞法，已被广泛用于在啮齿类动物中诱导局灶性脑缺血。与其他缺血性卒中模型相比，该模型具有手术创伤更小、梗死体积更小以及存活率更高的优势，因此更适合用于研究缺血性卒中后的长期功能恢复。总体而言，当前方法能够有效建立一种可重复性好、存活率高的可靠实验性缺血性卒中模型。因此，该方法学为卒中领域的基础与转化研究提供了极为宝贵的工具。未来，我们将采用行为学范式（如新物体识别和水迷宫实验），研究远端大脑中动脉阻塞小鼠在长期学习与记忆能力方面的动态变化，从而评估其作为卒中后认知功能障碍研究动物模型的可行性。首先，用75%乙醇擦拭加热手术板，并将温度设置为37摄氏度。将麻醉后的小鼠置于板上右侧卧位，头部朝外。为防止角膜干燥，涂抹眼膏。从左侧眼眶至左耳道区域剃除毛发后，使用脱毛膏去除残留的毛发。用聚维酮碘和75%乙醇对术区消毒三次。进行足趾挤压评估。在左侧眼眶与左侧耳道之间做一垂直切口，牵开软组织以暴露颞肌。使用直型显微镊子，将颞肌的尖端和背侧部分从颅骨上分离。在颞骨下方识别大脑中动脉（即 MCA）的 Y 形分叉。然后，使用电动颅骨钻将颅骨磨薄，制作骨窗，直至蛛网膜下腔可见。使用弯头显微镊子去除大脑中动脉上方的硬脑膜。利用电凝镊对分叉近端和远端位置的动脉进行凝固。在激光散斑血流仪中监测左侧大脑中动脉皮质支的血流情况。然后，使用聚乙醇酸缝线分别缝合肌肉和皮肤，并在皮肤切口处涂抹双氯芬酸钠凝胶和莫匹罗星软膏。将小鼠置于恢复室中。为了在先前建立的远端大脑中动脉闭塞（MCAO）模型中进行抓力测试，抓住小鼠尾巴的后段，缓慢降低小鼠，使其用双前爪抓住水平横杆。保持身体水平，以每秒两厘米的恒定速度向后拉动小鼠。当小鼠前爪脱离横杆时，记录以克为单位的最大拉力。进行转棒实验时，将小鼠垂直放置在木棒顶端。记录小鼠转身所用的时间以及小鼠从杆上完全爬下所需的总时间，设定60秒为上限时间。进行粘附测试时，将一片胶带贴在小鼠的右前爪上。将小鼠放回直立笼中，记录小鼠移除胶带所需的时间，同样以60秒为上限时间。进行圆筒实验时，用75%乙醇擦拭开口的透明玻璃圆筒，并将小鼠放入其中。使用摄像机记录其3分钟内的自发直立探索行为。与假手术组相比，远端大脑中动脉闭塞（MCAO）小鼠的抓握力和对侧前爪使用率显著降低。此外，闭塞小鼠在拉力测试中的下降时间以及去除粘性胶带所需的时间均显著增加。首先，在行为学测试结束后，获取安乐死的远端大脑中动脉闭塞（MCAO）小鼠模型的离体脑组织，并将其置于 -20 °C 冰箱中冷冻 20 分钟。随后，将脑组织放入 1 毫米脑切片矩阵中，使用切片刀将脑组织切成 2 毫米厚的冠状切片。将脑切片转移至24孔培养板中，并加入2%TTC以覆盖脑组织。在37°C下孵育30分钟。随后，用4%多聚甲醛溶液小心固定脑切片15分钟。使用扫描仪对脑组织切片进行光学扫描。脑组织的组织学分析显示，在远端大脑中动脉阻塞小鼠的梗死周围区域，神经元细胞排列紊乱，且 NeuN 阳性细胞密度显著降低。

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使用远端中动脉闭塞技术诱导小鼠急性缺血性卒中

大脑中动脉线栓法阻塞是研究小鼠缺血性脑卒中的常用模型。...

小鼠卒中模型——线栓法大脑中动脉阻塞

我们在视频中演示了一种使用血管内单丝线栓在成年小鼠中建立大脑中动脉闭塞的方法。同时展示了如何通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色来评估脑梗死范围。...

小鼠大脑中动脉闭塞模型

大脑中动脉闭塞（MCAO）的管腔内模型是实验性缺血性卒中模型中最常用的模型。本文将结合激光多普勒血流仪的引导，详细演示该模型的全部操作步骤及其典型结果。...

小鼠缺血性卒中激光多普勒血流仪引导下经腔内大脑中动脉阻塞（MCAO）模型

本文介绍了小鼠大脑中动脉腔内阻塞模型。通过神经功能评分和焦油紫染色来评估脑梗死范围，后者是TTC染色的一种替代方法，具有可同时平行检测多种目的标志物的显著优势。...

大脑中动脉闭塞（MCAO）小鼠模型：通过焦油紫染色评估脑梗死

多种小鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型广泛应用于实验性脑科学研究。本文展示了经颅永久性远端MCAO模型，该模型可产生稳定的皮质梗死，其大小与大多数人类缺血性卒中所造成的损伤相当。...

小鼠卒中模型：远端大脑中动脉永久性凝闭

为了理解脑卒中的病理生理学机制，使用可靠的模型至关重要。本文将介绍小鼠中最常用的脑卒中模型之一，即大脑中动脉闭塞（MCAo）模型（也称为血管内丝线或缝线模型），并包含再灌注过程。...

小鼠大脑中动脉闭塞与再灌注诱导脑卒中的手术方法

我们描述了一种通过使用硅胶包被的缝合线阻塞大脑中动脉来诱导小鼠脑卒中的模型。该方案可用于诱导永久性阻塞，或诱导短暂性缺血后进行再灌注。...

采用大脑中动脉阻塞技术诱导小鼠缺血性卒中与缺血-再灌注及梗死区域的可视化

大脑中动脉内栓线阻塞是啮齿类动物实验性脑卒中最常用的体内模型。本文采用一种可实现颈总动脉修复的替代性外科手术方法，能够恢复颈总动脉的血流，并实现大脑中动脉供血区域的完全再灌注。...

小鼠经颈总动脉修复实现再灌注的中脑动脉闭塞模型

建立小鼠脑缺血-再灌注模型以研究中风的病理生理学机制。我们结扎右侧大脑中动脉远端和右侧颈总动脉，并在缺血10或40分钟后恢复血流。...

双血管阻断小鼠脑缺血-再灌注模型

本方案展示了一种具有中等大小梗死灶且存活率极佳的独特小鼠卒中模型。该模型可使临床前卒中研究者延长缺血时间、使用老龄小鼠，并评估长期功能学结果。...

一种改良的经颅大脑中动脉阻塞模型用于研究老年小鼠的中风结局

本方案描述了通过大脑中动脉腔内阻塞建立小鼠短暂性局灶性脑缺血模型的方法。此外，还展示了使用磁共振成像和行为学测试进行结果评估的示例。...

短暂性大脑中动脉闭塞卒中模型

了解使用经颅电凝法在C57BL/6J小鼠中建立远端中动脉闭塞模型的详细方案，评估神经行为与组织病理学特征。该方法为缺血性卒中研究提供高重复性的可靠实验模型。

采用远端中动脉阻塞技术诱导小鼠急性缺血性脑卒中

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