Name: 中药中药汤剂在骨肉瘤模型小鼠中的强饲策略 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-07T13:20:00.000+00:00
Duration: 3 min 11 s
Description: 学习中药汤剂在骨肉瘤小鼠模型中的标准化制备与灌胃给药技术。本方案采用白花蛇舌草与半枝莲等草药煎煮，确保动物等量给药，提高实验数据的可靠性。

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本研究工作得到了以下资助：（1）国家自然科学基金（81973877 和 82174408）；（2）国家重点研发计划&amp;中国国家重点研发计划（2020YFE0201600）、上海市优先建设研究重点中心项目（2022ZZ01009）、上海市医院中药制剂产业转化协同创新中心项目、上海中医药大学校内预算科研项目（2021LK047）

本方案以益气解毒汤为例，详细描述了在骨肉瘤模型小鼠中进行灌胃操作的技术。实验选用4周龄雄性裸鼠（BALB/c nude），饲养于上海中医药大学实验动物中心的SPF级动物房。所有动物实验均经上海中医药大学动物管理与伦理委员会批准，遵循《实验动物伦理准则》（动物伦理批准编号：PZSHUTCM2304060007），并严格依照国际有关实验动物的管理要求进行。
1. 材料
<ol>
	<li>准备以下材料：中草药（人参 42 g、Hedyotis diffusa 52.5 g、黄芩 31.5 g）、1 mL 注射器和 12G/55 mm 弯头灌胃针（图 1）。</li>
</ol>
2. 剂量确定
<ol>
	<li>按以下方法计算每日剂量：标准体重为60 kg的成人的每日剂量为人参12 g， Hedyotis diffusa 15 g，黄芩9 g，共计36 g饮片，即0.6 g饮片/kg体重。参照成人体重60 kg与小鼠体重25 g之间的体表面积换算，等效剂量为12倍，低剂量为6倍，高剂量为24倍11，以及我们的初步数据，在本研究中对小鼠采用20倍剂量比例的益气解毒汤，因此小鼠给药剂量为12 g煎煮药材/kg体重。</li>
	<li>使用以下公式计算每只小鼠的剂量： 
	小鼠剂量（标准体重）= 成人剂量（标准体重）× 20（指定等效剂量比）。 
	每只小鼠每日剂量为0.3 g［（12 g 药材/1000 g 体重）× 25 g 体重］，溶于200 µL溶液中，终浓度为1.5 g/mL。</li>
	<li>计算益气解毒汤灌胃组小鼠（n=7）连续给药28天所需的总药材量为58.8 g，浓缩至39.2 mL，得到终浓度为1.5 g/mL。</li>
	<li>考虑到煎煮和灌胃过程中可能存在的药物损失，以及计算的便利性，共准备126 g（人参42 g， Hedyotis diffusa 52.5 g，尖叶黄芩草31.5 g）煎煮用中药，浓缩至终体积84 mL。</li>
</ol>
3. 细胞来源与培养
<ol>
	<li>从 ATCC 细胞库购买人源 143B 骨肉瘤细胞。</li>
	<li>在 10 cm 细胞培养皿中接种 1 × 106 个 143B 细胞，加入 10 mL 含 10% 胎牛血清（FBS）、100 U/mL 青霉素和 100 µg/mL 链霉素的 MEM 培养基。</li>
	<li>将 143B 细胞在 37 °C、5% CO2 的培养箱中培养，直至细胞融合度达到 80%–90%。</li>
</ol>
4. 建模方法
<ol>
	<li>收集80%汇合度的培养143B细胞，重悬于6 mL含10%血清的MEM培养基中，按体积比1:1与基底膜基质凝胶混合，制备终浓度为1 × 10⁷个细胞/mL的细胞悬液。7 cells/mL</li>
	<li>向每只裸鼠的左侧胫骨注射10 µL细胞悬液以建立模型 原位 异种移植骨肉瘤小鼠模型，如我们先前发表的文章所述12步骤简述如下。
	<ol>
		<li>用 PBS 洗涤细胞 2 次。加入 1.5 mL 0.25% 胰蛋白酶消化 3 分钟。加入 6 mL 含 10% 血清的 MEM 培养基。将细胞收集至 15 mL 离心管中。</li>
		<li>将20 µL细胞悬液吸入细胞计数板的计数室中，使用自动细胞计数仪计算细胞浓度。以800 x g离心细胞 g 室温下孵育5分钟。</li>
		<li>用移液器弃去上清液，将细胞沉淀重悬于8.5 mg/mL基底膜基质中，并置于冰上。</li>
		<li>使用2%异氟烷和98%氧气（氧气流速为2 L/min）对小鼠进行麻醉。在麻醉期间，于小鼠眼部涂抹少量兽用眼膏以防止角膜干燥。</li>
		<li>在通风良好的区域进行整个操作过程。在注射骨肉瘤细胞前，通过轻触小鼠足部检查其是否处于深度麻醉状态；如果小鼠仍有抽动或惊跳等反应，则需继续麻醉。&#160;如果小鼠仍有反应（如抽搐或抖动），需等待更长时间，直至这些反应消失。</li>
		<li>将小鼠置于仰卧位。用拇指和食指固定小鼠踝部，使用碘伏和70%乙醇棉片交替擦拭胫骨注射部位，共进行三轮消毒。</li>
		<li>将针头连接至1 mL注射器，针尖指向胫骨平台的注射部位，并与胫骨长轴平行。经皮插入针头，在胫骨平台上钻孔，方向朝向胫骨远端。</li>
		<li>将先前置于冰上的骨肉瘤细胞悬液吸入微量注射器中，并用该装载骨肉瘤细胞的微量注射器替换胫骨处原有的1 mL注射器。缓慢注射约10 µL（1 × 10⁶）细胞。7 将骨肉瘤细胞悬液（细胞浓度为 cells/mL）注入每只无胸腺小鼠的胫骨中。</li>
		<li>将微量注射器从注射部位取出，用棉签按压注射部位约30秒。将小鼠放回清洁的笼子中，观察其恢复情况10分钟。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. 灌胃用中药汤剂处方的制备（&#160;图2）
<ol>
	<li>按照步骤2计算剂量。</li>
	<li>除名贵药材人参外，将所有用于煎煮的中药材用饮用水浸泡，水量高出药面约3 cm，浸泡30分钟，然后按以下方法进行两次煎煮。</li>
	<li>第一次煎煮时，先用武火加热至沸腾，然后改用文火加热15–25分钟。文火指低功率加热，温度通常在80 °C至100 °C之间；武火指高功率加热，温度通常在200 °C至300 °C之间。</li>
	<li>将煎煮液倒入一个容器中。</li>
	<li>第二次煎煮时，在饮水中加入药材，水量以刚好浸没药面为宜，先用武火加热至沸腾，然后改用文火加热15–25分钟。</li>
	<li>将第二次煎煮所得药液倒入与步骤5.4相同的容器中。</li>
	<li>由于人参较为贵重，需单独浸泡并煎煮42 g，加饮用水至高出药面3 cm。</li>
	<li>将已浸泡的人参用武火煎煮60分钟。 
	将煎煮液倒入与步骤5.4相同的容器中。</li>
	<li>第二次煎煮人参时，加入适量饮用水，水量以刚好浸没药面为宜，用文火加热40分钟，煎煮液同样倒入与步骤5.4相同的容器中。 
	注意：煎煮所用容器应具有化学稳定性，例如砂锅（临床最常用）、陶瓷、玻璃或不锈钢材质，以避免与药物成分发生化学反应。不同步骤所得的所有煎煮液均需收集至同一容器中。</li>
	<li>使用三层纱布固定于量杯口部（以橡皮筋扎紧），对混合后的煎煮液进行过滤。</li>
	<li>将过滤后的药液倒入锅中，先用武火煮沸，随后转为文火持续加热，直至达到目标浓度（最终体积为84 mL，终浓度为1.5 g/mL）。</li>
	<li>根据一周内经口灌胃给药所需的剂量，将浓缩药液分装为每份21 mL，并于-20 °C冰箱中保存。</li>
</ol>
6. 使用灌胃装置对小鼠进行灌胃给药
<ol>
	<li>将小鼠放置在鼠笼表面或其他较粗糙的表面上。</li>
	<li>用右手的拇指和食指抓住小鼠尾巴，然后用左手的拇指、食指和中指抓住小鼠颈部。</li>
	<li>用左手的其余两个手指固定小鼠尾巴，使小鼠的头部、颈部和身体呈一条直线。 
	注意：在整个抓持过程中应确保小鼠处于放松状态。如果小鼠持续挣扎，应重复抓持操作直至其放松。</li>
	<li>用右手持灌胃装置，为一只体重为 20 g 的小鼠加载 200 µL 的煎剂配方（每 10 g 体重给予 100 µL 煎剂配方）。</li>
	<li>从口角处将灌胃针插入小鼠口腔，并将舌头推向其上颌。</li>
	<li>保持小鼠身体方向不变，沿食道轻柔推进灌胃针，直至约有 10 mm 长度的灌胃针留在体外。 
	注意：当灌胃针进入食道时会有空虚感。灌胃针插入的长度应测量至胸骨上缘。灌胃针总长度为 60 mm（图3），因此在将煎剂注入小鼠胃内之前，应将约 50 mm 的灌胃针插入小鼠体内。</li>
	<li>将煎剂注入小鼠胃内。若遇到阻力或有液体从口角溢出，提示灌胃针位置错误，必须避免。此外，若煎剂较为黏稠，注射速度应减慢。</li>
	<li>释放小鼠并观察 10 分钟。若未见呼吸异常，则表明灌胃成功，可将小鼠放回鼠笼（图4）。</li>
</ol>
7. 治疗过程
<ol>
	<li>为探究益气解毒汤的治疗效果，设立对照组和益气解毒汤组。对对照组小鼠每日给予生理盐水，连续给药28天；对益气解毒汤组小鼠每日给予益气解毒汤，连续给药28天。</li>
</ol>
8. 不良反应
<ol>
	<li>将小鼠放回笼中后，需密切观察其状态，包括因食物无法进入胃内而导致的体重下降和精神状态减退。</li>
	<li>由于食物引起的气管阻塞，小鼠会出现呼吸困难和气促，并通过咳嗽试图清除气管。若在灌胃过程中出现上述任何症状，应立即停止操作，并&#160;实施安乐死。</li>
</ol>

Herb Decoction Formulation and Gavage Standardization in Osteosarcoma Mice

<ol><li>Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGao%2C+S+%22Chinese+Community+Physicians+%28Comprehensive+Edition%29%22">Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition)</a>. (21), 12(2005).</li>
<li>Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. , (2015).</li>
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<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+strategies+in+standard+decoction+of+medicinal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22China+J+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Research strategies in standard decoction of medicinal slices.</a> China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).</li>
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<li>Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+mice+undergoing+serial+oral+gavage+while+awake+or+anesthetized%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Animal+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized.</a> J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).</li>
<li>Recena Aydos, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonalcoholic+fatty+liver+disease+induced+by+high-fat+diet+in+C57bl%2F6+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models.</a> Nutrients. 11 (12), 3067(2019).</li>
</ol>

作者声明无任何利益冲突。

中药处方中草药的临床疗效在很大程度上与给药剂量和剂型相关；因此，在临床实践中建立标准化的煎煮方法和熟练的给药流程十分必要，同时也可提高实验结果的可靠性。
本研究首先提供了一套针对临床实践中中医药常用中药饮片标准化煎煮的详细方案，有助于指导人们科学地煎煮药物，实际提升汤剂的质量以及中药的临床疗效；因此，一旦实现标准化，将提高中药在临床应用中疗效的准确性和一致性。
灌胃法作为一种口服给药方式，已广泛应用于临床前研究，并适用于多种实验动物，包括小鼠、大鼠和兔子，具有操作简便、剂量控制准确以及能够模拟临床给药途径等优点13。然而，若在未麻醉的情况下将动物固定于不正确的位置，动物可能会剧烈挣扎，这不仅威胁研究人员的健康安全，还可能降低实验的可靠性。因此，建立标准化的灌胃操作方法至关重要，可有效减少此类风险，避免药液误入气管或造成食管损伤，进而导致动物死亡和实验失败。
本研究选择灌胃途径将汤剂配方给予骨肉瘤模型小鼠，因为该方法可精确控制给药剂量，并确保整个实验过程中药物递送的一致性。制备汤剂配方时，我们首先根据成人（体重60 kg）用药量的20倍比例，计算出适用于小鼠的汤剂药材用量；加水浸泡后，加热煮沸并煎煮两次；过滤浓缩后，将汤剂分装并储存在-20 °C条件下。进行灌胃操作时，将200 µL浓缩汤剂装入灌胃装置中，将灌胃针经小鼠口腔插入，轻柔推进至胃部，随后将汤剂注入小鼠胃内。我们的研究结果之一是，通过灌胃给予益气解毒汤剂配方的实验组中，肿瘤生长受到显著抑制。与对照组相比，益气解毒汤剂组小鼠的肿瘤体积明显减小。这些结果表明，灌胃策略能够有效地将汤剂中的活性成分递送至靶部位，从而产生显著的抗肿瘤作用。此外，我们通过在整个实验期间监测小鼠的一般状况和体重变化，评估了灌胃策略的安全性。结果显示，益气解毒汤剂灌胃组与对照组之间在体重变化或毒性反应方面均无显著差异，表明该汤剂配方的灌胃给药方式耐受性良好，未引起明显不良反应。
尽管灌胃策略在将中药复方递送至实验动物方面证明有效，但必须认识到该给药方法可能引发的不良反应及其某些局限性。为避免食物导致气管阻塞，需在灌胃过程中及之后密切观察小鼠状态，例如是否出现呼吸困难、气促和咳嗽等症状。一旦出现上述任何症状，应立即停止灌胃操作，并将小鼠置于水平硬质台面上进行胸部按压；此外，若出现严重状况，必须立即寻求兽医帮助。同时，还需特别关注以下局限性。首先，灌胃可能引起动物应激反应，从而可能影响其整体生理状态及对治疗的反应。为此，我们已采取措施以尽量减少应激，包括使用细小的喂养针头并在操作过程中轻柔地处理小鼠。此外，灌胃操作必须由经过专门培训并具备资质的人员执行，以确保采用标准化技术，避免对动物造成潜在伤害14。其次，目前尚不清楚该中药复方中活性成分发挥抗肿瘤作用的具体机制。灌胃策略可能改变中药化合物的药代动力学和药效学特性，进而可能影响其生物利用度和治疗效果。未来的研究应着重阐明通过灌胃途径递送的中药复方产生抗肿瘤作用的精确机制。此外，已有研究报道，在长期灌胃过程中使用异氟烷麻醉可减少因操作不熟练导致的药液摄入不全及动物死亡15&#160;。同时，在药液中添加食用油可减轻与灌胃相关的动物应激反应16。
综上所述，我们提供了中药饮片标准化煎煮流程以及小鼠灌胃给药的熟练操作策略。这些措施不仅避免了实验小鼠可能发生的食管损伤和死亡，还防止了药物溢出，确保每只实验动物均接受等量的中药制剂，从而提高了实验结果的准确性和一致性，同时也提升了治疗效果。本研究证实了在骨肉瘤小鼠模型中采用灌胃方式给予中药汤剂配方的有效性与安全性。这些结果凸显了该给药方法在骨肉瘤治疗中的潜在应用价值，并为进一步优化中药灌胃给药策略的研究奠定了基础。此外，未来的研究应深入探讨该汤剂配方中活性成分的确切作用机制，并探索其与其他治疗方式可能存在的协同效应，以增强骨肉瘤患者的治疗效果。因此，这些发现阐明了该给药方法的潜在优势与局限性，为其在骨肉瘤治疗中的应用提供了有价值的科学依据。

汤剂是中药最常用的剂型，也是液态药物制剂1,2。中药汤剂的制备方法是将药材加水浸泡后煎煮，再经过滤除去药渣而成。
由于汤剂处方可根据临床需要进行个体化调整，尤其符合中医循证治疗的特点，这种剂型 通过 经口给药在临床实践中已应用数千年，具有特定且不可替代的优势3,4汤剂的质量与临床疗效直接相关。&#160;因此，汤剂处方必须依据标准化煎煮方法的原则进行制备，以确保有效成分得到最大程度的提取和保护3同时，饮片是临床使用中药材的主要形式；处方用饮片的质量标准和生产方法必须符合《中华人民共和国药典》的规定。2此外， prescribed decoction-ready medicines 必须用冷水浸泡至少30分钟，然后在专用药锅中加热煎煮。5研究表明，大部分有效成分可通过煎煮两次提取出来，且&#160;医疗机构中药煎药室管理规范亦规定中药煎煮应进行两次4,6,7若处方中含有质地坚硬或具有补益作用的特殊中药材，建议延长煎煮时间。从浸泡处方药材的容器开始，所有与药液直接接触的煎煮器具及储存容器均应具备化学稳定性并配有盖子，例如砂锅、陶瓷、玻璃和不锈钢制品。不得使用铝制及普通塑料制品，严禁使用铁器及其他易腐蚀的器具，以避免发生可能的化学反应，导致药效降低，甚至产生有害作用4,6,7.
由于开展临床实验存在局限性，医学研究中常使用携带人类疾病的小型动物（如小鼠）来探索不同干预措施（包括中药汤剂处方）的治疗效果及综合作用机制8,9；然而，与人类不同，在临床实践中，中药汤剂需每日 freshly 配制、混合，并每日给药两次。动物无法自主按时摄入所需剂量的药物，目前大多数与中药相关的动物实验均采用灌胃法进行口服给药。用于in vivo动物实验的中药汤剂应预先配制，分装后于-20 °C保存，并在使用前新鲜解冻3,4,10。此外，不规范的动物固定和灌胃针操作会增加不必要的损伤和负面情绪风险。因此，作为一种重要的经口给药方式，熟练掌握灌胃技术对于避免可能的食管损伤和药物溢出尤为关键，从而确保每只模型动物均能接受等量的处方中药，以获得准确的实验结果。本文提供了一种适用于中药汤剂处方的动物灌胃操作方案。

<table><tbody><tr><td>143B 细胞系</td><td>ATCC</td><td>CRL-8303</td><td>骨肉瘤细胞系</td></tr><tr><td>麻醉机</td><td>深圳瑞沃德生命科技有限公司</td><td>R500IP</td><td>小鼠麻醉设备</td></tr><tr><td>自动细胞计数仪</td><td>上海司莫生物技术有限公司</td><td>IC1000</td><td>细胞计数</td></tr><tr><td>BALB/c 裸鼠</td><td>上海斯莱克实验动物有限责任公司</td><td>雄性</td><td>实验动物</td></tr><tr><td>积雪草</td><td>上海养和堂中药饮片有限公司</td><td>20230606</td><td>可煎煮中药饮片&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>基底膜基质</td><td>上海优宁生物科技有限公司</td><td>356234, BD, Matrigel</td><td>重悬细胞</td></tr><tr><td>离心管（15 mL）</td><td>上海悦年生物科技有限公司</td><td>430790, Corning</td><td>离心细胞</td></tr><tr><td>弯头灌胃针（12 号/55 mm）</td><td>瑞沃德生命科学有限公司</td><td>C21014-12</td><td>胃灌注装置组件</td></tr><tr><td>纱布</td><td>海氏海诺集团有限公司</td><td>LC45</td><td>药液过滤</td></tr><tr><td>人参</td><td>上海万仕诚药业有限公司</td><td>20220704-2</td><td>可煎煮中药饮片&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>白花蛇舌草</td><td>上海养和堂中药饮片有限公司</td><td>2023071107</td><td>可煎煮中药饮片&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>深圳瑞沃德生命科技有限公司</td><td>VETEASY</td><td>小鼠麻醉</td></tr><tr><td>微量注射器</td><td>上海高鸽工贸有限公司</td><td>0-50 &amp;mu;L</td><td>向胫骨内精确注射细胞</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液</td><td>碧云天生物技术</td><td>ST447</td><td>洗涤人骨肉瘤细胞</td></tr><tr><td>橡胶圈</td><td>上海恒飞生物科技有限公司</td><td>XPJ</td><td>固定纱布于量杯上</td></tr><tr><td>注射器（1 mL）</td><td>上海密莎瓦医疗工业有限公司</td><td>SBM0040</td><td>胃灌注装置组件</td></tr><tr><td>胰蛋白酶（0.25%）</td><td>上海悦年生物科技有限公司</td><td>25200056, Gibco</td><td>细胞胰酶处理</td></tr></tbody></table>

骨肉瘤模型小鼠中成药汤剂灌胃给药策略

Gavage Strategy for Decoction Formula of Traditional Chinese Medicine in Osteosarcoma Model Mice

汤剂是中药最常用的剂型，在临床应用中已有数千年历史，通常通过口服给药，具有起效快、易吸收以及根据患者具体证候进行个体化治疗的特点。汤剂的质量直接关系到中药的临床疗效，因此，汤剂制备过程的标准化对于避免因主观因素导致的煎煮质量差异具有重要意义。同时，由于临床试验存在局限性，医学研究中常采用携带人类疾病的小型动物（如小鼠）作为模型，以探讨不同干预措施（包括中药汤剂）的治疗效果及其综合作用机制。&#160;因此，作为一种重要的经口给药方式，熟练的灌胃技术对于避免潜在的食管损伤和药物溢出尤为关键，可确保每只模型动物接受等量的药物，从而获得准确的实验结果。此外，规范的汤剂制备方法与熟练的灌胃操作策略对于保护动物福利、减少动物使用数量也至关重要。本文以益气解毒汤在骨肉瘤小鼠模型中的应用为例，报道了一套详细的汤剂制备与灌胃技术标准化流程，并通过肿瘤体积评估其疗效。该方案将最大限度地保护实验动物，提高研究数据的可靠性，为今后研究中药汤剂的治疗效果及其分子机制提供有效的技术策略。 体内.

益气解毒汤对骨肉瘤生长的抑制作用 在体 在胫骨内异种移植骨肉瘤小鼠模型中评估了疗效，该模型通过将143B骨肉瘤细胞注射至裸鼠胫骨内构建。从注射143B细胞的第二天开始，对益气解毒方组小鼠进行灌胃给药，持续28天；对照组小鼠给予生理盐水。所有小鼠在28天后处死。结果显示，与对照组相比，益气解毒方组小鼠的肿瘤体积显著减小（图5).
<img alt="中药制备原料和设备；草药样品、烧杯、橡皮筋、纸巾装置。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图 1"> 
图 1：煎煮用耗材。 可用于煎煮的药材包括（A）人参、（B）白花蛇舌草、（C）贯叶连翘、（D）带刻度的量杯、（E）橡皮筋、（F）纱布、（G）用橡皮筋将三层纱布固定在量杯口。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig01large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="使用茶壶进行草药浸提实验、过滤过程以及试管中样品收集。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图 2"> 
图 2：中药汤剂制剂的制备。（A）除人参外，其他已备好的药材浸泡30分钟。（B）人参单独浸泡30分钟。（C）人参单独煎煮。（D）中药汤剂制剂的过滤。（E）中药浓缩汤剂制剂的储存。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig02large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="注射器测量比较；60mm 与 55mm，用于精确剂量的医疗设备分析。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图 3"> 
图 3：灌胃耗材。 普通 1 mL 注射器配原装针头（左图），以及将原装针头更换为 12 号/55 mm 弯头胃灌注针以组装成灌胃装置的 1 mL 注射器（右图）。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig03large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="实验室小鼠操作与注射步骤，佩戴手套的研究人员，生理学研究。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图 4"> 
图 4：小鼠灌胃给药操作步骤。（A）小鼠置于笼具表面。（B）一只手抓握小鼠尾巴。（C-D）单手固定小鼠。（E）从小鼠口腔插入灌胃针。（F）灌胃给药结束。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig04large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="肿瘤体积分析；肿瘤样本、体积图、重量图表；实验研究结果。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig05.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Figure 5"> 
图5：益气解毒汤在骨肉瘤小鼠模型中的抑制作用。（A）从对照组和益气解毒汤干预组收集的骨肉瘤样本。误差线表示标准差（n=7）。（B）对照组（Ctrl）与益气解毒汤干预组之间肿瘤体积的非配对t检验。连续28天给予益气解毒汤显著抑制肿瘤体积（p&lt;0.05）。误差线表示标准差（n=7）。（C）实验期间，益气解毒汤灌胃组与对照组小鼠的体重变化。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig05large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>

该方案以骨肉瘤小鼠模型中益气解毒汤的煎剂配制及灌胃技术为例，提供了详细的标准化操作流程。方案阐述了动物保护措施，提升了研究数据的可靠性，为探究中药煎剂方剂的治疗效果及分子作用机制提供了有效的研究策略。 体内.

汤剂是中药最常用的剂型，在临床实践中已应用数千年，通过……

本研究提供了一剂煎剂的详细且标准化的操作流程，包括制备及逐步操作步骤，为阴针研究提供了参考依据。我们的研究确保每只动物接受均等的给药剂量，以获得准确的实验结果。本研究旨在最大限度地保护实验动物，并提高煎剂配方相关研究结果的可靠性。首先，将 52.5 克白花蛇舌草和 31.5 克半枝莲药材用清水浸泡 30 分钟。用武火加热至沸腾后，改用文火继续加热 15 至 25 分钟。接着，用橡皮筋将三层纱布固定在量杯口上。将药液通过纱布过滤。将滤过的药液倒入容器中。同样地，用适量饮用水第二次煎煮药材，水量以刚好浸没药材为宜。煮沸后，将第二次煎煮的药液倒入与第一次相同的容器中。然后，将42克人参用饮用水浸泡，水量以高出药材表面约3厘米为宜。将浸泡后的人参用武火煮沸60分钟。然后将第一次的煎液倒入盛有其他煎液的容器中。另取适量饮片用水进行第二次人参煎煮，加水量以刚好浸没药材为宜。用小火加热煎煮40分钟，过滤后收集滤液至煎液容器中。将过滤后的煎液在锅中用武火煮沸，然后转文火，继续煎煮至达到所需浓度。根据一周所需的剂量，用移液器将21毫升浓缩煎剂分装至试管中。将分装的样品储存在-20摄氏度的冰箱中。将一只小鼠放置在鼠笼表面。用左手的拇指和食指抓住小鼠的尾巴。然后，用右手的拇指、食指和中指握住小鼠的颈部。握住小鼠，使其头部、颈部和身体呈一条直线。从鼠口腔的角落插入已装液的灌胃针，并将舌头压向硬腭。保持小鼠身体处于同一轴线，沿食道轻轻推进灌胃针至胃部，随后将药液注入胃内。然后移除针头，将小鼠放回笼中。给予中药汤剂可减少小鼠的骨肉瘤肿瘤体积。

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