实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型中自身反应性抗体的定量分析

因此，我们实验室的研究重点是理解多发性硬化症的分子基础。多发性硬化症是一种以脱髓鞘、神经炎症和轴突损伤为特征的中枢神经系统免疫性疾病。本实验方案为商业试剂盒提供了一种经济且灵活的替代方法。我们的X射线系统可轻松调整，用于检测B细胞针对不同EAE肽段的抗体反应。

我的实验室致力于深入研究慢性神经系统疾病（如多发性硬化症）中神经炎症与神经退行性变之间的关联。首先，取一只已处死的小鼠，通过脚趾或尾部夹捏确认生命体征消失。用70%乙醇喷洒小鼠毛发。

然后将小鼠背侧朝下置于解剖托盘上，用图钉或胶带固定四肢。调整小鼠身体方向，使其朝向LED光源，以确保解剖过程中胸腔得到充分照明。使用解剖剪沿腹部正中线从骨盆至剑突处做一长度为3至4厘米的切口。

接下来，使用弹簧剪从侧面剪开膈肌。然后从两侧边缘向前剪开肋骨，至中线胸骨前停止。将剪开的肋骨瓣翻折至小鼠头部上方，以暴露心脏。

然后，用镊子轻轻固定心脏，将连接1毫升注射器的25号针头插入左心室。轻轻回抽活塞以采集血液。将采集的血液转移至无菌的1.5毫升离心管中，在室温下静置30分钟使其凝固。

为去除已形成的凝块，将试管在4摄氏度下以2,000 G离心20分钟。收集上清液，即血清组分，并小心地将单次使用量分装至冻存管中，于-80摄氏度保存。首先，将冻干的MOG 35-55肽用纯水重悬。

实验前，用包被缓冲液将肽段储备液稀释至每毫升含10微克。然后，将100微升终溶液加入96孔板的孔中。同时，用100微升溶解于包被缓冲液中的牛血清白蛋白（BSA）包被相同数量的孔。

用封板膜密封培养板以防止蒸发，并在4°C下孵育过夜。次日，使用含0.5%吐温20的200 µL PBS对培养板进行三次洗涤。随后，每孔加入100 µL封闭液，该封闭液由PBS中含3% BSA组成。

将密封的酶标板置于杂交炉中，在 37 摄氏度孵育 1 小时。孵育结束后，用 PBST 溶液每孔 200 微升洗涤酶标板 3 次。用封闭液稀释从小鼠免疫后血液中获得的每份血清样品。

向 MOG 35-55 和 BSA 包被的孔中每孔加入 100 µL，并向指定的空白孔中加入相同体积的封闭液。将密封的酶标板在室温下持续振荡孵育两小时。

孵育结束后，从孵育箱中取出酶标板，用 PBST 每孔 200 微升洗板三次。将 HRP 标记的二抗用含 0.2% BSA 的 PBST 溶液稀释后，每孔加入 100 微升。将密封的酶标板在室温下孵育 1 小时，并保持持续振荡。

用 PBST 每孔 200 微升洗涤平板三次。每孔加入 100 微升 3'，5'-四乙基联苯胺底物。避光孵育 1 至 5 分钟，监测蓝色的显色情况。

向每个孔中加入100 µL终止液。然后使用酶标仪在450 nm波长下测定各孔的光密度。EAE样本的光密度值显著高于对照样本，表明对MOG肽产生了强烈的免疫球蛋白G反应。