Estimation of Structural Sensitivity of Intrinsically Disordered Regions in Response to Hyperosmotic Stress in Living Cells Using FRET

Constanza Enriquez-Toledo; Cesar A. Ponce-Diego; Cesar  L. Cuevas-Velazquez

doi:10.3791/66275

JoVE Journal
Biochemistry

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Estimation of Structural Sensitivity of Intrinsically Disordered Regions in Response to Hyperosmotic Stress in Living Cells Using FRET

使用 FRET估计活细胞中响应高渗应激的固有无序区域的结构敏感性

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05:13 min

January 12, 2024

DOI: 10.3791/66275-v

Constanza Enriquez-Toledo*¹, Cesar A. Ponce-Diego*¹, Cesar L. Cuevas-Velazquez¹

¹Departamento de Bioquímica, Facultad de Química,Universidad Nacional Autónoma de México

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

内在无序区域（IDR）是灵活的蛋白质结构域，可根据环境变化改变其构象。集成荧光共振能量转移（FRET）可以估计不同条件下的蛋白质尺寸。我们提出了一种FRET方法来评估高渗胁迫下酿酒酵母活细胞的IDR结构敏感性。

我们旨在了解内在无序区域如何感知和响应环境物理化学性质的变化。我们结合生物物理、生物化学、遗传学和细胞生物学技术来监测活细胞中无序区域的结构集合如何变化。蛋白质生物物理学技术目前用于研究 IVR 的确认。

这些包括核磁共振、圆二色性、小角 X 射线散射和 FRET。这些技术中的大多数只能在体外使用。在细胞环境中研究IVR的确认是具有挑战性的，采用高成本和耗时的技术。

我们提供了克服这些挑战的替代方案。我们的方案可以以简单、快速和可重复的方式监测 IVR 的确认，补充其他体外方法。我们的研究结果为理解应激下IVR结构敏感性的分子机制提供了理解。

这允许将IVR用作体细胞生物传感器。对细胞环境的精确跟踪将有助于对生命基本过程的更细致入微的理解。我们的研究引发了关于内在无序区域结构敏感性的决定因素、其与 IVR 功能的相关性以及影响这些敏感性的环境因素的问题。

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