Name: 小鼠远端眶下神经慢性缩窄损伤 （DIoN-CCI） 研究三叉神经性疼痛 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-08T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 38 s
Description: 学习小鼠远端眶下神经慢性缩窄损伤手术方法，用于研究三叉神经性疼痛模型。该视频展示自发面部梳理行为评估及机械痛觉超敏检测技术，为开发新型疼痛治疗策略提供重要实验基础。

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作者无致谢。

动物的处理和护理遵循国际疼痛研究协会（International Association for the Study of PAIN）关于清醒动物疼痛研究的指南，以及佛兰德斯和欧洲动物研究法规和ARRIVE指南。该实验方案已获得机构伦理委员会的批准。
1. 动物
<ol>
	<li>使用雄性和雌性 C57BL/6J 小鼠（Janvier，到达时 10 周龄）。</li>
	<li>将雄性和雌性小鼠分别饲养在标准的实底鼠笼中，置于湿度为40%–60%、室温为21 ± 1 °C的动物饲养室中。</li>
	<li>提供水和食物 随意摄取.</li>
	<li>将小鼠置于正常的12小时光照/12小时黑暗循环条件下（光照开启时间为08:00）。</li>
</ol>
2. 手术
<ol>
	<li>每只小鼠准备一段约6 cm长的铬制肠线（6-0），并将其置于无菌生理盐水中，以防止干燥变硬变脆。</li>
	<li>用氯胺酮/赛拉嗪（75/15 mg/kg，腹腔注射，注射体积为10 mL/kg）对小鼠进行麻醉。通过轻捏脚趾间皮肤检查麻醉深度，确保小鼠腿部无屈曲反应。如有必要，等待动物完全麻醉和/或追加氯胺酮/赛拉嗪。 
	注意：不应给予辅助镇痛药物，以避免产生预先镇痛效应，从而干扰三叉神经病理性疼痛的发展。</li>
	<li>轻轻剃除眶下孔前方约4 mm处眼睑与胡须垫之间的颊部毛发，以进行切口。注意避免损伤胡须，以免影响后续行为学测试。</li>
	<li>将小鼠头部固定于立体定位仪框架中或其他方式固定头部。将小鼠置于加热垫上，或采取其他措施维持其体温。</li>
	<li>在双眼涂抹药膏以防止干燥。先用酒精擦拭剃毛的头部区域，再用碘伏擦拭。铺上手术巾，暴露剃毛的头部区域。</li>
	<li>在步骤 2.7 至 2.14 中使用显微镜。</li>
	<li>在胡须垫边缘与眼睛之间约中点处，于眶下孔稍前方，沿眼睛中心与胡须垫中心连线为基准，做一长度为4 mm、垂直于中线的皮肤切口。</li>
	<li>通过钝性分离浅层结缔组织暴露眶下神经（IoN）。操作时应注意尽量减少肌肉组织损伤，并避免损伤运动神经纤维。确保在颅骨出口处与分支至须垫之间的区域，眶下神经主干（直径1-1.5 mm）位于约3 mm深度处可及图1).</li>
	<li>使用旋转动作，将带钩的结扎辅助工具的头部滑入眶下神经（IoN）下方，注意避免损伤神经。</li>
	<li>将铬制肠线穿过结扎辅助工具尖端的孔洞，并回拉结扎辅助工具，使结扎线保持在下牙槽神经（IoN）下方，且结扎线的两端与IoN的距离大致相等。</li>
	<li>打结 &#34;滑结&#34; 从结扎线的两端打结，并将结滑向下齿槽神经（IoN），确保滑结操作顺畅，以便精确控制压迫程度。继续滑动结并压迫下齿槽神经，使神经直径略微减小，以可察觉的程度为宜。4在切口结上方打一个单结，以防止其滑动。</li>
	<li>结扎时保留结扎线两端约1.5 mm的自由端，以防止结松脱。</li>
	<li>按照步骤 2.2–2.8 进行假手术操作。</li>
	<li>使用合成可吸收缝线（6-0）缝合皮肤切口，并将动物置于加热垫或红外加热灯下恢复。</li>
</ol>
3. 行为学测试
<ol>
	<li>在术前测试前，将小鼠在饲养环境中适应至少8天。</li>
	<li>在术前测试前，每天至少一次让小鼠适应测试程序，持续3天。</li>
	<li>在正常光照条件下进行测试。如有必要，提供背景噪音以减少外界噪音的干扰。</li>
	<li>面部理毛行为的观察
	<ol>
		<li>将单只小鼠放入一个无垫料的带盖塑料笼中，从饲养区转移至测试室。运输过程中避免外部刺激。</li>
		<li>将小鼠置于一个无垫料的带盖透明塑料笼中（长×宽×高：12 cm × 12 cm × 17 cm），并放置在摄像机前方。当小鼠背部朝向摄像机时，使用镜子观察其面部。</li>
		<li>记录小鼠行为10分钟。记录期间，实验人员不得在房间内。</li>
		<li>记录下一只动物前，清洁观察笼。</li>
		<li>由对小鼠实验条件不知情的观察者分析录制的行为视频。</li>
		<li>在分析10分钟录像时，记录每次面部理毛事件。面部理毛是指动物将前爪接触面部区域的动作模式。</li>
		<li>区分孤立的面部理毛与身体理毛过程中的面部理毛行为9。如果某一行为序列前后均无身体理毛，则标记为孤立的面部理毛。身体理毛定义为将爪子、舌头或门齿接触除面部或前爪以外身体区域的动作模式。如果面部理毛序列前后存在身体理毛，则该事件标记为身体理毛过程中的面部理毛。</li>
		<li>采用4秒截断标准确定面部理毛事件的次数。两次理毛动作之间间隔少于4秒定义为单次事件内的暂停；间隔超过4秒定义为两个事件之间的完全中断。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>机械刺激测试
	<ol>
		<li>将最多6只小鼠放入带垫料的带盖笼中，从饲养区转移至测试室。同样需注意避免外部刺激。</li>
		<li>将小鼠逐一放置于桌面上。
		<ol>
			<li>将小鼠尾巴放入柔软的硅胶夹具中，并通过磁力将夹具固定在桌面上的金属板上。硅胶材料可防止尾巴滑脱，同时尽量减少对尾巴的压力。</li>
			<li>将一个三面围挡的塑料固定器（65 mm × 25 mm × 23 mm）罩在动物身上，使仅小鼠头部露出容器外。固定器尺寸允许头部和前爪活动，但防止动物在其中转身。最后，在固定器顶部放置重物以保持其位置稳定（图2）。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>使用一组四种不同强度的von Frey纤维丝。使其弯曲所需的力量分别为0.02 g、0.16 g、0.4 g和1.0 g。</li>
		<li>让小鼠适应固定器及伸展动作10分钟。每30秒对每只动物进行一次伸展动作。</li>
		<li>当动物处于放松状态时，缓慢将最轻的von Frey纤维丝施加于眶下神经（IoN）支配区域，靠近须垫中心位置，直至纤维丝弯曲。确保刺激持续时间不超过1秒。</li>
		<li>根据动物对刺激的反应，将其归入以下反应类别之一进行评分。
		<ol>
			<li>无反应时评分为0。</li>
			<li>检测反应评分为1，即小鼠将头转向刺激物并探索该刺激物。</li>
			<li>回避反应评分为2，即施加刺激时小鼠轻轻将头转离或迅速向后抽动；有时会出现一次同侧面部擦拭动作。</li>
			<li>攻击反应评分为3，即小鼠攻击刺激物，做出啃咬和/或抓取动作。</li>
			<li>不对称面部理毛评分为4，即小鼠对受刺激的面部区域连续进行至少三次无中断的洗脸动作。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>对每只小鼠，按强度递增顺序使用von Frey纤维丝，并随机刺激同侧和对侧区域。每种刺激强度在每侧各施加一次。</li>
		<li>计算每只小鼠对四种von Frey纤维丝反应得分的平均值。分别计算同侧和对侧的得分。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Establishing the Mouse Model for Trigeminal Neuropathic Pain

<ol><li>Costigan, M., Scholz, J., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathic+pain%3A+a+maladaptive+response+of+the+nervous+system+to+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuropathic pain: a maladaptive response of the nervous system to damage.</a> Annu Rev Neurosci. 32, 1-32 (2009).</li>
<li>Torrance, N., Smith, B. H., Bennett, M. I., Lee, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+chronic+pain+of+predominantly+neuropathic+origin.+Results+from+a+general+population+survey%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pain%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of chronic pain of predominantly neuropathic origin. Results from a general population survey.</a> J Pain. 7, 281-289 (2006).</li>
<li>Jensen, T. S., Gottrup, H., Sindrup, S. H., Bach, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+picture+of+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The clinical picture of neuropathic pain.</a> Eur J Pharmacol. 429 (1-3), 1-11 (2001).</li>
<li>Bennett, G. J., Xie, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+peripheral+mononeuropathy+in+rat+that+produces+disorders+of+pain+sensation+like+those+seen+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man.</a> Pain. 33 (1), 87-107 (1988).</li>
<li>Backonja, M. M., Stacey, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathic+pain+symptoms+relative+to+overall+pain+rating%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pain%22%5BJournal%5D)">Neuropathic pain symptoms relative to overall pain rating.</a> J Pain. 5, 491-497 (2004).</li>
<li>Basbaum, A. I., et al. Measurrement and New Technologies. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBasbaum%2C+AI+%22Emerging+Strategies+for+the+Treatment+of+Neuropathic+Pain%22">Emerging Strategies for the Treatment of Neuropathic Pain</a>. Campbell, J. N. , IASP Press. Seattle, WA. (2006).</li>
<li>Mogil, J. S., Crager, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+should+we+be+measuring+in+behavioral+studies+of+chronic+pain+in+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">What should we be measuring in behavioral studies of chronic pain in animals.</a> Pain. 112, 12-15 (2004).</li>
<li>Vierck, C. J., et al. Animal Studies of Pain: Lessons for Drug Development. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVierck%2C+CJ+%22Emerging+Strategies+for+the+Treatment+of+Neuropathic+Pain%22">Emerging Strategies for the Treatment of Neuropathic Pain</a>. Campbell, J. N. , IASP Press. Seattle, WA. (2006).</li>
<li>Deseure, K., Adriaensen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonevoked+facial+pain+in+rats+following+infraorbital+nerve+injury+a+parametric+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Nonevoked facial pain in rats following infraorbital nerve injury a parametric analysis.</a> Physiol Behav. 81 (4), 595-604 (2004).</li>
<li>Deseure, K., Hans, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+constriction+injury+of+the+rat%27s+infraorbital+nerve+%28IoN-CCI%29+to+study+trigeminal+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Chronic constriction injury of the rat's infraorbital nerve (IoN-CCI) to study trigeminal neuropathic pain.</a> J Vis Exp. (103), e53167(2015).</li>
<li>Mogil, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+pain%3A+progress+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Animal models of pain: progress and challenges.</a> Nat Rev Neurosci. 10 (4), 283-294 (2009).</li>
<li>Wilson, S. G., Mogil, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+pain+in+the+%28knockout%29+mouse%3A+big+challenges+in+a+small+mammal%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Measuring pain in the (knockout) mouse: big challenges in a small mammal.</a> Behav Brain Res. 125 (1-2), 65-73 (2001).</li>
<li>Ding, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+rodent+model+of+trigeminal+neuropathic+pain+by+unilateral+chronic+constriction+injury+of+distal+infraorbital+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pain%22%5BJournal%5D)">An improved rodent model of trigeminal neuropathic pain by unilateral chronic constriction injury of distal infraorbital nerve.</a> J Pain. 18 (8), 899-907 (2017).</li>
<li>Hardt, S., Fischer, C., Vogel, A., Wilken-Schmitz, A., Tegeder, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+infraorbital+nerve+injury%3A+a+model+for+persistent+facial+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Distal infraorbital nerve injury: a model for persistent facial pain in mice.</a> Pain. 160 (6), 1431-1447 (2019).</li>
<li>Krzyzanowska, A., Avendaño, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+testing+in+rodent+models+of+orofacial+neuropathic+and+inflammatory+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Behavioral testing in rodent models of orofacial neuropathic and inflammatory pain.</a> Brain Behav. 2 (5), 678-697 (2012).</li>
<li>Martin, Y. B., Malmierca, E., Avendaño, C., Nuñez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+disinhibition+in+the+trigeminal+nucleus+caudalis+in+a+model+of+chronic+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuronal disinhibition in the trigeminal nucleus caudalis in a model of chronic neuropathic pain.</a> Eur J Neurosci. 32 (3), 399-408 (2010).</li>
<li>Deseure, K., Hans, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+study+of+non+evoked+orofacial+pain+following+different+types+of+infraorbital+nerve+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Behavioral study of non evoked orofacial pain following different types of infraorbital nerve injury in rats.</a> Physiol Behav. 138, 292-296 (2015).</li>
<li>Vuralli, D., Wattiez, A. S., Russo, A. F., Bolay, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+cognitive+animal+models+in+headache+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Headache+Pain%22%5BJournal%5D)">Behavioral and cognitive animal models in headache research.</a> J Headache Pain. 20 (1), 11(2019).</li>
<li>Krzyzanowska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+nociceptive+sensitivity+in+mouse+models+of+inflammatory+and+neuropathic+trigeminal+pain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Assessing nociceptive sensitivity in mouse models of inflammatory and neuropathic trigeminal pain.</a> J Neurosci Methods. 201 (1), 46-54 (2011).</li>
</ol>

作者声明无利益冲突。

在大鼠中，先前有研究认为，考虑到完整的精细肌肉对控制复杂的触须运动模式在触须触觉分辨中的重要性，以及中线切口与皮肤下眶下神经区域之间的相对距离，经眶入路至眶下神经（IoN）更为可取10。另有研究指出，通过胡须垫后方毛发皮肤处做切口进行远端入路具有多项优势13,14。从外科操作角度看，该技术更为简便且创伤较小；无需使用立体定位仪，手术耗时也更短。两种方法在术后诱发性和非诱发性疼痛行为方面均产生相似的行为学效应。此外，该方法可避免术中移位眶内内容物可能引起的眼部不适，以及神经结扎与眼部之间潜在的刺激性接触。在小鼠中，由于其体型较小，我们发现经眶入路作为常规操作过于困难。因此，本实验旨在采用远端入路方式，在小鼠中手术诱导眶下神经损伤，从而引发自发性和诱发性疼痛行为，用于三叉神经病理性疼痛的研究。
与其它神经结扎诱导的慢性疼痛动物模型一样，应用该模型的关键步骤之一是在眶下神经周围以适当的结扎力度放置结扎线4,15,16。神经结扎程度不同的动物，其行为学结果存在显著差异17。铬制羊肠线（6-0 规格）与小鼠眶下神经直径之间的比例，不同于大鼠所使用的 5-0 规格。研究发现，在小鼠中，双结扎造成的神经损伤程度高于大鼠。由于 6-0 是可获得的最小规格铬制羊肠线，本研究选择使用单结扎，其产生的行为学结果与大鼠模型相似。使用两根 7-0 规格的非铬制羊肠线结扎也可能产生类似效果。
使用 von Frey 纤维刺激 IoN 区域时，需要动物保持相对静止。在大鼠中，可通过让动物适应观察笼来实现这一状态。然而，由于小鼠的运动活性较高，使用这种方法难以精确刺激 IoN 区域。用手抓握动物是一种应激性较强的方法，会严重影响动物对刺激反应的有效性和可重复性。将动物置于小型高台上的方法也曾在研究中被采用18。尽管该方法对活动有一定限制，但发现动物仍可在平台上移动过多，不利于以精确且受控的弯曲力刺激 IoN 区域。为此，我们实验室设计并部分通过 3D 打印技术制作了一种固定装置。该装置的三面塑料固定槽和配重部分与 Krzyzanowska 等人（2011）所用装置类似，但固定动物尾巴的方法有所不同19。重要的是，该装置允许动物以更自然的方式对刺激产生反应，包括前爪和头部的运动。然而，该装置可防止动物移动身体以躲避进一步的刺激接触。在观察笼中自由活动的动物中，此类躲避行为等同于抓取或啃咬刺激物（反应评分等级 3）。
本文表明，在小鼠中进行DIoN-CCI可诱导其对von Frey纤维刺激产生自发行为的改变&#160;类似于IoN-CCI大鼠的表现，即面向部梳理行为增加，以及对IoN支配区域的von Frey纤毛刺激呈现高反应性10小鼠孤立面部理毛行为的平均持续时间短于大鼠（2秒 vs. 10秒），但小鼠孤立面部理毛行为的平均峰值次数高于大鼠（13次 vs. 5次）。目前尚不清楚这是否纯粹反映了物种间先天理毛模式的差异，还是与自发性疼痛感觉的性质有关。

神经病理性疼痛源于躯体感觉神经系统的损伤，导致感觉信号向大脑的异常传递。躯体感觉神经损伤并不总是引起神经病理性疼痛，但其发生率随着临床神经病变严重程度的增加而升高1,2。神经病理性疼痛患者表现出特定症状，如自发性感觉（烧灼感、针刺感、电击感），以及对无害或有害刺激产生异常强烈或持久的疼痛，这些疼痛往往转为慢性，并对常规镇痛药物治疗产生抵抗3。神经病理性疼痛研究领域的重大进展源于一项发现：在大鼠坐骨神经周围施加轻度缩窄性结扎可引发类似人类神经病理性疼痛的行为表现4。这些动物对热、冷和机械刺激的阈值降低，并表现出伤害性防御行为。尽管人类与啮齿类动物在疼痛处理方面存在固有的生物学差异，动物模型仍是研究神经病理性疼痛发生机制以及检验新提出治疗策略的重要工具。
基于感觉反射的疼痛检测范式已在神经病理性疼痛模型中得到广泛应用，但对持续性疼痛或其他常见伴随症状（如睡眠障碍、抑郁、焦虑）的测量却未受到足够重视，尽管这些是影响生活质量的常见临床症状5,6,7,8。已有研究记录大鼠面部理毛行为，作为眶下神经（IoN）慢性压迫损伤（CCI）后自发性神经病理性疼痛的评估指标9,10。此外，大鼠在IoN支配区域对轻微触觉刺激还会出现反应性增强，提示存在机械性异常性疼痛（mechanical allodynia）。
与小鼠相比，由于大鼠体型较大，更适合进行手术损伤操作。然而，小鼠具有成本低、占用空间小的优势，且所需药物用量更少。此外，转基因技术的发展进一步推动了小鼠的应用11,12。因此，本实验的总体目标是在小鼠中实施类似于大鼠的眶下神经手术损伤，以诱导自发性和诱发性行为的改变，用于三叉神经病理性疼痛的研究。

<table><tbody><tr><td>铬制肠线（6-0）</td><td>Dynek&amp;nbsp;</td><td>CG602D</td><td>结扎线</td></tr><tr><td>棉签棒</td><td>药房</td><td></td><td></td></tr><tr><td>数码摄像机</td><td>Sony</td><td>HDR-CX330E</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 镊子</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 镊子 - 微钝头尖端 (#5/45)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-25</td><td></td></tr><tr><td>Duratears</td><td>Alcon</td><td>0037-820</td><td>眼科软膏</td></tr><tr><td>钩状结扎辅助工具</td><td>Fine Science Tools</td><td>18062-12</td><td></td></tr><tr><td>Ketalar</td><td>Pfizer</td><td></td><td>氯胺酮（50 mg/mL）</td></tr><tr><td>手术显微镜</td><td>Kaps</td><td>SOM 62</td><td></td></tr><tr><td>精密棉签</td><td>Qosina</td><td>10225</td><td></td></tr><tr><td>精密修剪器</td><td>Philips</td><td>HP6392/00</td><td></td></tr><tr><td>Rompun</td><td>Bayer</td><td></td><td>赛拉嗪（2%）</td></tr><tr><td>剪刀 - 钝头尖端</td><td>Fine Science Tools</td><td>14574-09</td><td></td></tr><tr><td>Semmes-Weinstein Von Frey 感觉测定仪套装</td><td>Stoelting</td><td>58011</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl Rapide</td><td>Ethicon</td><td>MPVR489H</td><td>缝合线</td></tr></tbody></table>

小鼠眶下神经远端慢性缩窄损伤（dion-cci）模型用于三叉神经病理性疼痛研究

Chronic Constriction Injury of the Distal Infraorbital Nerve (DIoN-CCI) in Mice to Study Trigeminal Neuropathic Pain

动物模型仍是研究神经病理性疼痛的必要工具。本文描述了一种用于研究小鼠三叉神经病理性疼痛的远端眶下神经慢性压迫损伤（DIoN-CCI）模型。内容包括实施慢性压迫损伤的手术操作，以及术后用于评估自发性和诱发性行为改变的行为学测试，这些行为变化是持续性疼痛和机械性异常性疼痛的标志。该方法及行为学检测指标与大鼠眶下神经慢性压迫损伤（IoN-CCI）模型相似。然而，将IoN-CCI模型应用于小鼠时，需进行若干重要改进。首先，将眶内入路改为更靠前的入路，切口位于眼睛与胡须垫之间，从而使眶下神经（IoN）在眶腔外更远端的位置被结扎。其次，由于小鼠的运动活性更高，不再允许其在小笼中自由活动，而是将小鼠置于专门设计和制作的限制性装置中。在DIoN结扎后，小鼠表现出与IoN-CCI大鼠类似的行为变化，即自发性行为改变以及对von Frey纤毛刺激的反应增强，具体表现为定向面部理毛行为增加和对IoN支配区域von Frey纤毛刺激的痛觉过敏。

DIoN-CCI 小鼠在术后表现出明显的孤立面部理毛时间增加以及孤立面部理毛次数增多（图3）。这种增加在术后第一周最为显著，随后几周逐渐减弱，但在至少6周内仍显著高于术前水平。而在全身理毛过程中的面部理毛行为则基本不受影响。
在DioN-CCI术后第一周内，DIoN-CCI小鼠对同侧IoN区域的同侧机械刺激几乎完全无反应（图4）。在随后的数周内，这种低反应性逐渐转变为高反应性，并持续至少6周。此外，对对侧机械刺激的反应性也可能出现轻微增加。
<img alt="眶下神经远端结扎；示啮齿类动物模型手术操作的示意图与图像。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66420/66420fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图1"> 
图1：眶下神经远端结扎的位置。 眶下神经远端结扎的位置位于其自颅骨穿出处的前方，但在其分支至须垫之前的后方。(A) 右侧IoN的示意图。(B) 左侧已结扎IoN的手术视野。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66420/66420fig01large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="小鼠尾部在压缩装置上的实验；图像显示带有重物和固定装置的设置。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66420/66420fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图 2"> 
图 2：用于机械刺激测试的固定装置。 小鼠的尾部由一个（A）柔软的硅胶夹固定，该夹通过磁力连接到桌面上的（B）金属板上。（C）一个塑料固定器允许小鼠头部和前爪活动，但防止其在内部转身。一个金属重物用于保持固定器的位置。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66420/66420fig02large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="DloN-CCI 与假手术组理毛行为分析；统计线图；术后天数比较。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66420/66420fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图 3"> 
图 3：DIoN-CCI 后孤立面部理毛行为的术后变化。数据点表示 DIoN 手术前 1 天（术前）以及术后第 3 至 42 天，各组小鼠（A）进行孤立面部理毛所花费的时间（均值 ± 标准误；n = 15/组）和（B）孤立面部理毛发作次数（均值 ± 标准误；n = 15/组）。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66420/66420fig03large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="疼痛反应图表；DloN-CCI 与假手术组比较；术后统计分析；随时间变化的反应评分。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66420/66420fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Figure 4"> 
图 4：DIoN-CCI 对机械刺激反应性影响的时间进程。数据点表示对 von Frey 纤维刺激的反应评分（均值 ± 标准误；每组 n = 15），分别来自（A）结扎神经区域和（B）对侧区域，在 DIoN 手术前 1 天（术前）以及术后 3 至 42 天的检测结果。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66420/66420fig04large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>

小鼠眶下神经远端慢性缩窄性损伤可诱导自发行为改变（面部理毛活动增加）以及对触觉刺激的伤害性行为反应（对von Frey纤毛刺激的高反应性），这些表现是持续性疼痛和异常性疼痛的征象，可作为三叉神经病理性疼痛的模型。

小鼠眶下神经远端慢性缩窄损伤（DIoN-CCI）模型用于三叉神经病理性疼痛研究

动物模型仍是研究神经病理性疼痛的必要工具。本文描述了远端眶下神经慢性缩窄性损伤……

本实验的总体目标是在小鼠中实施眶下神经损伤，以研究三叉神经病理性疼痛的发生机制，并测试新的治疗策略。在眶下神经结扎后观察孤立相生长期行为，是少数可用于研究自发性神经病理性疼痛的动物模型之一，但其应用长期以来受限于眶下神经结扎操作的复杂性。与基于感觉反射的疼痛检测方法（如 von Frey 测试或对热、冷刺激的缩退反应）相比，该模型更具临床相关性。评估自发性或持续性疼痛尚未得到充分重视，然而这种症状是影响生活质量的重要临床表现。眶下神经远端入路相较于眶内入路，具有手术操作更简便的优势。该方法创伤小，且无需使用立体定位仪即可实施。首先，轻轻剃除麻醉小鼠眼周与胡须垫之间颊部的毛发。将小鼠头部固定于立体定位仪中或其他方式固定头部。在双眼上涂抹眼膏，以防角膜干燥。用酒精擦拭剃毛的头部区域，随后使用碘伏擦拭。在解剖显微镜下，沿中线垂直方向做一道4毫米长的皮肤切口，切口位置大约位于口鼻垫边缘与眼睛之间的一半距离处，且紧邻眶下孔的嘴侧，对准眼睛中心与口鼻垫中心之间的连线。为了暴露眶下神经，应钝性分离浅层结缔组织，尽量减少肌肉损伤，并避开运动神经纤维。使用旋转动作，将带钩的结扎辅助工具头部滑入眶下神经下方。将铬制肠线穿过结扎辅助工具尖端的孔洞，并撤出结扎辅助工具，使结扎线保留在眶下神经下方，且结扎线的两端与神经的距离相等。将结扎线的两端打一个滑结，并将滑结沿眶下神经滑动至适当位置。继续推动滑结使其进一步收紧，压迫眶下神经。然后在滑结上方打一个普通结固定。剪断结扎线的两端，保留约1.5毫米的线头，以防止结松脱。使用6-0合成可吸收缝线关闭皮肤切口。将小鼠置于加热垫或红外加热灯下，使其恢复。首先，将一只小鼠放入无垫料的带盖塑料笼中，从饲养室转移到测试室。将笼子放置在摄像机前方，然后放置一面镜子，以便在小鼠背对摄像机时能够观察其面部。记录小鼠10分钟的行为。记录完成后，在记录下一只动物之前清洁观察笼。应由对实验条件不知情的观察者分析小鼠的录像行为。在10分钟的记录期间，记录每一次面部理毛行为的发生。区分孤立的面部梳理行为与身体梳理过程中的面部梳理行为。根据4秒截断标准确定面部梳理事件的次数。将少于4秒的梳理动作间隔定义为单次事件内的暂停。两次理毛行为之间超过四秒的时间被定义为理毛动作的完全中断。将小鼠尾巴放入柔软的硅胶夹中，并通过磁力将夹子固定在桌面上的金属板上。将一个三面塑料固定器罩在小鼠身上，使其头部从容器中露出，其余部分被固定。在固定装置上方放置一个重物以保持其位置稳定。使用一组四根不同规格的冯·弗雷毛（von Frey hair）对小鼠施加力量。将小鼠置于固定装置中，并使其适应抓取动作，持续10分钟。当小鼠处于放松状态时，缓慢地将最细的 von Frey 纤维丝施加于眶下神经支配区域的胡须垫中心附近，直至其弯曲。根据小鼠对刺激的反应，将其评分归入以下类别之一。计算同侧对四根 von Frey 纤维丝反应的平均评分，然后计算对侧反应的平均评分。眶下神经远端慢性缩窄性损伤小鼠术后表现出显著增加的孤立面部理毛时间和次数，在第一周达到高峰，随后逐渐下降，但持续升高达六周。最初，眶下神经远端慢性缩窄性损伤小鼠对机械刺激几乎完全无反应，但在随后的数周内转变为持续六周的痛觉过敏反应。还观察到对对侧机械刺激的反应性有轻微增强。

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小鼠远端眶下神经慢性缩窄损伤 （DIoN-CCI） 研究三叉神经性疼痛

由于手术操作简便且行为学结果稳定，坐骨神经慢性压迫是神经病理性疼痛的主要动物模型之一。术后24小时内即可形成疼痛过敏状态，并可使用冯·弗赖麻醉计（机械测试）和足底镇痛仪（热测试）进行定量测量。...

坐骨神经慢性缩窄性损伤及大鼠疼痛过敏检测

本视频展示了通过结扎眶下神经在大鼠模型中诱导口面部神经病理性疼痛的方法。该操作会导致神经损伤和炎症，引发异常的疼痛信号传导，模拟慢性疼痛状态，可用于研究口面部疼痛检测模型。...

通过眶下神经结扎在大鼠模型中诱导口面部神经性疼痛

来源：Deseure, K., 等. 通过大鼠眶下神经慢性缩窄性损伤（IoN-CCI）研究三叉神经病理性疼痛。J. Vis. Exp.

通过眶下神经缩窄术在大鼠模型中诱导神经病理性疼痛

本文描述了一种用于研究三叉神经病理性疼痛的啮齿类动物模型。所述方法包括对大鼠眶下神经实施慢性压迫损伤的手术操作，以及术后用于检测提示持续性疼痛和异常性疼痛的自发性和诱发性行为变化的行为学测试。...

大鼠眶下神经慢性缩窄性损伤（IoN-CCI）用于三叉神经病理性疼痛研究

在神经病理性动物模型中精确评估疼痛反应对于研究疼痛性疾病的病理生理机制以及开发新型镇痛药物至关重要。本文介绍一种利用自动化步态分析系统客观、灵敏地测定啮齿类动物后肢足底感觉功能的方法。...

慢性缩窄性损伤小鼠的自动化步态分析

本文提供了一种建立慢性缺血后疼痛（CPIP）动物模型的实验方案。该模型是模拟人类Ⅰ型复杂性区域疼痛综合征的公认模型。进一步评估CPIP大鼠模型中的机械性和热性痛觉过敏，以及辣椒素诱导的伤害性行为。...

大鼠I型复杂性区域疼痛综合征的慢性缺血后疼痛模型

本文介绍了一种通过暂时性双侧颈总动脉结扎并结合夹闭法建立的小鼠视网膜缺血模型。该模型有助于理解由心血管异常引发的视网膜缺血的病理机制。...

一种通过短暂双侧颈总动脉阻塞诱导的缺血性视网膜损伤小鼠模型

偏头痛最显著的症状是严重的头痛，据推测这是由支配脑膜的感觉神经元介导的。本文介绍一种在最小侵入条件下局部向硬脑膜施加物质的方法，并以面部痛觉过敏作为检测指标。...

小鼠硬脑膜刺激联合眶周 von Frey 测试作为头痛的临床前模型

本方案描述了使用基于操作行为的口面部疼痛评估装置，在神经病理性口面部疼痛大鼠模型中评估机械性痛觉过敏的方法。...

利用口面部操作性疼痛检测法评估大鼠神经损伤诱导的机械性痛觉过敏

坐骨神经部分结扎可诱导产生持续时间较长的慢性神经病理性疼痛，其特征是对热和机械刺激的反应显著增强。该神经病理性疼痛小鼠模型常用于研究疼痛管理方面的创新疗法。本文详细描述了手术操作步骤，以提高实验的标准化程度和可重复性。...

部分坐骨神经结扎：一种用于研究新型疗法镇痛效果的慢性神经病理性疼痛小鼠模型

基因编码的钙离子指示剂（GECI）可实现对感觉神经元信号传导的稳健且群体水平的分析。本文中，我们开发了一种新方法，可实现 体内 大鼠三叉神经节神经元活动的GECI可视化...

体内大鼠三叉神经节感觉神经元的钙成像

学习小鼠远端眶下神经慢性缩窄损伤手术方法，用于研究三叉神经性疼痛模型。该视频展示自发面部梳理行为评估及机械痛觉超敏检测技术，为开发新型疼痛治疗策略提供重要实验基础。

小鼠眶下神经远端慢性缩窄损伤（DIoN-CCI）模型用于三叉神经病理性疼痛研究

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