Name: 原发性干燥综合征患者口腔 念珠菌 感染的检查 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-01T14:25:00.000+00:00
Duration: 5 min 26 s
Description: 了解原发性干燥综合征患者口腔念珠菌感染的检测方法。本方案通过唾液采集、菌株鉴定和药敏试验，为及时诊断和治疗提供可靠依据，有助于预防相关并发症。

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本研究得到国家自然科学基金（82201084）、中国博士后科学基金（2022M722232）、北京市博士后研究基金（2023-ZZ-020）、首都医科大学北京天坛医院苗圃项目（2023MP10）以及香港研究资助局一般研究基金（27111820 和 17116521）的支持。

以下所述所有操作均经首都医科大学北京天坛医院伦理委员会批准（编号：KY2023-177-01），本研究涉及的所有患者均签署了知情同意书。
1. 患者纳入与排除标准
<ol>
	<li>纳入标准：若患者符合2016年美国风湿病学会（ACR）/欧洲抗风湿病联盟（EULAR）标准12，则将其归类为原发性干燥综合征（pSS）患者。具体而言，最终分类标准基于以下五项指标的加权总分：抗SSA/Ro抗体阳性，以及灶性淋巴细胞唾液腺炎（灶性评分≥1灶/4 mm2），每项计3分；角膜染色评分异常（≥5分）或van Bijsterveld评分≥4分、Schirmer试验结果≤5 mm/5 min，以及非刺激性唾液流率≤0.1 mL/min，每项计1分。具有干燥综合征（SS）相关体征和/或症状，且上述项目总分≥4分的个体，符合pSS诊断标准。</li>
	<li>排除标准：排除无法配合样本采集的患者，以及正在接受口腔Candida感染治疗的患者。 
	注意：需特别指出，下述方法同样适用于继发性干燥综合征患者口腔Candida感染的全面表征分析。</li>
	<li>为防止Candida样本在采集、运输和培养过程中发生潜在污染，应采取严格的预防措施。包括周密的实验准备、使用一次性无菌材料、正确标记样本、采样管严密封口，以及在专业生物安全柜内进行所有实验操作。</li>
</ol>
2. 样品采集
<ol>
	<li>唾液采集：指导患者手持带有漏斗的试管，让唾液沿下唇缓慢流入试管中。采集结束时，要求患者将口腔内剩余的唾液全部吐入试管。持续采集唾液15分钟。</li>
	<li>漱口液和拭子采集：如果患者无唾液分泌或非刺激性唾液流速极低（低于0.03 mL/min），则用拭子在疑似发生白色念珠菌（Candida）感染的口腔黏膜区域至少擦拭10次，然后让患者用5 mL磷酸盐缓冲液（PBS；参见材料表）漱口1分钟。将漱口液收集至50 mL无菌试管中，并将拭子放入同一漱口液试管内。 
	注意：对于非刺激性唾液流速超过0.03 mL/min的pSS患者，仍可采用步骤2.2采集样本用于检测口腔Candida感染。</li>
</ol>
3. 样品处理
<ol>
	<li>向收集的唾液中加入 1 mL PBS。不要将 PBS 加入口腔冲洗液中。使用涡旋振荡器振荡口腔冲洗液管 1 分钟。</li>
</ol>
4. Candida 培养
<ol>
	<li>制备沙保弱氏琼脂（SDA）培养基时，将70 g SDA（见材料表）溶解于1000 mL双蒸水中。</li>
	<li>在121 °C条件下高压灭菌15 min，取10 mL该SDA培养基倒入直径10 cm的微生物培养皿中（见材料表），静置冷却。</li>
	<li>取步骤3中制备的200 µL样品，划线接种至步骤4.2中已加入10 mL SDA培养基的直径10 cm微生物培养皿上。</li>
	<li>于37 °C培养48 h，使Candida菌落成熟。将带有Candida菌落的SDA培养皿暂时保存于4 °C。在SDA培养皿上培养的Candida菌落可保存2–4周。</li>
</ol>
5. Candida 菌株鉴定
<ol>
	<li>配制培养基时，取47.7 g Candida 诊断性琼脂（见材料表）粉末，加入1000 mL双蒸水中，并加热至100 °C。</li>
	<li>当培养基开始微沸时，将10 mL培养基倒入直径10 cm的微生物培养皿中，静置冷却。</li>
	<li>将Candida菌落溶解于500 µL SDA培养基（见步骤4）中，通过移液操作进行悬浮和分散。</li>
	<li>取50 µL含Candida菌落的样品（步骤5.3），接种至步骤5.2中制备的培养基上，在37 °C条件下培养48 h，直至Candida菌落成熟。</li>
	<li>根据Candida菌落的颜色和形态特征，鉴定从pSS患者中分离获得的Candida菌株。采用以下Candida菌株鉴定标准：翠绿色菌落为Candida albicans，蓝灰色菌落为Candida tropicalis，边缘模糊且具微绒毛的粉红色菌落为Candida krusei，紫红色的小型菌落为Candida glabrata，乳白色菌落则可能包含包括Candida parapsilosis在内的多种菌株。</li>
</ol>
6. Candida 生物膜形成实验
<ol>
	<li>配制酵母氮源基础-50葡萄糖（G）培养基时，称取1.34 g YNB（见 材料表）和 1.98 克 D-(+)-葡萄糖（见 材料表）。在200 mL双蒸水中溶解。</li>
	<li>配制 YNB-100G 培养基时，称取 1.34 g YNB 和 3.96 g D(+)-葡萄糖，溶于 200 mL 双蒸水中。</li>
	<li>使用 0.22 µm 注射器滤器过滤溶液（参见 材料表过滤后的YNB-50G和YNB-100G培养基可在4 °C保存3个月。</li>
	<li>从第5步的平板上挑取同一菌株的3个（或更多）菌落，转移至96孔板中含200 µL YNB-50G培养基的孔内（见步骤6.1和6.3） 材料表对培养皿中观察到的菌株进行上述操作。在37 °C、200 rpm振荡条件下过夜培养。</li>
	<li>吸出 假丝酵母 悬液，加入1 mL PBS，以1500 x g离心酵母细胞 g 室温孵育5分钟，弃上清液。在同一管中重复此步骤2次。</li>
	<li>将细胞重悬于1 mL YNB-100G培养基中，并制备不同稀释度的细胞悬液（1:10、1:100和1:1000）。取200 µL梯度细胞悬液，采用螺旋平板法接种至10 cm SDA培养基上。13使用机器将已知体积的样品以阿基米德螺旋形式定量点样于旋转的琼脂平板上，点样量逐渐减少。在37 °C培养24–48 h。</li>
	<li>根据SDA平板上CFU数量，按照标准方法计算不同稀释度下细胞的浓度13简要计数每个平板上分散良好的菌落。从平板边缘向中心选取一个八分之一区域进行计数，直至观察到至少25个菌落。同时，计数该弧形区域的剩余部分中th 计数完成后，将菌落数除以对应菌落计数区域的液体体积，计算细胞浓度。13. 将细胞浓度调整至 1 x 107 cells/mL</li>
	<li>将100 µL YNB-100G培养基中的细胞悬液加入96孔板中，于37 °C、200 rpm振荡条件下孵育2 h。</li>
	<li>小心吸出上清液，用 PBS 洗涤 2 次，并去除悬浮的酵母细胞。 假丝酵母 生物膜在96孔板底部形成。</li>
</ol>
7. 菌丝形成实验
注意：只有能够形成菌丝的 Candida（如 Candida albicans）才能被诱导形成菌丝。对于不能形成菌丝的 Candida（如 Candida glabrata），请转至步骤 8 进行进一步鉴定。
<ol>
	<li>将第6.6步的酵母细胞悬液重悬，并用YNB-100G培养基调节细胞浓度至1 × 106 个细胞/mL。</li>
	<li>配制RPMI 1640完全培养基时，将50 mL胎牛血清（见材料表）加入450 mL RPMI 1640培养基（见材料表）中，混匀后于4 °C保存，用于后续实验。</li>
	<li>取2 µL经RPMI 1640完全培养基稀释的白色念珠菌（Candida）细胞悬液，加入含200 µL培养基的96孔板中，于37 °C过夜培养，以诱导菌丝和酵母细胞的形成。</li>
</ol>
8. 氢氧化钾涂片试验和荧光增白剂染色实验
<ol>
	<li>使用精密成型环（见材料表）从步骤3、步骤6或步骤7中取出1 µL样品，在载玻片上涂抹1 cm × 1 cm的区域。室温下静置干燥。</li>
	<li>配制10% KOH溶液：称取10 g KOH粉末（见材料表），溶于100 mL双蒸水中。</li>
	<li>用酒精灯轻微加热载玻片，直至样本溶解。用10% KOH（步骤8.2）对步骤8.1制备的载玻片进行染色，加盖盖玻片。轻轻按压盖玻片，使样品透明。</li>
	<li>在显微镜下观察菌丝和酵母细胞。</li>
	<li>在步骤8.1制备的载玻片上滴加一滴CFW（见材料表）进行染色，加盖盖玻片，静置1分钟。</li>
	<li>使用荧光显微镜在100倍和200倍放大倍数下观察菌丝。CFW的激发波长为355 nm，检测波长为300–440 nm。在设定的曝光时间内拍摄图像。重复3次以避免假阳性结果。</li>
</ol>
9. 抗真菌药物敏感性试验
注意：本实验按照酵母样真菌药敏检测试剂盒（微量稀释法；参见材料表）的制造商说明书进行操作。
<ol>
	<li>使用0.85% NaCl安瓿瓶（见材料表）制备不超过4天的Candida菌落（步骤4），并调整菌悬液浊度至相当于2麦氏浊度标准。根据麦氏浊度标准试剂盒（见材料表）测定浊度。配制好的Candida菌悬液应立即使用。</li>
	<li>将试剂盒中的ATB F2培养基135 µL加入测试条的每个小孔中，使终浓度为3 × 104 酵母细胞/mL，盖上盖子。将测试条置于密封容器中，在35 °C下培养24小时。</li>
	<li>通过肉眼观察判断Candida的生长情况（参见使用说明书）。参考值（参考范围）请参见使用说明书。检查对照孔是否充分生长。若对照孔生长不足或无生长，则结果不可读取，需继续培养24小时。</li>
</ol>

Diagnosis and Strain Identification of pSS-Related Oral Candida

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<li>Humphrey, S. P., Williamson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+saliva%3A+normal+composition%2C+flow%2C+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Prosthet+Dent%22%5BJournal%5D)">A review of saliva: normal composition, flow, and function.</a> J Prosthet Dent. 85 (2), 162-169 (2001).</li>
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</ol>

作者声明无利益冲突。

在本论文中，我们提供了一系列系统、简单且可行的方法，用于检测原发性干燥综合征（pSS）患者口腔Candida感染、鉴定Candida菌株，以及检测常用抗真菌药物的药敏性。
在实际应用中，并非本文介绍的所有方法都是必需的。口服 假丝酵母 检测方法可根据具体目的进行选择。采用未培养样本的KOH涂片试验和CFW染色检测可快速初步判断口腔中是否存在真菌 假丝酵母 pSS患者中的感染。然而，这些方法的假阴性率相对较高16如果难以确认感染， 假丝酵母 培养至关重要。在治疗过程中必须考虑耐药性因素；某些 假丝酵母 某些菌株天然对一些抗真菌药物具有耐药性，例如， Candida krusei 对氟康唑治疗天然耐药17因此，有时菌株的 假丝酵母 需要被鉴定。在这种情况下， 假丝酵母 菌株可通过以下方式鉴定 假丝酵母 诊断用琼脂。...

念珠菌病由念珠菌属（Candida spp.）引起，这类微生物属于机会性病原体。常见的菌株包括白色念珠菌（Candida albicans）、克柔念珠菌（Candida krusei）、近平滑念珠菌（Candida glabrata）、副近平滑念珠菌（Candida parapsilosis）和都柏林念珠菌（Candida dubliniensis）1。由念珠菌属引起的机会性感染包括浅表性念珠菌感染和侵袭性念珠菌病。侵袭性念珠菌病主要发生在免疫功能低下者中；例如，在获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者中，侵袭性念珠菌病可显著威胁其生活质量甚至寿命2。浅表性念珠菌感染（如黏膜皮肤念珠菌病）在患者中更为常见3。
口腔念珠菌病，一种浅表性感染 假丝酵母 感染是最常见的人类真菌感染。 白色念珠菌 是口腔中的正常共生菌；其携带率 假丝酵母 spp. 在无任何症状的普通人群中检出率已报道为20%至75%4过度生长 假丝酵母 可能导致患者局部不适，例如味觉异常、口腔烧灼感、因营养不良引起的吞咽困难、恢复延迟以及住院时间延长。长期口腔念珠菌病可发展为严重的侵袭性念珠菌病，导致显著的发病率和死亡率5口腔念珠菌病还可能增加口腔癌的风险5唾液腺功能受损是口腔念珠菌病的危险因素之一6感染的起始是黏附 假丝酵母 向上皮细胞壁的附着。随后是增殖和丝状化 假丝酵母 生物膜的形成与成熟7生物膜极难根除，且对常规抗真菌治疗具有耐药性，这使得与生物膜相关的口腔临床治疗面临巨大挑战 假丝酵母 感染7.
原发性干燥综合征（pSS）是一种自身免疫性疾病，其特征为口干、眼干及其他系统性症状8。口干是pSS最常见的症状。唾液具有重要的生理抗真菌功能：一方面，它可稀释并冲刷口腔，从而清除黏膜上的微生物；另一方面，唾液中含有多种抗菌蛋白，如乳铁蛋白、唾液过氧化物酶、溶菌酶、组氨酸富集多肽以及特异性抗白色念珠菌抗体，这些成分可与口腔黏膜相互作用，抑制Candida的过度生长6。唾液分泌量减少可能使pSS患者更易发生口腔念珠菌病。一项针对61例pSS患者的横断面观察性研究发现，13.1%的pSS患者存在口腔念珠菌病的临床表现，且Candida albicans的菌落形成单位（CFU）/mL与非刺激性全唾液（UWS）及刺激性全唾液（SWS）的水平呈显著负相关9。
本文介绍的方法可根据直接涂片或培养后观察到的特征性形态学特征（例如菌丝和酵母细胞）来识别口腔Candida感染10。利用Candida诊断培养基进行菌株鉴定，其原理是不同Candida物种可通过特异性酶裂解显色底物，形成颜色和形态各异的菌落11。本文系统介绍了检测口腔Candida感染的方法，包括传统的口腔Candida培养、氢氧化钾（KOH）涂片快速检查以及荧光增白剂（calcofluor white, CFW）染色检测10。此外，还介绍了可为临床口腔Candida感染治疗提供指导的抗真菌药物敏感性试验。在实际应用中，并不需要执行本文介绍的所有方法，可根据具体目的选择合适的口腔Candida检测方法。对原发性干燥综合征（pSS）患者进行口腔Candida感染检测及Candida菌株鉴定，不仅有助于疾病的治疗，也有助于评估口腔念珠菌病的特征及菌种分布情况。

<table><tbody><tr><td>0.22 &amp;micro;m 注射器滤器</td><td>MERCK</td><td>SLGV004SL</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL 离心管</td><td>axygen</td><td>MCT-150-C-S</td><td></td></tr><tr><td>10 cm 微生物培养皿</td><td>Jet Bio-Filtration Co. Ltd</td><td>TCD000100</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 离心管</td><td>Jet Bio-Filtration Co., Ltd</td><td>CFT011150</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 离心管</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>96 孔微孔板</td><td>Corning</td><td>3599</td><td></td></tr><tr><td>API 0.85% NaCl 安瓿</td><td>BIOMERIEUX</td><td>20070</td><td></td></tr><tr><td>荧光增白剂 Calcofluor White 染色液</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>18909-100ML-F</td><td></td></tr><tr><td>CHROMagar 白色念珠菌显色培养基</td><td>CHROMagar</td><td>P002860</td><td>&lt;em&gt;Candida &lt;/em&gt;诊断用琼脂</td></tr><tr><td>D-(+)-葡萄糖一水合物</td><td>国药集团化学试剂有限公司</td><td>10010518</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清&amp;nbsp;</td><td>Gibco</td><td>26170035</td><td></td></tr><tr><td>麦氏比浊标准管套装</td><td>BIOMERIEUX</td><td>70900</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 精密模制接种环&amp;nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>254399</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液</td><td>Gibco</td><td>C10010500BT</td><td></td></tr><tr><td>氢氧化钾</td><td>阿拉丁</td><td>P112284-500g</td><td></td></tr><tr><td>PowerSoil DNA 提取试剂盒&amp;nbsp;</td><td>MO BIO</td><td>12888-50</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 培养基</td><td>Gibco</td><td>11875119</td><td></td></tr><tr><td>沙保弱氏琼脂培养基</td><td>Solarbio</td><td>S9710</td><td></td></tr><tr><td>无氨基酸酵母氮源基础培养基</td><td>Solarbio</td><td>Y8040</td><td></td></tr><tr><td>酵母样真菌药敏检测试剂盒（微量稀释法）</td><td>BIOMERIEUX</td><td>14204</td><td></td></tr></tbody></table>

口腔检查 假丝酵母 原发性干燥综合征患者的感染问题

Examination of Oral Candida Infection in Primary Sj&#246;gren&#39;s Syndrome Patients

原发性干燥综合征（pSS）是一种自身免疫性疾病，其特征为口干、眼干及其他系统性症状。由于pSS患者常出现唾液分泌减少，易导致口腔菌群失调。pSS的常见并发症之一是口腔 假丝酵母 感染。本文中，作者描述了可有效诊断口腔的系统性方法 假丝酵母 感染并鉴定 假丝酵母 使用干燥综合征（pSS）患者的唾液、口腔黏膜拭子或漱口水分离菌株。采用沙保葡萄糖琼脂（SDA）培养基、菌丝形成试验、氢氧化钾（KOH）涂片检查以及荧光增白剂（CFW）染色试验进行口腔真菌的诊断 假丝酵母 感染。A 假丝酵母 诊断性琼脂用于鉴定 假丝酵母 菌株。最后，通过抗真菌药物敏感性试验确定合适的抗真菌药物治疗方案。该标准化方法可提高与原发性干燥综合征相关的口腔疾病的诊断、治疗及未来研究水平 假丝酵母 感染。采用此方法进行早期诊断，还可预防因延误接受适当治疗而引发的任何并发症。

本研究选取了12例干燥综合征（pSS）患者作为代表性病例，并筛查其口腔Candida感染情况（表1）。在这些患者中，部分患者表现出典型的口腔Candida感染病变，包括口角炎（特征为口角皲裂、脱屑和充血，图1A）、牙龈黏膜鲜红水肿、黏膜表面黄白色丝状假膜（图1B）、舌乳头萎缩及舌背黏膜呈鲜红色（图1C）。
在本研究涉及的12名患者中，有8名患者存在口腔问题 白色念珠菌 感染，通过微生物的生长得以确认 白色念珠菌 SDA 培养皿上的菌落（图 2A- C 和 补充图1）。诊断性琼脂显示口腔 白色念珠菌 感染 白色念珠菌，克柔念珠菌， 和 <em...

本文介绍了一种用于检测原发性干燥综合征患者口腔Candida感染的实验方案，可用于及时治疗，从而避免相关并发症的发生。

原发性舍格伦综合征（pSS）是一种自身免疫性疾病，其特征为口干、眼干及其他系统性症状。由于……

本研究中，我们提出了一种针对原发性干燥综合征患者口腔念珠菌感染的检测方案，可用于及时治疗，避免感染相关并发症的发生。我们提供了一系列系统、简便且可行的方法，用于检测原发性干燥综合征患者中的口腔念珠菌感染，鉴定念珠菌菌种，并检测常用抗真菌药物的药敏性。未来研究中，我们可能将重点关注口腔念珠菌感染在原发性干燥综合征发病及病程进展中的作用。首先，根据设定的纳入标准选择受试者。进行唾液采集时，指导患者手持带有漏斗的采集管，让唾液沿下唇缓慢流入管中，持续15分钟。采集结束时，请受试者将口中剩余的唾液全部吐入采集管中。若非刺激性唾液流量较低，应在疑似感染区域对口腔黏膜进行至少10次拭子取样，并让患者用5毫升磷酸盐缓冲液（PBS）漱口1分钟。随后将漱口液收集至50毫升无菌管中，并将拭子放入其中。向收集的唾液中加入1毫升PBS，涡旋振荡该管1分钟。首先，用 PBS 收集患者的唾液样本。将 7 克 SD 琼脂粉溶解于 100 毫升双蒸水中。使用高压灭菌器在 121 摄氏度下对培养基灭菌 15 分钟。将约10毫升培养基倒入直径10厘米的微生物培养皿中，静置冷却。然后取200微升唾液样本在琼脂表面划线接种，并于37摄氏度培养48小时。制备念珠菌诊断琼脂培养基时，将4.77克粉末与100毫升重蒸水混合均匀。将混合物加热至100摄氏度，直至出现轻微沸腾。然后将约10毫升培养基分装至每个10厘米的微生物培养皿中，并使其凝固。接着，将白色念珠菌菌落转移至500 µL SD培养基中，并使用移液器充分悬浮。将50微升悬浮液接种于念珠菌鉴定培养基上，37°C培养48小时。最后，根据成熟菌落的特异性颜色和形态特征鉴定菌株。使用念珠菌鉴定培养基进行的念珠菌菌株鉴定实验显示，原发性干燥综合征患者存在口腔感染，感染菌种包括白色念珠菌、近平滑念珠菌，以及白色念珠菌合并克柔念珠菌感染。首先，用 PBS 收集患者的唾液样本。使用精密模具制成的接种环将样本涂布在玻璃载片上，并在室温下自然干燥。同时，将 10 克氢氧化钾溶解于 100 毫升双蒸水中。然后用酒精灯加热载玻片，并用10%氢氧化钾染色。用盖玻片覆盖样品，轻轻按压使其透明。使用显微镜观察菌丝和酵母细胞。进行CFW染色实验时，向涂片上滴加一滴CFW进行染色。盖上盖玻片，静置一分钟。使用荧光显微镜观察菌丝，并重复实验三次。原发性干燥综合征患者口腔样本的氢氧化钾涂片检查显示存在念珠菌菌丝，CFW染色进一步证实了菌丝和真菌孢子的存在。

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科研

JoVE Journal

Medicine

医学

原发性干燥综合征患者口腔 念珠菌 感染的检查

尽管已有用于研究宿主免疫抗性的 Candida 感染模型，但目前尚缺乏用于研究在 Candida...

免疫缺陷小鼠口咽念珠菌病的Th17炎症模型

本文描述了一种用于测定细菌与真菌等跨域微生物在黏附于病毒感染的HeLa细胞单层时的相互关联及竞争关系的方法。该方案可拓展至多种原核生物、真核生物与病毒的组合研究。...

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观察和量化内部特征 白色念珠菌...

澄清与成像 白色念珠菌 生物膜

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一种用于研究的离体实验方法 白色念珠菌 胃肠道中的菌丝形态发生

由危险病原体引起的假体周围关节感染（PJI）在临床骨科中较为常见。现有的动物模型无法准确模拟PJI的实际状况。本文中，我们建立了一种与白色念珠菌（Candida...

小鼠假体周围Candida albicans感染模型

唾液腺超声检查是干燥综合征（SS）诊断及评估疾病活动度和并发症的一种有前景的工具。本文描述了与干燥综合征相关的唾液腺超声检查的扫描技术。...

超声评估唾液腺在干燥综合征中的诊断与监测价值

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姜黄素类介导的光动力抗菌疗法在小鼠口腔念珠菌病模型中的应用

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一种唇部固定装置可辅助干燥综合征的唇腺活检

本方案提供了利用地中海涡虫（Schmidtea mediterranea）作为模式系统研究真菌感染过程中宿主-病原体相互作用的优化且详细的指南。该方法在先前使用人类真菌病原体感染涡虫的实验流程基础上进行了改进。...

一种优化的实验方案 Candida albicans 感染在 Schmidtea mediterranea 研究真菌致病机制与宿主防御

连续12导联心电图（ECG）监测可检测出疑似急性冠状动脉综合征（ACS）患者的心肌短暂性缺血，即使患者无症状也能发现。本文中，我们描述了使用Holter设备启动患者监测、下载ECG数据以进行离线分析的方法，以及如何利用ECG软件识别短暂性缺血。...

一种利用持续ST段分析检测疑似急性冠状动脉综合征患者短暂心肌缺血的研究方法

了解原发性干燥综合征患者口腔念珠菌感染的检测方法。本方案通过唾液采集、菌株鉴定和药敏试验，为及时诊断和治疗提供可靠依据，有助于预防相关并发症。

口腔检查假丝酵母原发性干燥综合征患者的感染问题

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