抗疲劳汤对中枢性疲劳大鼠模型行为学及血清学指标的影响

摘要

本文介绍了一种通过改良多平台法（MMPM）建立大鼠中枢疲劳模型，并结合行为学反应和血清学指标的监测，评估抗疲劳汤剂（AFD）对中枢疲劳作用的实验方案。

摘要

本研究旨在通过观察经药物干预后采用改良多平台法（MMPM）建立中枢疲劳模型的大鼠行为学表现及血清学指标，评估抗疲劳汤剂（AFD）对抗中枢疲劳的作用。采用抓力测定评估大鼠的肌肉力量，利用旷场实验评价类似焦虑的行为，通过 Morris 水迷宫实验评估大鼠的记忆功能。在完成行为学评估后，采集大鼠血清样本，检测皮质酮（CORT）和乳酸（LAC）的浓度。LAC 浓度采用比色法测定，CORT 浓度则采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）进行检测。与空白对照组相比，经 MMPM 建模后，大鼠抓力显著下降，记忆能力受损。血清学分析显示，模型组大鼠 LAC 和 CORT 水平升高。AFD 能在一定程度上明显逆转这些不良变化。研究结果表明，AFD 及辅酶 Q10 对中枢疲劳大鼠的体力和认知能力以及血清生物标志物水平具有积极改善作用。

引言

疲劳是一种多因素且非特异性的现象，通常表现为疲倦感以及功能下降¹。疲劳可分为外周性疲劳和中枢性疲劳，前者发生在肌肉层面，后者起源于中枢神经系统^3,4。长期的中枢性疲劳可能显著导致多种心理问题，包括焦虑、抑郁、心理困扰和记忆障碍^5,6。尽管中枢性疲劳会造成显著的不适，但目前针对该症状的特异性药物仍十分缺乏⁷。虽然中枢神经系统兴奋剂哌甲酯可提供暂时性缓解，但其副作用（如失眠和心悸）可能加重病情^8,9。

在既往的临床应用中，中医药在治疗中枢性疲劳方面已显示出良好的疗效，采用的方法包括口服汤剂、针灸和太极拳^10,11,12。抗疲劳方剂（Anti-fatigue decoction, AFD）是由李锋教授基于丰富的临床经验研制的有效方剂，已显示出积极的治疗作用....

方案

本研究工作遵循动物福利的伦理准则。通过维持适当的护理和饲养条件，确保动物的健康与福祉，所有实验程序均经北京中医药大学机构动物护理与使用委员会批准（BUCM-4-2019041504-2094）。

1. 动物饲养与分组

注意：在整个研究过程中，均遵循“3R”原则（减量、优化和替代）来保障动物福利。

1. 本研究选用54只6周龄、体重为210 g ± 10 g的清洁级（SPF级）Wistar大鼠。
2. 将大鼠饲养于动物实验设施中，环境条件控制为：温度23 ± 2 °C，相对湿度50%，光照/黑暗周期为12 h/12 h。实验前让动物适应环境3天。
3. 采用随机数字表法将大鼠随机分为6组，分别为空白对照组（图中标记为"a"）、模型组（图中标记为"b"）、AFD低剂量组（AFD-L；图中标记为"c"）、AFD中剂量组（AFD-M；图中标记为"d"）、AFD高剂量组（AFD-H；图中标记为"e"）和辅酶Q10组（CoQ10；图中标记为"f"），每组9只大鼠。

2. 建模与干预

注意：该模型的建立基于先....

结果

与对照组相比，模型组大鼠的抓力显著下降。然而，低、中、高剂量的AFD给药均能以剂量依赖的方式逆转这一效应，如图1所示。同样，阳性对照药物也表现出逆转抓力变化的能力（图1）。

在旷场实验中，模型组大鼠的总移动距离、中央区域穿越次数以及中央区域停留时间均减少。低、中、高剂量的AFD给药均能以剂量依赖的方式逆转这些变化，如图2所示。同时，阳性对照药物也能缓解相关症状（图2）。各组旷场实验叠加轨迹频率的热图可参见图3。

在Morris水迷宫实验中，模型组大鼠表现出逃逸潜伏期延长以及在目标象限的游泳时间减少，表明其空间搜索能力较差。阳性对照药物辅酶Q10能够逆转上述变化。值得注意的是，低、中、高剂量的AFD均能逆转逃逸潜伏期的延长，如

讨论

复方中药AFD由黄芪（Astragalus membranaceus）、枳壳（Fructus aurantii）、山楂（Fructus crataegi）、五味子（Schisandra chinensis）、当归（Angelica sinensis）和铁皮石斛（Dendrobium officinale）组成，据传统中医理论认为具有健脾疏肝解郁的功效。此外，这些药材均被认为安全性良好，因此在中国常被作为药食两用。在既往临床实践中，AFD在治疗中枢性疲劳患者方面显示出较好的疗效，但其具体治疗机制仍需进一步研究。因此，本研究旨在通过动物实验验证AFD改善中枢性疲劳的作用，并进一步阐明其潜在作用机制。

建立能够准确反映疾病发病机制和临床特征的动物模型，对于开展药理学研究至关重要¹⁵。我们团队此前通过睡眠剥夺方法建立了一种中枢性疲劳大鼠模型，该模型表现为握力下降、焦虑以及记忆功能受损¹³。.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
皮质酮检测试剂盒	德国DRG公司	EIA4164	步骤4.3
Curve Expert 1.4软件	CurveExpert Professional	版本1.4	用于皮质酮检测的计算
Ethovision软件	Noldus Information Technology，荷兰	版本15	分析软件与视频追踪系统
握力测试装置	北京中实迪创有限公司	ZS-ZL	步骤3.1
乳酸检测试剂盒	南京建成生物工程研究所	A019-2-1	步骤4.2
改良多平台法	北京中医药大学神经免疫实验室	无	步骤2.1
Morris水迷宫测试装置	北京中实迪创有限公司	ZS-Morris	步骤3.3
开放场测试装置	北京中实迪创有限公司	ZS-KC	步骤3.2
Prism	GraphPad	版本8	用于生成图表
SPSS 26.0	IBM	版本26.0	统计分析
Wistar大鼠	斯贝福（北京）生物技术有限公司		许可证编号：SCXK（京）2019-0010