Name: 成年非洲爪蟾六个关键器官快速取样技术 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 10 s
Description: 学习成年非洲爪蟾六个关键器官（心室、肝叶、胰腺、脂肪体、肾脏和皮肤）的快速取样技术。该方法采用标准化手术流程，可在蛋白质组学和免疫化学研究中减少血液污染，促进实验室间的组织共享。

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本工作由美国国立卫生研究院（NIH）所属机构发展办公室（OD）资助项目 R24OD031956 支持。我们感谢 Samantha Jalbert、Jill Ralston 和 Cora Anderson 提供的帮助与支持，同时感谢我们的编辑以及匿名同行评审专家提供的有益反馈。

所有实验均按照哈佛医学院动物护理和使用委员会（IACUC）的规定进行（批准号：IS 00001365_3）。图中展示了灌注与未灌注的成年白化雄性Xenopus laevis的代表性结果。
1. 实验准备
注意：如果在取样前遵循灌注方案8，请跳至步骤 2.2。
<ol>
	<li>确保研究机构已批准本方案中所述的安乐死技术。</li>
	<li>配制含有 5 g/L MS-222（三卡因甲磺酸盐）和 5 g/L 碳酸氢钠的溶液（参见材料表）。溶液体积必须大于完全浸没待安乐死动物所需的体积。检测 pH 值，确保其 ≥7。</li>
	<li>通过将Xenopus放入安乐死溶液中实施主要安乐死程序；动物需完全浸没持续 1 小时。</li>
	<li>设置解剖工作站，以便在取样后立即用预冷的 PBS 或 0.7x PBS9（根据实验需求选择）冲洗所有组织，并在 5 倍或更高倍率的体视显微镜下检查和修整组织。该工作站还应允许操作者在每次使用之间更换所有镊子和剪刀，或将其彻底擦拭清洁。</li>
	<li>当青蛙在溶液中放置 1 小时后，主要安乐死程序即已完成。取出青蛙，并通过脚部夹捏测试确认痛觉反应是否消失。</li>
	<li>记录动物的相关信息，如物种、品系、性别、年龄、健康状况以及是否经过灌流。称量Xenopus体重，并测量其他所需参数，例如吻肛长。</li>
	<li>将青蛙仰卧放置，并用针固定四肢靠近躯干的位置（图 1）。</li>
	<li>使用解剖剪沿中线向上剪开皮肤，然后横向剪开，形成两个皮瓣。</li>
	<li>参考图 2，辨认白线（linea alba），用镊子夹住并将其从体腔拉开。小心使用剪刀沿肌肉层向上剪开，将体腔壁分成两个瓣膜。将所有瓣膜剪开或固定至一侧，以便暴露操作区域。</li>
	<li>辨认仍在跳动的心脏。使用解剖剪剪除喙骨（图 2），以更好地暴露心脏。 
	注意：如果在取样前心脏已停止跳动，应注明样本的新鲜度已受影响。</li>
</ol>
2. 取样
注意：如果动物已经灌注，请跳至步骤 2.2。
<ol>
	<li>辨认出薄薄的心包膜，并用组织镊将其拉紧（图3）。</li>
	<li>使用虹膜剪的尖端轻轻刺破心包膜，注意不要剪到下方的组织。将心包膜从心脏的三个腔室上剥离。</li>
	<li>用镊子夹住心室的顶端，辨认其与耳状房和动脉干的连接位置（图4），并在这些连接下方进行剪切（图5）。如有需要，修剪心室，确保耳状房或动脉干的组织不可见，而心室内仍可见浅色的瓣膜组织。 
	注意：在未灌注的动物中，移除心室可能构成二次安乐死。</li>
	<li>肝脏的三个叶将可见（图6 和 图7）。抓住左侧叶（观察者的右侧）边缘，轻轻抬起，使肝管和胆囊管可见（图8）。取该叶连接下方的底部三分之一部分进行取样（图9）。</li>
	<li>为了更好地接触雌性蛙的组织，可先移除卵巢。辨认被一层称为生殖上皮的脏层腹膜包裹的卵巢。轻轻移动卵巢叶，使其分别位于各自的一侧，以便显露其附着区域（图10）。这些附着点位于成对肾脏的正腹侧。</li>
	<li>使用剪刀尽可能靠近肾脏但不损伤肾脏的情况下切除卵巢（图11）。</li>
	<li>检查肝脏的中叶（也称为前叶），注意其如何通过肠系膜和肝胰管（也称胆总管）与胃和十二指肠相连（图6、图7 和 图8）。&#160;</li>
	<li>使用虹膜剪切断肠系膜和肝十二指肠韧带，以及肝胰管与十二指肠连接处。切断胰腺和肝胰管与肝脏中叶的连接，确保无深色肝组织残留（图12）。</li>
	<li>用有齿镊夹住胃部，用组织镊夹住胰腺的上端。在5倍放大下，轻轻将胰腺从胃部分离（图13）。 
	注意：若无法完整分离，残留的胰腺组织仍可见，可分段挑除。或者，也可系统性地使用虹膜剪和组织镊将胰腺剥离。</li>
	<li>参照 图14A，辨认出膀胱并将其移除，尽可能靠近泄殖腔处剪切。丢弃该组织。</li>
	<li>参照 图14B，辨认出大肠并将其拉紧，尽可能靠近泄殖腔处切断大肠。移除并丢弃整个消化道，在其与脾脏连接处切断腹膜。此时脂肪体将完全暴露。</li>
	<li>将脂肪体分开，使其位于各自的一侧。肾脏上方脂肪体与腹膜连接的区域将可见。夹住左侧脂肪体（观察者的右侧）基部，用剪刀将其从腹膜上剪下，保留一小边缘，避免损伤肾脏（图15）。</li>
	<li>移除并丢弃剩余的脂肪体。成对的肾脏此时将完全可见。</li>
	<li>在雌性蛙或具有明显退化输卵管的雄性蛙中，夹住一侧输卵管并将其从肾脏和泄殖腔上拉开（图16）。在输卵管与泄殖腔连接处剪断，并继续将其从肾脏上拉开，当出现透明的腹膜连接时即剪断。丢弃该组织。</li>
	<li>对另一侧输卵管重复此操作。</li>
	<li>肾脏仍被透明的腹膜（后腹膜）覆盖10。用镊子夹住肾脏，并在其下端切断腹膜。</li>
	<li>将肾脏从体腔中抬起，使用剪刀尽可能靠近肾脏但不损伤肾脏的情况下切断腹膜（图17）。</li>
	<li>在5倍放大下，剪除多余的腹膜及其他残留组织（脂肪体、脾脏）。若为雌性蛙，确保移除所有残留的卵巢组织（图18）。若为雄性蛙，小心移除睾丸，并检查是否存在退化的输卵管，后者在无放大条件下可能不可见（图19）。</li>
	<li>移除动物身上的大头针，将其翻转至腹侧朝下，并重新固定四肢。</li>
	<li>选择任一后肢进行取样，并将该肢的足部固定。</li>
	<li>从腓肠肌/胫腓骨上方取下一瓣杏仁状的皮肤（图20）。</li>
</ol>

Standardized Dissection and Sampling Protocol for Adult Xenopus Organs

<ol><li>Porro, L. B., Richards, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+dissection+of+the+model+organism+Xenopus+laevis+using+contrast-enhanced+computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">Digital dissection of the model organism Xenopus laevis using contrast-enhanced computed tomography.</a> J Anat. 231 (2), 169-191 (2017).</li>
<li>Ruehl-Fehlert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55 (23), 91-106 (2003).</li>
<li>Kittel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--Part+2.+A+joint+publication+of+the+RITA+and+NACAD+groups%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--Part 2. A joint publication of the RITA and NACAD groups.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 413-431 (2004).</li>
<li>Morawietz, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice+-+Part+3+-+A+joint+publication+of+the+RITA+and+NACAD+groups%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice - Part 3 - A joint publication of the RITA and NACAD groups.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 433-449 (2004).</li>
<li>Patmann, M. D., Shewade, L. H., Schneider, K. A., Buchholz, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenopus+tadpole+tissue+harvest%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Xenopus tadpole tissue harvest.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2017 (11), 097675(2017).</li>
<li>Lőw, P., Molnár, K., Kriska, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+a+Frog+%28Rana+sp.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Atlas+of+Animal+Anatomy+and+Histology%22%5BJournal%5D)">Dissection of a Frog (Rana sp.).</a> Atlas of Animal Anatomy and Histology. , 213-263 (2016).</li>
<li>O'Rourke, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphibians+used+in+research+and+teaching%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Amphibians used in research and teaching.</a> ILAR J. 48 (3), 183-187 (2007).</li>
<li>Jonas-Closs, R. A., Peshkin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+rapid+blood+perfusion+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Effective rapid blood perfusion in Xenopus.</a> JoVE. (issue), e65287(2023).</li>
<li>Balls, M., Worley, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphibian+cells+in+vitro.+II.+Effects+of+variations+in+medium+osmolarity+on+a+permanent+cells+line+isolated+from+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Amphibian cells in vitro. II. Effects of variations in medium osmolarity on a permanent cells line isolated from Xenopus.</a> Exp Cell Res. 76 (2), 333-336 (1973).</li>
<li>Holz, P. H., Raidal, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+renal+anatomy+of+exotic+species%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+North+Am+Exot+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Comparative renal anatomy of exotic species.</a> Vet North Am Exot Anim Pract. 9 (1), 1-11 (2006).</li>
<li>Trott, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+Mycobacterium+ulcerans-like+infection+in+a+colony+of+African+tropical+clawed+frogs+%28Xenopus+tropicalis%29%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Characterization of a Mycobacterium ulcerans-like infection in a colony of African tropical clawed frogs (Xenopus tropicalis).</a> Comp Med. 54 (3), 309-317 (2004).</li>
<li>Fremont-Rahl, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+liflandii+outbreak+in+a+research+colony+of+Xenopus+%28Silurana%29+tropicalis+frogs%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium liflandii outbreak in a research colony of Xenopus (Silurana) tropicalis frogs.</a> Vet Pathol. 48 (4), 856-867 (2011).</li>
<li>Green, S. L., Parker, J., Davis, C., Bouley, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+hyperstimulation+syndrome+in+gonadotropin-treated+laboratory+South+African+clawed+frogs+%28Xenopus+laevis%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Ovarian hyperstimulation syndrome in gonadotropin-treated laboratory South African clawed frogs (Xenopus laevis).</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 46 (3), 64-67 (2007).</li>
<li>Vitt, L. J., Caldwell, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+of+amphibians+and+reptiles.+Herpetol%5BTitle%5D)+AND+%22Herpetol%22%5BJournal%5D)">Anatomy of amphibians and reptiles. Herpetol.</a> Herpetol. , 35-81 (2009).</li>
</ol>

作者声明无竞争利益。

由于本方案旨在最大限度地保持样本新鲜，某些样本中可能包含不需要的组织。例如，胰腺样本中可能包含肝胰管和部分肠系膜，而配对的肾脏样本中总会包含部分腹膜组织、肾上腺和输尿管。&#160; 如果对新鲜度无特殊要求，则可通过改进的技术实现更精确的取样。
Xenopus 属不同性别和物种之间的器官形态和位置具有可比性。然而，组织的颜色会因动物是否经过灌注而表现出显著差异。因此，本文同时提供了经过灌注和未灌注动物的图像。
本方案的一个限制在于，优先考虑了速度和可重复性，而牺牲了采集最能代表目标组织整体性的样本。例如，此处采集的肝脏左叶样本无法充分代表肝脏全部三个叶的组织。如果采样过程中出现误差，其故障排除的选择将受到不同组织区域之间潜在变异的影响。例如，尚不清楚肝脏右叶、右侧脂肪体或皮肤的其他部位是否可作为目标组织的功能性替代物。在这些情况下，应根据研究需求谨慎判断，再决定是否替换组织区域。
本方案的另一个局限性在于，如果被采样的动物存在严重的解剖学缺陷或具有临床意义的健康问题，体腔内的器官可能与本文所述的正常情况不同。在感染分枝杆菌属（Mycobacterium spp.）的青蛙组织中已发现肉芽肿11,12,，既往病例还显示卵巢过度刺激综合征可能导致器官呈现异常形态13。
尽管该方法是为实验室用Xenopus开发的，但在许多非无足目的两栖动物和有肢爬行动物中，这些器官的形态具有显著相似性14。本方案的取样部分可轻松修改，适用于其他模式生物，如墨西哥钝口螈或绿安乐蜥。

尽管已有成年&#34;数字解剖&#34;的Xenopus资源1，但在缺乏针对其他成年模式生物（如小鼠2,3,4）所具备的详细操作指南的情况下，成年Xenopus的可重复性器官与组织取样仍具挑战性。本文旨在提供清晰的操作指导，以实现成年Xenopus准确且可重复的器官取样，类似于目前已有针对其幼体的方案5。本方法注重操作简便性，以最大限度保持样本新鲜度，并确保该方案适用于所有使用者。
尽管已有针对Rana属物种的详细解剖指南6，以及大量其他无尾目动物的课堂解剖指南7，目前尚无适用于Xenopus的解剖与取样操作指南。对于不熟悉取样操作或两栖动物解剖结构的研究者而言，Xenopus与其他无尾目动物之间存在的细微差异，使得这些现有资源在实现可重复的组织取样方面效果不佳。
目前的指南未包含许多有价值的组织，甚至会将其丢弃，这是为了确保组织的新鲜度。将样本数量限制为六个，足以保证无论操作者经验或技能水平如何，均可在心脏开始跳动后一小时内完成这些组织的采集。针对多种其他组织的更高级、更详细的采集指南正在作为独立的配套论文进行准备。
对于经验较少的操作者，建议在对难以替代的动物（如转基因动物、高龄动物等）进行取样之前，先在因非实验原因而实施安乐死的动物身上尝试本方案。理想情况下，所有取样的动物均应健康，且若为雌性，近两周内未发生排卵。

<table><tbody><tr><td>带LED灯和支架的5倍放大镜</td><td>amazon.com</td><td>B08QJ6J8P1</td><td>光源不得产生热量</td></tr><tr><td>一次性移液管</td><td>VWR</td><td>414004-036</td><td></td></tr><tr><td>解剖用尖头镊子</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-875</td><td></td></tr><tr><td>解剖剪，锐头，直型，6.5&quot;</td><td>VWR</td><td>76457-374</td><td></td></tr><tr><td>解剖托盘</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-370-284</td><td>泡沫聚苯乙烯板可作为可接受的替代品</td></tr><tr><td>安乐死容器</td><td>US Plastic&amp;nbsp;</td><td>Item&amp;nbsp;2860</td><td>其他不透明容器亦可接受</td></tr><tr><td>安乐死容器盖</td><td>US Plastic&amp;nbsp;</td><td>Item&amp;nbsp;3047</td><td></td></tr><tr><td>虹膜剪，6&quot;</td><td>vwr</td><td>470018-938</td><td>虹膜剪可作为可接受的替代品</td></tr><tr><td>MS-222：Syncaine（原名 tricaine）</td><td>Pentair AES</td><td>TRS1</td><td></td></tr><tr><td>PBS 1x</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>碳酸氢钠粉末，USP级</td><td>Fisher Scientific</td><td>18-606-333</td><td></td></tr><tr><td>带齿镊（标本用）</td><td>VWR</td><td>82027-442</td><td></td></tr><tr><td>解剖用T型针</td><td>Fisher Scientific</td><td>S99385</td><td></td></tr></tbody></table>

快速采集成年非洲爪蟾六种关键器官的技术

Techniques for Rapidly Sampling Six Crucial Organs in Adult Xenopus

Xenopus 作为研究脊椎动物发育与疾病的模式生物已有百余年历史。尽管胚胎的实验分析与解剖技术已有详尽记载，但有关成体 Xenopus 的结构与器官描述，以及成体操作技术，尚未根据定量蛋白质组学和单细胞转录组学等现代研究方法的需求进行更新。细胞类型和基因中心的研究视角，要求对胚胎期与成体组织进行对比观察。在从幼体到成体的转变过程中，幼体器官在整体结构、形态以及解剖位置上均发生显著变化，尤其在大规模变态重塑期间尤为明显。建立可靠的器官鉴定与解剖标准，对于确保不同实验室研究所得数据的一致性至关重要。本实验方案鉴定了成体 Xenopus 的六个器官，展示了成体 Xenopus 心室、肝脏、脂肪体、胰腺、成对肾脏以及皮肤的解剖与取样方法。根据保存方法的不同，所获取的组织可用于定量蛋白质组学、单细胞/单细胞核转录组学、原位 杂交、免疫组织化学、组织学等分析。本方案旨在标准化组织取样流程，促进多实验室对成体器官系统的联合研究。

通过利用图1至图20并遵循本方案的全部步骤，可在动物安乐死后一小时内干净地切除心脏心室、肝脏左叶、胰腺、左侧脂肪体、成对的肾脏以及一块皮肤。在此期间，对样本进行冲洗和修整，使其外观如图21所示。
<img alt="青蛙解剖图，四肢被固定用于解剖学研究；腹部带有测量线，用于教学。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig1.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图 1"> 
图 1： 被固定的 Xenopus。 一只成熟的雌性 X. tropicalis，其每条肢体均被针固定。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig1large.JPG" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<img alt="显示乌龟喙骨、白线的解剖示意图，用于解剖学研究与教学。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig2.jpg" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图2"> 
图2： 腹壁。 将一只雌性X. tropicalis的腹侧皮肤切开成瓣状，使白线和喙骨清晰可见。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig2large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<img alt="大鼠心包与心脏的解剖示意图，显示解剖特征与结构。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig3.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图3"> 
图3： 心包包裹的心脏。 通过心包夹住心室的心尖。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig3large.JPG" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<img alt="显示两栖动物解剖研究中动脉干和心脏心室的解剖示意图。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig4.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图 4"> 
图 4： 心脏心室与动脉干。被夹持的灌注后X laevis心室，显示其与动脉干的连接情况。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig4large.JPG" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="心脏解剖图；显示耳状体、动脉干、心室；带有教育性标注。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig5.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图 5"> 
图 5： 心脏示意图。 显示心脏相关结构的示意图，虚线表示心室取样位置。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig5large.JPG" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="显示胆汁流动的肝脏解剖图，包括胆囊、胰腺、导管和十二指肠。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig6.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="Figure 6"> 
图6： 肝胰解剖图。 肝脏三叶、胰腺及相关器官的示意图。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig6large.JPG" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>

<img alt="显示肝脏、胰腺、脾脏、胆囊及导管的内部器官示意图，用于解剖学教学。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig7.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图 7"> 
图 7： 肝胰器官。 一只经灌注处理的白化型X. laevis雄性个体，显示肝脏的三个叶、胰腺及相关器官的标注。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig7large.JPG" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="显示肝脏叶、胆囊、胰腺和肠道的青蛙解剖解剖图。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig8.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图 8"> 
图 8： 胆囊管和肝管。 正在抬起肝脏的左叶，以显示灌注后的X. laevis中的胆囊管和肝管。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig8large.JPG" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<img alt="显示内部器官的青蛙解剖，用于生物学教学实验，辅助解剖学研究。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig9.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图9"> 
图9： 肝脏取样。 在未灌注的X. tropicalis中，于肝管附着处下方切断左侧肝叶。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig9large.JPG" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<img alt="显示脂肪体、脾脏、生殖上皮和卵巢的青蛙解剖图。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig10.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图10"> 
图10： 卵巢附着。 卵巢叶位于各自的一侧时，可见生殖上皮与腹膜壁（位于肾脏上方）之间的连续性。两条白色虚线指示了切断这些附着的位置。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig10large.JPG" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<img alt="显示标记器官（包括肝脏、胃、卵巢、肠）的青蛙解剖图。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig11.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图 11"> 
图 11： 卵巢切除。 将未灌注的X. laevis的卵巢从成对的肾脏上拉开。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig11large.JPG" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<img alt="带有标注的猫解剖解剖图，显示肝脏、胰腺、胃、十二指肠；教学资源。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig12.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图12"> 
图12： 肠系膜切口。 未灌注的X. laevis个体的体腔，在取样心室和肝脏左叶以及移除卵巢之后。白色虚线指示切断肝胰韧带和导管的位置，绿色虚线指示将胰腺从肝脏中叶分离的位置。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig12large.JPG" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="显示内脏器官、消化系统组分和结缔组织的解剖示意图。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig13.jpg" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图13"> 
图13： 胰腺取样。 正从未经灌注的X. laevis个体中分离胰腺组织。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig13large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="猪解剖图中尿 bladder 与大肠的解剖对比。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig14.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图 14"> 
图 14： 器官摘除。（A）未灌注的 X. laevis 尿 bladder 被从泄殖腔拉开，虚线表示应切割的位置。（B）未灌注的 X. laevis 大肠被从泄殖腔拉开，虚线表示应切断的位置。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig14large.JPG" target="_blank">请单击此处查看此图的放大版本。</a>
<img alt="解剖图：两栖动物内脏器官标注图，包括用于教学研究的睾丸和肾脏。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig15.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图15"> 
图15： 脂肪体取样。 脂肪体附着于成对肾脏上端的腹膜处，用虚线标示出切割位置，以便将其从体腔中拉出。请注意，在此附着部位附近，该雄性X. tropicalis具有一侧睾丸，以及一对明显的退化输卵管。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig15large.JPG" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="爬行动物解剖解剖图；显示右侧输卵管、透明腹膜、成对的肾脏。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig16.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图16"> 
图16： 输卵管切除。 将灌注过的 X. laevis 的输卵管从成对的肾脏上轻轻拉离，使透明的腹膜显露出来。虚线表示切开腹膜的位置。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig16large.JPG" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<img alt="显示肺、成对肾脏、腹膜和坐骨神经丛解剖结构的解剖示意图。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig17.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图17"> 
图17： 肾脏取样。 正从未经灌流的X. laevis个体体腔中取出成对的肾脏。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig17large.JPG" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="组织比较；寄生虫感染分析；生物标本图像；研究结果。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig18.jpg" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图 18"> 
图18：肾脏 修剪 (A未灌注雌性个体的腹侧视图 X. laevis’一对肾脏及其附着的腹膜器官。B同一肾脏及其附属器官已移除，但仍保留部分腹膜组织。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig18large.jpg" target="_blank">请点击此处以查看此图的放大版本。</a>
<img alt="解剖装置，培养皿中标记的睾丸和成对的肾脏，器官鉴定研究。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig19.JPG" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图19"> 
图19： 睾丸摘除。 未灌注的X. tropicalis成对肾脏，其中一个睾丸已被移除。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig19large.JPG" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="青蛙腿部解剖结构对比；显示肌肉结构的解剖肢体；生物学研究。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig20.jpg" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图 20"> 
图 20： 皮肤取样。（A）一只 X. tropicalis 的右腿，虚线标示出待取样的皮肤区域。（B）一只 X. tropicalis 的右腿，胫腓骨上方的皮肤样本已被移除。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig20large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<img alt="白化雄性爪蟾器官比较，灌注与未灌注样本置于培养皿中；生物学研究。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66489/66489fig21.jpg" data-altupdatedat="1788840098000" data-alt="图21"> 
图21： 器官取样代表性结果。 从经灌注与未经灌注的白化型X. laevis个体中采集的心室、肝脏、胰腺、脂肪体、成对肾脏及皮肤样本。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66489/66489fig21large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>

本文介绍了一种快速且简便地采集成年Xenopus六种重要且具有代表性的器官的取样指南，这些器官包括心室、肝叶、胰腺、脂肪体、成对的肾脏以及皮肤。

非洲爪蟾作为模式生物，在理解脊椎动物发育与疾病方面已有百余年历史。尽管实验分析和……

在此项工作之前，我开发了一种快速两栖类灌注的实验方案。在进行蛋白质组学和免疫组织化学等研究取样前，应采用该方案，因为在这些研究中组织内存在过量血液是不利的。尽管目前已有一些示意图和其他辅助资源，但尚无关于如何快速且可靠地解剖成年爪蟾（Xenopus）组织的全面操作指南。我们希望标准化的采样技术能够使实验室之间更便捷地共享组织样本。这一点在由于生物安全问题或运输限制而无法进行动物进出口的情况下尤为有利。首先，取出已在安乐死溶液中浸泡一小时的青蛙，轻捏其足部以检查是否已无疼痛反应。称量非洲爪蟾，并测量其他指标，例如从吻端到泄殖腔孔的长度。将青蛙背侧朝上放置，将其四肢固定于身体两侧。使用解剖剪沿中线剪开皮肤，然后向两侧延伸切口，形成两个皮瓣。然后定位白线，并用镊子夹住。轻轻将其从体腔中拉出，使用剪刀剪开下方的肌肉组织。从腔壁形成两个皮瓣。识别仍在跳动的心脏，使用解剖剪修剪环状软骨以获得更好的操作通路。接着，使用组织镊识别薄薄的心包膜并将其拉伸。用虹膜剪的尖端小心地穿破心包膜。然后，将心包从心脏的三个腔室上剥离。在本方案中，展示了心脏心室、肝脏左叶、胰腺、脂肪体以及成对肾脏的取样方法。取样心脏心室时，用镊子夹住心室顶端，找到其与房室口和动脉干的连接处，并在这些结构下方切断。接下来，观察肝脏的三个叶。轻轻抬起左叶，暴露肝管和胆囊管，并在导管下方取该叶的三分之一作为样本。如果蛙为雌性，找到被生殖上皮覆盖的卵巢。轻轻将两侧叶瓣移开，以暴露附着区域。使用剪刀尽可能靠近肾脏处切除卵巢，注意避免损伤。随后，检查肝脏的中叶及其通过肠系膜和肝胰管与胃及十二指肠的连接。使用虹膜剪，在靠近十二指肠处剪断肠系膜肝十二指肠韧带及肝胰管。将胰腺和导管从肝脏内侧叶分离，确保无深色肝组织残留。接着，用有齿镊夹住胃部。然后，使用组织镊子夹住胰腺的上端。在5倍放大倍数下，小心地将胰腺从胃部分离。接着，定位并切除膀胱，尽可能靠近泄殖腔进行切割，随后丢弃该组织。随后，识别大肠并将其拉伸，在靠近泄殖腔处切断。接下来，将两侧的脂肪体分离。抓住左侧脂肪体的基部，并从腹膜上将其剪下。对于雌性青蛙或具有可见退化输卵管的雄性个体，用镊子夹住输卵管，并将其与肾脏和泄殖腔分离。在泄殖腔连接处进行剪切，并继续将输卵管从肾脏上剥离，去除所有透明的腹膜附着物。然后，用镊子夹住肾脏，在其下端剪开腹膜。从体腔中取出肾脏。使用剪刀在不造成损伤的前提下，尽可能靠近肾脏处分离腹膜。在5倍放大倍数下，去除多余的腹膜以及残留的组织，如睾丸、脂肪体或脾脏。释放动物后，将其置于俯卧位并固定四肢。选择一侧后肢进行取样，并固定其足部。在腓肠肌或胫腓骨区域上方切除一块杏仁状的皮瓣。随后，用 PBS 清洗所有样品，检查是否有过多的组织，并在必要时修剪后使用。在安乐死后一小时内，完整地切取心脏心室、肝脏左叶、胰腺、左侧脂肪体、成对的肾脏以及一块皮肤。

techniques-for-rapidly-sampling-six-crucial-organs-in-adult-xenopus

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科研

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生物学

成年非洲爪蟾六个关键器官快速取样技术

本视频演示了培养非洲爪蟾（Xenopus）胚胎神经细胞和肌细胞原代培养物的操作步骤，并展示了该制备方法在同步进行突触前和突触后膜片钳记录中的应用价值。...

同时记录突触前与突触后电生理信号 非洲爪蟾 神经-肌肉共培养

本文介绍了一种利用命运图和谱系示踪技术，将注射靶向至个体卵裂球的实验方案，这些卵裂球将发育为非洲爪蟾（Xenopus...

靶向显微注射技术用于发育中的 非洲爪蟾 肾脏

本方案展示了一种基于荧光的方法，用于可视化血管系统并量化其复杂性 Xenopus tropicalis在对胚胎进行遗传学和/或药理学干预后，将荧光染料注入跳动的心脏，数分钟后即可对血管系统进行成像，以研究心血管发育过程。 体内.

胚胎血管生成的可视化与定量分析 Xenopus tropicalis

我们描述了实现快速的步骤 原位...

用于活体非洲爪蟾（Xenopus laevis）胚胎单细胞代谢组学的微探针毛细管电泳质谱分析

本文展示了一种有效的快速血液灌注方案，用于制备非洲爪蟾组织样本，以进行转录组学和蛋白质组学研究。...

Xenopus 中有效的快速血液灌注

这是全面的Xenopus取样方案的第一部分。所采集的组织包括心室、动脉干、左肝叶、胆囊、肺、胰腺、脾脏、喉、食管、胃、肠道、睾丸、脂肪体、输卵管、成对肾脏、坐骨神经丛、皮肤、胸腺以及完整眼球。...

成年Xenopus可及组织的高效全面取样技术

可视化 体内 RNA 运输通过将荧光标记的 RNA 转录本显微注射到 非洲爪蟾...

在 Xenopus 卵母细胞中可视化 RNA 定位

本实验方案描述了从成年斑马鱼中识别和解剖器官的步骤。...

成年斑马鱼器官的解剖

通过刺激诱发单个精子的[Ca2+]i信号变化进行评估。将具有运动能力的精子细胞用Ca2+敏感型荧光染料（AM酯法）负载后，固定于可灌流的腔室中。利用时间推移荧光显微镜对细胞成像，并通过灌流介质施加刺激。单个细胞（或特定区域）的反应通过Excel软件进行离线分析。...

人类精子中Ca2+信号成像技术

使用膜片钳技术记录BK通道的离子电流。通过向非洲爪蟾卵母细胞Xenopus...

膜片钳与灌流技术在研究离子通道表达中的应用 非洲爪蟾 卵母细胞

学习成年非洲爪蟾六个关键器官（心室、肝叶、胰腺、脂肪体、肾脏和皮肤）的快速取样技术。该方法采用标准化手术流程，可在蛋白质组学和免疫化学研究中减少血液污染，促进实验室间的组织共享。

快速采集成年非洲爪蟾六种关键器官的技术

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