利用肝输尿管造口术进行同种异体移植物排斥反应研究的异位辅助全肝大鼠移植模型

我们研究的主要范围是研究肝移植后免疫耐受背后的机制。然后，我们研究了减少肝排斥反应和提高肝移植受者生存率的方法。

这种异位移植手术中最困难的步骤是肝下腔静脉与肾静脉的端到端吻合。因此，任何愿意通过任何方法对 3 毫米静脉进行端到端吻合的人都具备执行此手术所需的所有技术技能。

原位大鼠肝移植模型是技术上具有挑战性的手术，由于无肝和下半身缺血时间过长而复杂化，使受体动物难以恢复。这里介绍的异位肝移植模型消除了这些并发症。而且它不需要先进的显微外科技能。在没有任何无肝或下半身缺血时间的情况下，受者快速恢复是异位相对于原位大鼠肝移植的显着优势。此外，研究原位肝移植后的排斥反应通常依赖于发病率或死亡作为实验终点，而这种异位模型并非如此。

常温离体肝灌注是一种令人兴奋的新策略，用于在临床移植前储存肝脏。然而，由于常温灌注后准备移植肝脏的技术要求很高，因此缺乏小动物模型。因此，我们的目标是使用我们的异位肝移植模型，以可靠和可重复的方式成功移植常温灌注后的肝脏。

[旁白]腹部剃须和消毒后，将麻醉的供体大鼠仰卧位放在加热的手术垫上。纵向切口后，用湿棉签小心地缩回肝脏，解剖镰状韧带、三角韧带、肝胃韧带和肝十二指肠韧带。用双极镊子烧灼食管旁血管，并在左侧尾状叶和前尾状叶之间进一步分开。使用有角度的镊子或持针器，解剖膈肌下方的肝上腔静脉后面。然后在肝上腔静脉下穿5-0丝线，松松地打一个双结备用。将肝下腔静脉从腹膜后组织向下分离到右肾静脉。然后用 6-0 丝线结扎右肾上腺静脉，尽可能靠近肝下腔静脉。使用 27 号水解剖针，将门静脉与周围结缔组织分离。通过用 7-0 丝线结扎和分割门静脉和脾静脉，将门静脉与幽门静脉和脾静脉分开。分离肝总动脉后，用6-0丝线缝合，并在门静脉下方通过的地方附近分开动脉。在胃十二指肠动脉分支处用5-0丝线结扎胆管，确保胆管周围脂肪组织的保存。使用弹簧剪刀，在结扎处近端的胆管壁上做一个小切口。将聚酰胺管支架插入胆管腔，并用 6-0 丝线缝合将其固定，使缝合线的一端留长以备后用。在 5-0 和 6-0 结扎之间切开以分开胆管。用手术染笔标记肝下腔静脉和门静脉的顶部，以协助吻合过程中血管对齐。然后用微血管夹将门静脉固定在肝脏的尽可能远端。将带有 26 号针头的 20 毫升注射器插入夹子近端的门静脉，并用 10 至 15 毫升冰冷肝素化盐水灌注肝脏，同时使用弹簧剪刀将肝下腔静脉分开尽可能靠近右肾静脉。要切除肝脏，请解剖微钳近端的门静脉。然后收紧先前放置在肝上腔静脉周围的5-0缝合线，并解剖膈肌以横切胸腔内静脉。继续解剖肝脏后部的剩余韧带，并分开先前结扎的肾上腺静脉。将切除的肝脏放入冰上的冷盐水中。腹部剃须和消毒后，将麻醉的受体大鼠放在加热的手术垫上仰卧位。纵向切口时，用湿棉签将肠道缩回腹部右侧，并用湿纱布覆盖。额外涂抹湿纱布覆盖胃、脾和肝脏，露出左肾和肾血管。使用 27 号水解剖针和钝头镊子，将左肾静脉与肾动脉分开，小心地去除两条血管的脂肪和结缔组织。使用双极镊子烧灼所有微侧支，隔离主动脉或腔静脉与肾脏之间的肾静脉和动脉。分离性腺和肾上腺静脉后，用6-0丝在肾静脉近端暂时结扎。在下极动员输尿管，用6-0丝线结扎。先夹住肾动脉，然后夹住肾静脉，用微血管夹尽可能靠近主动脉和腔静脉。使用弹簧剪刀横切肾动脉，刚过血管分叉处，将肾静脉分开到腔静脉和肾脏之间的中间左右。从周围结缔组织中动员左肾并将其移除。用肝素化盐水冲洗肾动脉和肾静脉的残端，以去除所有残留的血液。使用弹簧剪刀，在肾动脉分叉处的叉子上做一个小切口，形成漏斗形开口。然后插入从 26 号导管上切下的 8 毫米支架，并用 6-0 丝线将其固定，缝合线的一端留长。引入供体的肝脏，并将其定位于门静脉、肝下腔静脉和胆管，面向受体的左肾静脉和动脉。使用 9-0 尼龙缝合线，在肝下腔静脉肾静脉连接处的相对两侧安装两根固定缝合线。接下来，用弹簧剪刀在肾静脉表面做一个小的鱼口切口，直到宽度与供体的肝下门静脉相匹配。使用 9-0 丝线缝合线，在血管的前壁和后壁上用 9 或 10 条连续缝合线将肝肝下门静脉首尾相吻合到肾静脉。确认肾动脉的位置位于肝下门静脉下方。然后将先前放置在肾动脉中的支架插入肝门静脉，并用6-0丝线缝合固定，缝合线的一端留长以连接到动脉上的另一根线上。将两端拉在一起，以防止每个末端从支架上滑落。依次从肾静脉上取下微钳，然后从肾动脉上取下。在肝脏再灌注过程中，使用纱布和棉签在吻合区周围施加轻微压力，直到实现无泄漏吻合。移除先前放置在肾上腺和性腺静脉上的临时结扎器。小心地从周围结缔组织沿左输尿管末端向下移动约 10 毫米，留下大量脂肪组织附着。用弹簧剪刀，在输尿管壁靠近先前放置的 6-0 结扎处做一个小切口。将先前连接到胆管的聚酰胺支架插入输尿管壁上的小切口中。用 6-0 丝线缝合支架固定支架，并将一端与支架胆管侧的长线绑在一起，将两端牢固地拉在一起。将肠道恢复到自然位置，并用 2 到 3 毫升的生理盐水冲洗。最后，将腹部分层关闭。从手术后的第二天开始，每天向同种异体移植受者皮下注射肝素。移植后 30 天，同基因肝移植物显示出最佳颜色和胆管通畅性。苏木精和伊红组织学显示肝细胞结构正常，间隔 8 天和 30 天均无明显实质改变。相反，同种异体移植早在移植后 3 天就表现出明显的门静脉炎症，并在 8 天时表现出以广泛淋巴细胞浸润为特征的急性细胞排斥反应。