Name: 啮齿动物口腔疾病模型中牙齿和牙槽骨的显微硬度测量 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-26T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 16 s
Description: 学习使用维氏压头测量啮齿动物牙齿和牙槽骨显微硬度的标准化方案，评估氟化物及环境因素对牙釉质、牙本质和牙周骨组织病理生理学的影响。

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本研究的报告工作获得了日本学术振兴会（JSPS）科研资助项目JP21K09915（MO）以及美国国立普通医学科学研究所的支持。&#160;T34GM145509（MM）以及美国国家牙科与&#160;颅面研究；R01DE025255 和 R21DE032156&#160;(XH)；R01DE029709、R21DE028715 和 R15DE027851&#160;（TK）；R01DE027648 和 K02DE029531（MS）。

本方案中描述的所有操作均按照奥古斯塔大学和诺瓦东南大学机构动物护理与使用委员会（IACUC）批准的脊椎动物使用指南和法规进行，这两所大学均获得国际实验动物评估和认可委员会（AAALAC）认证。请注意，铃木博士在完成小鼠牙氟中毒实验时受聘于奥古斯塔大学。
1. 小鼠氟斑牙模型下颌切牙的拔除
<ol>
	<li>从氟处理开始前1周起，直至氟处理结束，给予C57BL/6小鼠（5周龄，雄性）无氟饮食。</li>
	<li>通过将 NaF 加入蒸馏水中制备氟化水，随后使用真空过滤 0.2 µm 过滤。给予动物含氟化钠的水（0 ppm 和 125 ppm；N=5/组） 随意摄取 持续6周，每2天将氟化水更换为新配制的批次。</li>
	<li>在氟化物水处理6周后，使用CO₂处死动物2 随后进行断头处死。</li>
	<li>从每只小鼠中取出带有门齿的半下颌骨。为采集带有门齿的半下颌骨，需在不施加过度力量的情况下切断下颌骨周围肌肉。</li>
	<li>将半下颌置于磷酸盐缓冲液（PBS）中并保持 4 °C 直到 μ- CT分析（可选）。使用手术刀（#15）和剪刀将门齿与下颌分离，注意不要损坏或折断样本。</li>
	<li>用 PBS 清洗分离的切牙，并通过将其浸入浓度递增的酒精（70% 和 100% 乙醇）中 2–3 小时进行脱水。 
	注意：如果组织（如牙髓）脱水不充分，可能会抑制树脂浸润，进而导致后续评估不充分。</li>
	<li>用乙醇脱水后，将切牙水平包埋于树脂中。继续进行步骤3。</li>
</ol>
2. 小鼠结扎诱导的牙周骨吸收（L-PBR）模型中上颌牙槽骨的提取
<ol>
	<li>向小鼠（C57BL/6，8–12周龄，雄性）腹腔注射（i.p.）0.8 mL 氯胺酮（100 mg/mL）+ 0.1 mL 赛拉嗪（Xylazine，100 mg/mL）+ 9.1 mL 磷酸盐缓冲液（PBS）作为麻醉剂，剂量为0.01 mL/g（体重）。在双眼涂抹眼用软膏，以防止麻醉期间角膜干燥。</li>
	<li>将麻醉后的小鼠置于加热垫上5-10分钟。评估其对尾部或足趾夹捏的反应以及角膜反射的完整性。确认小鼠对有害刺激无反应且角膜反射消失。</li>
	<li>将小鼠置于治疗台上，使用5-0丝线缝合线一端绑在治疗台的磁性支柱上，另一端固定以保持小鼠口腔张开。</li>
	<li>在手术显微镜下，使用显微持针器将结扎线（6-0 编织丝线）围绕上颌第二磨牙一侧缠绕一圈（单层）。为减少分析时的个体差异，采用一侧作为处理侧，另一侧作为对照侧。</li>
	<li>在腭侧打结并系紧结扎丝。打结后，将剩余的结扎丝尽可能剪短，以避免过长的结扎丝干扰咀嚼或进食。这一点至关重要，可确保在后续观察期间结扎丝不会因咀嚼而松脱。 
	注意：在动物恢复足够的意识以维持胸卧位之前，不得使其无人看管。动物在手术后未完全恢复前，不得放回与其他动物同处的环境中。在存活期间应维持无菌条件。</li>
	<li>给小鼠喂食饲料和饮水 随意摄取 持续2周。结扎2周后，使用CO₂处死小鼠2 随后进行断头处死。</li>
	<li>从每只小鼠中分离双侧上颌骨（结扎侧和对照侧）并保留磨牙。为获取带磨牙的上颌骨，使用剪刀剪除上颌周围肌肉和骨骼，注意避免施加过大外力。将每侧上颌骨置于磷酸盐缓冲液（PBS）中，并保存于 4 °C 直到 µCT 分析（可选）。</li>
	<li>分离带有磨牙的牙槽骨（1st 至 3rd使用解剖刀（#15）和剪刀从上颌分离标本，注意不要损伤或折断标本。</li>
	<li>用 PBS 清洗分离的肺泡骨，随后通过浸入浓度递增的酒精（70% 和 100% 乙醇）中脱水和脱脂，每步 2–3 小时。 
	注意：如果组织（如牙髓和骨组织）脱水不充分，可能会抑制树脂浸润，进而导致后续评估不充分。</li>
	<li>乙醇脱水后，将牙槽骨水平包埋于树脂中。继续进行步骤3。</li>
	<li>可选：执行 µCT 显微硬度测试前的评估
	<ol>
		<li>在进行显微硬度测试之前，先执行无损结构分析（例如， µCT) 使用同一试样进行显微硬度测试作为补充评估 (图1）。通过结构信息（三维图像、矿物密度、体积） µCT 可用于评估可能影响显微硬度结果的样品力学性能和质量。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="牙本质密度分析；氟化钠处理对牙本质的影响；CT扫描结果；二维切片" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66583/66583fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图1"> 
图1：对照组与氟化物处理组小鼠门齿釉质的代表性μCT图像。（A）下颌门齿的代表性μCT矢状面图像。（B-D）对照组门齿（NaF 0 ppm）的μCT冠状面图像。（E-G）经NaF处理（125 ppm）门齿的μCT冠状面图像。图中显示代表性釉质矿物密度（EMD，g/cm3）。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66583/66583fig01large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
3. 将样品包埋于树脂中
<ol>
	<li>从步骤1.7（氟斑牙模型）或步骤2.10（L-PBR模型）继续操作。</li>
	<li>用一层薄薄的凡士林涂抹包埋杯（1英寸）的内表面。按照说明书配制树脂（冷固化包埋树脂），将树脂与固化剂按15:2的体积比倒入提供的塑料杯中，使用木刮刀仔细混合至少2分钟，避免产生气泡。</li>
	<li>将已脱水和脱脂的切牙（图2A）或带有磨牙的牙槽骨（图2B）水平且平行于包埋杯底部放置（每杯一个样本）。</li>
	<li>将混合好的树脂（用量适中，约1.5 mL）倒入包埋杯中，完全覆盖样本。避免加入过多树脂，因为多余的树脂会妨碍后续抛光过程（图2C、D）。将装有样本的包埋杯置于50 °C的加热板上至少8小时，以促进树脂聚合。此步骤有助于使样本保持稳定位置。 
	注意：根据样本大小调整树脂用量，确保完全覆盖样本即可。切勿加入过多树脂，否则将需要更长时间去除多余部分。</li>
	<li>固化后，将含有样本的树脂块从包埋杯中取出。使用高级研磨抛光机，在流水冷却条件下，采用粗粒度防水砂纸（Grit 60/P60 和 120/P120）去除毛刺，并使样本平面与其对侧平面保持平行且平整。切牙和牙槽骨样本的高度应保持在约3 mm（图2E、F）。 
	​注意：若样本在显微硬度测试后还需进行扫描电镜（SEM）分析，则样本厚度应约为3 mm，以确保后续SEM观察不受影响。过小的样本在研磨过程中更难操作。仅用于显微硬度测试的样本，其高度可增至约10–20 mm。</li>
	<li>使用精密切片锯修整外部形状，制成矩形固体树脂块并修圆角（切牙样本尺寸约为宽30 mm、长10 mm（图2G）；牙槽骨样本尺寸约为宽10 mm、长5 mm（图2H））。</li>
	<li>完成粗略形状修整后，使用超声波清洗器清除树脂块上的碎屑和颗粒（约1分钟）。然后进入步骤4。</li>
</ol>
<img alt="牙齿包埋、切片过程；示意图系列；牙科树脂包埋，解剖学研究。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66583/66583fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图 2"> 
图 2：树脂包埋与抛光流程示意图。（A）脱水和脱脂后的切牙。（B）L-PBR 中脱水和脱脂后的牙槽骨。（C, D）浸入树脂中的切牙与牙槽骨。（E, F）通过切除部分树脂，更便于对目标组织表面进行抛光。（G, H）将树脂边缘修圆以利于抛光操作。缩写：L-PBR = 结扎诱导的牙周骨吸收。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66583/66583fig02large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
4. 样品抛光
注意：在高级研磨抛光机上，通过水浸条件下使用防水砂纸（从粗到细）手动对样本进行抛光处理。
<ol>
	<li>将粗粒度防水砂纸（粒径 600/P1200）放置于研磨机上。将已修整并清洁的树脂块（来自步骤 3.7）置于粗粒度防水砂纸上。</li>
	<li>在加水的同时，手持树脂块，在研磨抛光机上对样品的待评估表面进行抛光（速度 1-10 x g）。此时应注意手持树脂块，使评估表面与地面保持平行。为确保评估表面完整，需用肉眼或显微镜检查表面。 
	注意：请注意研磨机为顺时针旋转，若施加均匀压力可能导致表面不平行。为获得平行表面，应保持抛光盘转速恒定，小心按压试样数秒后，将试样旋转 180° 并以相同时间按压。粗砂纸可能不仅去除树脂，还会损伤样品。</li>
	<li>更换为粒径 800/P2400 的砂纸，并将树脂块放置其上。重复步骤 4.2。</li>
	<li>使用超声波清洗器去除树脂块上的碎屑和颗粒（约 1 分钟）。 
	注意：建议在继续操作前使用超声波清洗器清除表面碎屑，以防堵塞。</li>
	<li>接下来使用更细的砂纸进行逐级抛光；抛光顺序依次为 12 µm、9 µm、3 µm、1 µm 和 0.3 µm。</li>
	<li>将研磨抛光机平台上的砂纸更换为研磨膜（12 µm），不旋转平台，将树脂块放置于研磨膜上。 
	注意：本实验中，研磨平台在水浸条件下适用于获得平整表面。也可使用大型平面镜（或类似物）提供平行性。</li>
	<li>在水冷却条件下，手动小心地在研磨膜上对样品的评估表面进行抛光。在注水状态下，以 2 至 3 cm（1 英寸）的行程，分别在垂直、水平和对角方向上移动样品相同的时间。当抛光操作正确完成时，树脂样品将粘附于研磨膜上。</li>
	<li>按照步骤 4.4 的方法清除碎屑和颗粒。根据逐级抛光顺序（从 12 µm 到 0.3 µm）更换为下一级粒径的砂纸，并将树脂块放置其上。</li>
	<li>在加水的同时，手持树脂块，手动小心地在研磨膜上对样品表面进行抛光。按照步骤 4.4 的方法清除碎屑和颗粒。</li>
	<li>重复步骤 4.5 至 4.8，完成最终抛光（0.3 µm）。完成最终抛光（0.3 µm）后，样品应具有镜面光洁的表面（图 3A）。</li>
	<li>使用乙醇（100%）清洁样品表面，以脱脂和脱水，并将树脂块在室温下保存，直至进行显微硬度测试。储存期间应避免过度潮湿和灰尘。继续进行步骤 5。</li>
</ol>
5. 维氏显微硬度测试
注意：镜面抛光表面试样的压痕使用显微硬度计进行。测试采用维氏压头，载荷为25 g，保持时间为10秒。
<ol>
	<li>前牙显微硬度测试（牙氟中毒模型） 
	注意：釉质从外（口腔侧）向内（牙髓侧）可分为三层，即表层、中层和深层（釉牙本质界，DEJ）。图3B)16在本方案中，测试了三层牙釉质。
	<ol>
		<li>将加载力设置为25 g，加载时间为10 s。将树脂块放置于载物台上。</li>
		<li>在每个牙釉质层（表层、中层和釉牙本质界）以及每个区域的牙本质（颈部、中段和尖端）上各压痕6个点； 图3B).</li>
		<li>测量两条对角线的长度（d1 和 d2； 图3B) 计算维氏显微硬度值（HV； 图4).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>牙槽骨维氏显微硬度测试（L-PBR模型）
	<ol>
		<li>将加载力设置为25 g，加载时间为10 s。将树脂块置于载物台上。</li>
		<li>在牙槽嵴顶的近中和远中侧的牙槽骨上各压痕3-6个点。在1之间的牙槽骨上压痕st 和 2nd 摩尔（白色方块），以及 2nd 和 3rd 摩尔 
		注意：在本方案中，对照（完整）骨组织的近中和远中侧各评估6个点（共12个点），L-PBR则每侧各评估3个点（共6个点）。压痕点的数量取决于病损的状况（例如，骨量丢失过多会限制压痕区域）。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="牙釉质分析；显微硬度测试示意图，标注区域：颈部、中部、尖部。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66583/66583fig03v2.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图3"> 
图3：下颌切牙显微硬度的评估区域。（A）包含下颌切牙的镜面抛光样品表面。（B）各区域的压痕；分别为颈部、中部和尖部（NaF 0 ppm）。（C）三层牙釉质；从釉牙本质界（DEJ）起，分别为内层、中层和外层釉质。缩写：D = 牙本质，E = 釉质，DEJ = 釉牙本质界 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66583/66583fig03largev2.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="Vickers显微硬度分析柱状图，比较不同NaF浓度对釉质和牙本质区域的影响。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66583/66583fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图4"> 
图4：经NaF处理与未处理釉质的Vickers显微硬度。 对每个区域（颈部、中部和尖端区域）的牙本质及三层釉质的显微硬度进行了评估。(A-C) 对照组和(D-F) NaF (125 ppm) 处理组。数据以均值±标准差表示。采用单因素方差分析（ANOVA）结合Tukey事后检验评估显著性差异。p 值 &lt; 0.05 被认为具有统计学显著性。**p &lt; 0.005，***p &lt; 0.0005，****p &lt; 0.0001 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66583/66583fig04large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>

Microhardness Protocol for Evaluating Rodent Oral Disease

<ol><li>Broitman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indentation+hardness+measurements+at+macro-%2C+micro-%2C+and+nanoscale%3A+A+critical+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Tribol+Lett%22%5BJournal%5D)">Indentation hardness measurements at macro-, micro-, and nanoscale: A critical overview.</a> Tribol Lett. 65 (1), 23(2017).</li>
<li>Lee, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sirt6+activation+ameliorates+inflammatory+bone+loss+in+ligature-induced+periodontitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Sirt6 activation ameliorates inflammatory bone loss in ligature-induced periodontitis in mice.</a> Int J Mol Sci. 24 (13), 10714(2023).</li>
<li>Min, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+on+the+gradient+nanomechanical+behavior+of+dental+fluorosis+enamel%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale+Res+Lett%22%5BJournal%5D)">Investigation on the gradient nanomechanical behavior of dental fluorosis enamel.</a> Nanoscale Res Lett. 13 (1), 347(2018).</li>
<li>Craig, R. G., Peyton, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+micro-hardness+of+enamel+and+dentin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">The micro-hardness of enamel and dentin.</a> J Dent Res. 37 (4), 661-668 (1958).</li>
<li>Chun, K., Choi, H., Lee, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+mechanical+property+and+role+between+enamel+and+dentin+in+the+human+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Biomech%22%5BJournal%5D)">Comparison of mechanical property and role between enamel and dentin in the human teeth.</a> J Dent Biomech. 5, (2014).</li>
<li>Suzuki, M., Everett, E. T., Whitford, G. M., Bartlett, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4-phenylbutyrate+mitigates+fluoride-induced+cytotoxicity+in+alc+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">4-phenylbutyrate mitigates fluoride-induced cytotoxicity in alc cells.</a> Front Physiol. 8, 302(2017).</li>
<li>Sharma, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+dental+fluorosis+in+mmp20+%2B%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Assessment of dental fluorosis in mmp20 +/- mice.</a> J Dent Res. 90 (6), 788-792 (2011).</li>
<li>Wu, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+hardness+of+different+anatomical+regions+of+human+radius+and+its+impact+on+the+pullout+strength+of+screws%5BTitle%5D)+AND+%22Orthop+Surg%22%5BJournal%5D)">Bone hardness of different anatomical regions of human radius and its impact on the pullout strength of screws.</a> Orthop Surg. 11 (2), 270-276 (2019).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atlas+of+human+skeleton+hardness+obtained+using+the+micro-indentation+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Orthop+Surg%22%5BJournal%5D)">Atlas of human skeleton hardness obtained using the micro-indentation technique.</a> Orthop Surg. 13 (4), 1417-1422 (2021).</li>
<li>Ibrahim, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hardness+an+important+indicator+of+bone+quality%2C+and+the+role+of+collagen+in+bone+hardness%5BTitle%5D)+AND+%22J+Funct+Biomater%22%5BJournal%5D)">Hardness an important indicator of bone quality, and the role of collagen in bone hardness.</a> J Funct Biomater. 11 (4), 85(2020).</li>
<li>Vandana, K. L., Srishti Raj, B., Desai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+fluorosis+and+periodontium%3A+An+original+research+report+of+in+vitro+and+in+vivo+institutional+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Trace+Elem+Res%22%5BJournal%5D)">Dental fluorosis and periodontium: An original research report of in vitro and in vivo institutional studies.</a> Biol Trace Elem Res. 199 (10), 3579-3592 (2021).</li>
<li>Xia, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcarriers+containing+%26%2334%3Bhypoxia-engine%26%2334%3B+for+simultaneous+enhanced+osteogenesis+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Engineering+Journal%22%5BJournal%5D)">Microcarriers containing &#34;hypoxia-engine&#34; for simultaneous enhanced osteogenesis and angiogenesis.</a> Chemical Engineering Journal. 456, 141014(2023).</li>
<li>Chiu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+biglycan+on+physico-chemical+properties+of+ligament-mineralized+tissue+attachment+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Effects of biglycan on physico-chemical properties of ligament-mineralized tissue attachment sites.</a> Arch Oral Biol. 57 (2), 177-187 (2012).</li>
<li>Leong, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+adaptation+of+bone-pdl-tooth+complex%3A+Rattus-norvegicus+as+a+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Age-related adaptation of bone-pdl-tooth complex: Rattus-norvegicus as a model system.</a> PLoS One. 7 (4), e35980(2012).</li>
<li>Johnson, W. M., Rapoff, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microindentation+in+bone%3A+Hardness+variation+with+five+independent+variables%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mater+Sci+Mater+Med%22%5BJournal%5D)">Microindentation in bone: Hardness variation with five independent variables.</a> J Mater Sci Mater Med. 18 (4), 591-597 (2007).</li>
<li>Kweon, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+fam83h+overexpression+on+enamel+and+dentine+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Effects of fam83h overexpression on enamel and dentine formation.</a> Arch Oral Biol. 58 (9), 1148-1154 (2013).</li>
<li>Boivin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mineralization+and+organic+matrix+in+the+microhardness+of+bone+tissue+from+controls+and+osteoporotic+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">The role of mineralization and organic matrix in the microhardness of bone tissue from controls and osteoporotic patients.</a> Bone. 43 (3), 532-538 (2008).</li>
<li>Okamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microstructural+evaluation+of+the+mineralized+apical+barrier+induced+by+a+calcium+hydroxide+paste+containing+iodoform%3A+A+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endod%22%5BJournal%5D)">Microstructural evaluation of the mineralized apical barrier induced by a calcium hydroxide paste containing iodoform: A case report.</a> J Endod. 2 (2), 243-251 (2024).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B10+cells+alleviate+periodontal+bone+loss+in+experimental+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">B10 cells alleviate periodontal bone loss in experimental periodontitis.</a> Infect Immun. 85 (9), e00335(2017).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nlrp3+regulates+alveolar+bone+loss+in+ligature-induced+periodontitis+by+promoting+osteoclastic+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">Nlrp3 regulates alveolar bone loss in ligature-induced periodontitis by promoting osteoclastic differentiation.</a> Cell Prolif. 54 (2), e12973(2021).</li>
<li>Robinson, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+mice+with+elevated+c-type+natriuretic+peptide-dependent+guanylyl+cyclase-b+activity+have+increased+osteoblasts%2C+bone+mass+and+bone+strength%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Male mice with elevated c-type natriuretic peptide-dependent guanylyl cyclase-b activity have increased osteoblasts, bone mass and bone strength.</a> Bone. 135, 115320(2020).</li>
</ol>

作者声明无利益冲突。

显微硬度测试用于评估牙齿和骨骼等硬组织的力学性能。迄今为止，已有多种不同的显微硬度测量方法被报道。大多数测量信息，尤其是样本制备和压痕位点的描述，往往不够充分。本研究聚焦于牙氟斑病和牙周病模型中釉质和牙槽骨的显微硬度检测方案。为了获得一致且准确的结果，该方案中的关键步骤包括：树脂包埋时样本的取向、保持检测表面与地面平行、对检测表面进行逐级抛光以获得镜面效果，以及通过参考点确定压痕区域和位点。在树脂包埋和抛光过程中，必须通过肉眼或显微镜检查，确保检测表面始终与地面平行且表面完整无损。尽管属于可选步骤，但仍建议进行μCT分析以确定压痕位点。
在牙氟中毒模型中，NaF（125 ppm）处理导致从牙颈部至中部区域的釉质结构难以通过μCT识别。仅牙尖区域的釉质可与牙本质区分开来（图1和 补充图1）。因此，在牙氟中毒模型中评估釉质显微硬度时，应选择牙尖区域进行压痕测试。相应地，既往研究在牙氟中毒模型中均采用切牙釉质的牙尖区域进行评估6,7。在牙周病模型中，通过μCT&#160;进行三维观察有助于识别颊侧和腭侧的骨吸收情况（图5）。这对于了解骨量丧失程度以及牙槽骨的解剖位置，从而确定一致的显微硬度压痕位点至关重要。
先前的一项研究证明了&#160;显微硬度与矿物密度之间的正相关关系17. 我们通过显微计算机断层扫描（μCT）获得的牙本质基质密度（EMD）结果&#160;和釉质显微硬度（HV； 图1 和 图4) 与本研究结果一致。这些结果表明，显微硬度的大致趋势可通过μCT进行预测。&#160;非破坏性地。然而，釉质三层之间的梯度显微硬度差异（图4B, C, F难以通过μCT识别为EMD梯度&#160;分析。在这方面，显微硬度测试的分辨率可视为高于μCT&#160;以阐明病理状态。此外，该方案也可应用于其他牙体硬组织，包括牙本质。使用同一试样，可在显微硬度压痕实验之前，将多模式评估（扫描电镜、扫描电镜-能谱分析、微区X射线荧光分析和拉曼光谱）整合至实验流程中18由于压痕会损坏样品，因此应先进行无损检测。
显微硬度测试的一个关键局限性在于，其数值在样品制备和压痕过程中容易受到多种因素的影响。为了尽量减少主观因素的干扰，有必要优化压痕位点，并建立适用于每种病理状况或疾病模型的标准化测量方案。在本研究中，我们展示了一种用于牙氟斑病模型的釉质显微硬度检测方案。然而，对于其他类型的釉质发育不全，例如成釉细胞发育不全（AI）模型，由于不同疾病模型的病理特征存在差异，可能需要对该方案进行修改和/或优化。在牙周病模型中，主要靶组织为牙槽骨。L-PBR模型在小鼠中应用基因修饰技术方面具有高度适用性。迄今为止，已有大量关于L-PBR模型的研究发表19,20。然而，据我们所知，尚无任何研究报道过小鼠牙周病模型中牙槽骨的显微硬度。这一空白可能归因于多个因素：牙槽骨显微硬度与牙周病之间的关系尚不明确；在小鼠牙槽骨上进行显微硬度测试在技术上存在困难，尤其是在骨吸收病灶区域（由于骨质破坏导致难以确定压痕位点）。尽管显微硬度值已被证实是股骨及其他骨骼中有效的力学参数21，但可以合理推测，上述技术难题正是导致牙周病模型中尚未开展显微硬度评估的主要原因。本标准化方案可用于评估受牙周病和/或疾病恢复模型影响的牙槽骨的力学性能。
本报告中，我们展示了在小鼠口腔疾病模型中评估釉质和牙槽骨显微硬度的标准方案。该方法为未来研究釉质及牙周骨组织的丧失与再生、开发针对釉质发育异常和牙周病的新型预防及治疗策略奠定了基础。

硬度是材料的力学性能之一（例如弹性、硬度、粘弹性以及断裂行为），常用于表征材料局部区域抵抗压缩变形和断裂的能力。静态压痕硬度测试是最常用的方法，包括维氏硬度和努氏硬度1。维氏硬度测试通过在固定试验载荷下将金刚石压头压入材料表面来实施。该压头呈金字塔形，具有正方形底面，相对面之间的夹角为136°。测量试样表面形成的两条对角线长度，取其平均值用于计算硬度值，硬度由F/A的比值确定（其中F为作用力，A为压痕的表面积）。维氏显微硬度值（HV=F/A）通常以千克力每平方毫米（kgf/mm2）表示，1 HV ≈ 0.1891 F/d2（N/mm2）。努氏硬度也采用金刚石四棱锥压头，但其相对面具有不相等的夹角。努氏硬度值（HK）等于施加载荷与压痕投影接触面积的比值。根据施加于试样材料上的力的大小，硬度测试可分为显微压痕（显微硬度）测试和宏观压痕测试。显微压痕测试通常使用0.01–2 N（约1–203 gf）范围内的载荷；而宏观压痕测试则使用超过10 N（10119 gf）的载荷1。
为了评估口腔疾病中牙体硬组织（包括牙齿和牙槽骨）的特征，常采用显微计算机断层扫描（µCT）和扫描电子显微镜（SEM）进行结构分析。µCT可提供三维成像信息（体积和矿物密度）2，而SEM则可生成微观结构图像（如釉柱结构及骨陷窝-骨小管系统）3。除了通过µCT和SEM进行结构分析外，显微硬度也是评估口腔疾病中结构变化如何影响牙齿和牙槽骨力学性能的重要参数之一，例如釉质发育异常和牙周骨吸收。人类釉质的维氏显微硬度值（HV = 283–374）约为牙本质（HV = 53–63）的4至5倍4,5。在啮齿类动物氟斑牙模型中，经氟处理的小鼠门牙釉质显微硬度显著降低（HV = 136），而对照组釉质的硬度为HV = 3346,7。这表明氟斑釉质较软且较弱，其矿化程度较低而蛋白含量高于非氟斑釉质。显微硬度也被用于评估骨组织的力学性能。既往多项研究已探讨了来自不同解剖部位的人骨力学行为，包括长骨的显微硬度8,9,10。人类氟中毒股骨的平均显微硬度较非氟中毒股骨显著降低（氟中毒组HV = 222.4，非氟中毒组HV = 294.4）11。尽管显微硬度是一个有用的参数，但目前关于口腔疾病中牙槽骨显微硬度（无论是维氏硬度12还是努氏硬度13,14）的研究报道仍十分有限。
迄今为止，已有多种不同的显微硬度测量方法被报道。由于显微硬度值会因样品制备（抛光和表面平整度）以及压痕位置的不同而变化15，不同的实验方案可能导致研究结果之间存在差异。在口腔疾病模型中，显微硬度测试方案的标准化对于实现一致且准确的评估至关重要。在本研究中，我们展示了一种在小鼠氟斑牙模型和牙周骨吸收模型中对牙齿和牙槽骨进行显微硬度分析的标准化方案。

<table><tbody><tr><td>6-0 编织丝线缝合线</td><td>Teleflex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Canica 小动物手术系统</td><td>Kent Scientific Corporation&amp;nbsp;</td><td>SURGI 5001</td><td></td></tr><tr><td>CarbiMet PSA 120/P120</td><td>Buehler</td><td>30080120</td><td></td></tr><tr><td>CarbiMet PSA 60/P60</td><td>Buehler</td><td>36080060</td><td></td></tr><tr><td>CarbiMet PSA 600/P1200</td><td>Buehler</td><td>36080600</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo 微型持针器</td><td>F.S.T</td><td>12060-01</td><td></td></tr><tr><td>Epofix 冷固化包埋树脂</td><td>Electron Microscopy Science</td><td>CAT-1237</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand 112xx 系列高级超声波清洗机</td><td>Fisher Brand</td><td>FB11201</td><td></td></tr><tr><td>无氟啮齿类动物饲料</td><td>Bio Serv</td><td>F1515</td><td>&amp;nbsp;AIN-76A，1/2&quot; 颗粒</td></tr><tr><td>活体微计算机断层扫描仪 Skyscan 1176</td><td>Bruker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isomet 1000 精密切割锯</td><td>Buehler</td><td>MA112180</td><td></td></tr><tr><td>研磨膜 0.3&amp;micro;m</td><td>Maruto Instrument Co., LTD. Japan</td><td>26-4203</td><td>替代品&amp;nbsp;&lt;br/&gt; A3-0.3 SHT，3M USA</td></tr><tr><td>研磨膜 1&amp;micro;m</td><td>Maruto Instrument Co., LTD. Japan</td><td>26-4206</td><td>替代品&lt;br/&gt; A3-1 SHT，3M USA</td></tr><tr><td>研磨膜 12&amp;micro;m</td><td>Maruto Instrument Co., LTD. Japan</td><td>26-4211</td><td>替代品&lt;br/&gt; A3-12 SHT，3M USA</td></tr><tr><td>研磨膜 3&amp;micro;m</td><td>Maruto Instrument Co., LTD. Japan</td><td>26-4204</td><td>替代品&lt;br/&gt; A3-3 SHT，3M USA</td></tr><tr><td>研磨膜 9&amp;micro;m</td><td>Maruto Instrument Co., LTD. Japan</td><td>26-4201</td><td>替代品&lt;br/&gt; A3-9 SHT，3M USA</td></tr><tr><td>Leica wild 显微镜&amp;nbsp;</td><td>Leica</td><td>LEIC M690</td><td></td></tr><tr><td>Metaserv 2000 变速研磨抛光机</td><td>Buehler</td><td>No: 557-MG1-1160</td><td></td></tr><tr><td>MicroCut PSA 1200/P2500</td><td>Buehler</td><td>36081200</td><td></td></tr><tr><td>MicroCut PSA P4000</td><td>Buehler</td><td>36084000</td><td></td></tr><tr><td>显微硬度计 ALPHA-MHT-1000Z&amp;nbsp;</td><td>PACE Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SamplKups &amp;nbsp;1 英寸</td><td>Buehler</td><td>No: 209178</td><td></td></tr><tr><td>氟化钠</td><td>Fisher Scientific</td><td>S299-100</td><td></td></tr><tr><td>Westcott 缝合剪刀</td><td>JEDMED</td><td>Cat. #25-1180</td><td></td></tr><tr><td>ZooMed Repti Therm 底部加热垫（U.T.H）</td><td>Zoo Med Laboratories, Inc.</td><td>RH-4</td><td></td></tr></tbody></table>

啮齿类动物口腔疾病模型中牙齿与牙槽骨的显微硬度测量

Microhardness Measurements on Tooth and Alveolar Bone in Rodent Oral Disease Models

评估口腔疾病模型（包括氟斑牙和牙周炎）中牙釉质、牙本质和骨组织的力学性能指标——显微硬度。显微计算机断层扫描（µCT）可提供三维成像信息（体积和矿化密度），扫描电子显微镜（SEM）则生成微观结构图像（釉柱及骨陷窝-管状系统）。与µCT和SEM的结构分析相辅相成，显微硬度是评估结构变化如何影响力学性能的重要参数之一。尽管显微硬度是一项有价值的指标，但针对口腔疾病中牙槽骨显微硬度的研究仍较为有限。迄今为止，已有多种不同的显微硬度测量方法被报道。由于显微硬度值受样本制备（抛光及表面平整度）和压痕位置的影响，不同实验方案可能导致研究结果之间存在差异。因此，在口腔疾病模型中建立标准化的显微硬度检测流程对于实现一致且准确的评估至关重要。本研究展示了一种适用于牙齿及牙槽骨显微硬度分析的标准化操作流程。所用样本如下：在氟斑牙模型中，采集饮用含氟水6周与未饮用含氟水的实验小鼠的门齿；在结扎诱导的牙周骨吸收（L-PBR）模型中，采集上颌第二磨牙区域结扎后产生牙周骨吸收的小鼠牙槽骨样本nd 摩尔。结扎后2周采集上颌骨标本，按照标准化方案分析维氏硬度。该方案详细提供了树脂包埋、连续抛光以及切牙和牙槽骨压痕位点的材料与方法。据我们所知，这是首个用于评估啮齿类动物口腔疾病模型中牙齿和牙槽骨力学性能的标准化显微硬度检测方案。

氟斑牙模型：图1展示了对照组和氟处理小鼠门齿的代表性μCT图像。在对照组中（图1B-D），颈区的釉质矿化密度（EMD）为1.188 g/cm3（图1B），低于中部（1.924 g/cm3）和尖端（1.819 g/cm3；图1C，D）。在氟处理组的釉质中（图1E-G），五个样本中仅有一个可用于评估颈区的EMD（0.835 g/cm3；图1E和补充图1）。所有区域的EMD均较对照组降低（图1F，G）。低EMD水平与低釉质显微硬度值一致。如图3所示，在颈区、中部和尖端区域的牙本质以及釉质的三层（内层、中层和外层）共进行了六点压痕测试，每层三点。在对照组中，颈区各层釉质的显微硬度均低于牙本质（图4A）。在中部和尖端区域，各层釉质的显微硬度均显著高于牙本质（图4B，C）。在三个釉质层次中，从中部到尖端区域，显微硬度均从内层向外层逐渐增加（图4B，C）。牙本质的显微硬度值约为100 HV，在颈区、中部和尖端区域变异较小，而釉质的显微硬度在不同区域及三层之间存在显著差异。这些结果表明，釉质显微硬度因压痕位置（区域和釉质层次）的不同而存在显著差异。在氟处理牙齿中，与对照组相反，即使在中部区域，釉质显微硬度也低于牙本质（图4E）。在尖端区域，显微硬度从内层到外层釉质显著降低（图4F）。这种釉质各层间显微硬度的梯度差异难以通过μCT图像进行评估。
L-PBR 模型： 图 5A 显示 μCT 结扎诱导的牙周骨吸收（L-PBR）模型中牙槽骨的影像。代表性骨矿物密度（BMD）（第二磨牙周围牙槽骨近中侧与远中侧的平均值）为0.76 g/cm3 在对照骨和0.61 g/cm3 在L-PBR中，骨吸收水平通过釉牙骨质界（CEJ）至牙槽骨嵴顶（ABC）的距离进行量化。与对照骨组织相比，L-PBR中的CEJ-ABC距离显著增加图5B). 图6 显示显微硬度压痕位置及相应区域 μCT 图像。从牙槽骨嵴顶开始，在对照骨的近中和远中侧各进行五个凹痕标记（共10个位点），位于1之间的区域st 和 2nd 由白色方框标示的磨牙（图6A）。在L-PBR中，分别测量近中侧和远中侧的3个凹陷处（共6个位点）图6B）。牙槽骨的维氏显微硬度值（HV）为1之间的压痕平均值st 和 2nd 摩尔（molar）图6B；白色方块），以及 2 之间nd 和 3rd 摩尔（molar）图6B；蓝色方块）。与对照组（健康）牙槽骨相比，受牙周病影响的L-PBR牙槽骨的骨密度（BMD）和骨小梁体积分数（HV）值呈降低趋势。
<img alt="牙齿密度分析；micro-CT图像及对照组与L-PBR处理组结果比较的柱状图。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66583/66583fig05.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图5"> 
图5：代表性 μCT L-PBR 模型中的影像学表现及骨量丢失 (A代表性 μCT L-PBR 模型中的图像（对照组和 L-PBR 组）。显示代表性的骨矿物质密度（BMD；第二磨牙周围牙槽骨近中侧和远中侧的平均值）（g/cm3). (B上颌第二磨牙近中和远中牙骨质牙本质界至牙槽骨嵴顶在根尖方向的距离。数据以均值 ± 标准差表示，组间差异采用 t 检验进行评估。 p 数值 &lt; 0.05 被认为具有统计学显著性。**** p &lt; 0.0001。缩写：L-PBR = 结扎诱导的牙周骨吸收，CEJ = 釉质牙骨质界，ABC = 牙槽骨嵴 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66583/66583fig05large.jpg" target="_blank">请点击此处以查看此图的放大版本。</a>
<img alt="骨结构的显微镜分析、硬度值测定及详细成像；比较研究" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66583/66583fig06.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图6"> 
图6L-PBR 模型中具有代表性的显微硬度结果。 具有代表性的压痕位点颊侧（左）及相应部位 μCT 图像（右侧）的（A) 控制牙槽骨，以及（BL-PBR。白色方框显示M1与M2之间牙槽骨的压痕区域，蓝色方框显示M2与M3之间牙槽骨的压痕区域。显微硬度值（HV）为白色和蓝色方框区域内压痕的平均值。M1: 1st 磨牙，M2：2nd 磨牙，M3：3rd 磨牙。缩写：L-PBR = 结扎诱导的牙周骨吸收。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66583/66583fig06large.jpg" target="_blank">请点击此处以查看此图的放大版本。</a>
补充图1：经氟化钠处理的牙釉质的μCT图像（冠状切面）。 氟化钠（125 ppm）导致牙釉质低矿化，该现象在牙颈部和中部区域尤为明显。五份样本中仅有一份（样本编号1）在牙颈部和中部区域勉强可见牙釉质。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66583/Fig%20S1.zip" target="_blank">请点击此处下载该文件。</a>

显微硬度是一种机械性能，也是评估硬组织病理生理学的有用参数。本文中，我们展示了一种标准化的显微硬度分析方案（包括样品制备、抛光、平整表面及压痕位点选择），用于啮齿类动物口腔疾病模型中牙齿和牙槽骨的显微硬度检测，具体模型为氟斑牙和结扎诱导的牙周骨吸收。

在口腔疾病模型（包括氟斑牙和骨病）中，对牙釉质、牙本质和骨组织的机械性能——显微硬度进行评估。

本研究中，我们致力于建立准确且一致的显微硬度测试方法。显微硬度测试是一种传统方法，但迄今为止，相关方法学在以往的文献中尚未得到充分描述。正如我们在结果中所展示的，显微硬度的即时降低程度取决于牙釉质的压痕位置，例如内层、中层和外层。我们的结果表明，压痕位置对于获得准确且一致的结果至关重要。目前存在的科学空白在于，以往的研究尚未充分描述显微硬度测试方法，特别是压痕位置的差异。由于这一原因，不同研究之间的显微硬度结果缺乏一致性。为弥补这一空白，我们建立了本实验方案，以实现准确且高效的评估。我们所建立的方案将推动牙釉质、牙本质和牙槽骨在牙周病、骨吸收以及所有癌症骨侵袭模型中的矿化组织检测。我们将重点关注环境因素如何影响牙-颅面病理。例如氟化物和有机氟化物PFAS。PFAS是人造的永久性化学物质。我们的显微硬度实验方案将有助于评估全氟烷基物质（PFAS）在牙齿发育、牙周骨吸收以及口腔癌骨侵犯过程中对矿化组织机械性能的影响。首先，在包埋杯内表面涂上一层薄薄的凡士林。将树脂和固化剂倒入塑料杯中。使用木质刮刀小心地将树脂和固化剂混合至少两分钟，确保不产生气泡。接着，将牙科样本水平放置，使其与嵌埋杯底部平行。将混合好的树脂倒入杯中，以完全覆盖样本。现在将含有样品的镶嵌杯置于50摄氏度的加热板上至少八小时。待树脂固化后，从镶嵌杯中取出带样品的树脂。去除毛刺。使用带有粗粒防水砂纸的高精度研磨抛光机，在水浸条件下将样品的平面及其对侧平面研磨至相互平行且平整。使用精密切片锯修整树脂包埋块的外部形状，使其成为圆角矩形。然后使用超声波清洗器清除包埋块上的碎屑和颗粒。为了修整样本块，将粗制的防水砂纸放在研磨机上。将样本块转移到砂纸上。然后握住样本块，并向其表面倒水。 在研磨抛光机上同时抛光样品的评估表面。将砂纸更换为粒度800 P2400，并将树脂块放置其上。在流水冲洗条件下重复进行抛光。使用超声波清洗器清洁样品块。然后按照给定顺序使用更细的研磨纸进行逐级抛光。接下来，将研磨膜放置在研磨抛光机的平台上，不进行旋转。将树脂块置于研磨膜上。在水冷却条件下，手动在研磨膜上抛光样品的评估表面。在注水条件下，以2至3厘米的行程，将样品块垂直、水平和对角方向移动相同的秒数。使用超声波清洗器去除碎屑和颗粒。然后更换砂纸至下一型号，再在砂纸上抛光树脂块。若操作得当，树脂样本会牢固地粘附在研磨膜上。当完成最终抛光后，样品表面应具有镜面光洁度。使用100%乙醇对表面进行脱脂和脱水处理。将显微硬度计的加载力设置为25克力，加载时间为10秒。将含有嵌入的小鼠门齿样本的抛光树脂块放置在仪器载物台上。在每层釉质层和每个牙本质区域各制作六个压痕点。测量两个对角线的长度，以计算维氏显微硬度值。接下来，将切牙树脂块替换为含有小鼠牙槽骨的树脂块。现在从牙槽嵴处开始，在牙槽骨的近中和远中两侧各制作三到六个压痕点。在第一与第二磨牙之间以及第二与第三磨牙之间的牙槽骨区域进行压痕。对照组小鼠所有釉质层的显微硬度均低于颈部区域的牙本质。在中部和尖端区域，各层釉质的显微硬度均显著高于牙本质。在三层釉质中，每个中部和尖端区域的显微硬度均从内层釉质向外层釉质依次增加。氟化物处理牙齿的釉质显微硬度在中间区域低于牙本质。从内层到外层釉质，显微硬度显著降低。受牙周病影响的牙槽骨显微硬度值相较于对照组骨组织呈现降低趋势。

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