一种不损伤脑血管解剖结构的大鼠中动脉闭塞/再灌注模型

本研究建立了一种用于大脑中动脉闭塞或再灌注的大鼠模型，该模型可保持脑血管结构的完整性。重点介绍一种在不破坏脑血管解剖结构的前提下，诱导大鼠缺血性卒中模型的新方法。该项目采用显微外科技术及线栓法诱导缺血。

该方法可在不损伤颈总动脉或颈外动脉系统的情况下诱导缺血。与可能永久性损害血流或破坏脑血管解剖结构的技术不同，本方案可保持多条血管的解剖完整性，为缺血性脑卒中的研究提供了一种更为准确且损伤更小的方法。

首先，将麻醉后的大鼠置于手术台上。剃除颈部及左侧颈部区域的毛发，随后使用碘伏和70%乙醇对术区进行三次消毒。在颈部腹侧正中做一条1.5厘米长的切口，并切开浅筋膜。

钝性分离以暴露颈外动脉、颈内动脉和颈总动脉。在颈总动脉周围放置三根4-0丝线，并在接近颈内动脉分叉处的颈外动脉上穿一根丝线。在近端颈总动脉上打一个可松解的滑结。

使用止血钳收紧远端颈总动脉上的缝线以阻断血流。在缝合过程中，于颈总动脉上松松地打另一个滑结，以确保血管未被完全闭塞。现在，使用剪刀在颈总动脉近端丝线缝合处与中间缝合处之间做一个0.5毫米的切口。

将一根3厘米长的4-0丝线引入颈总动脉。收紧颈总动脉周围的丝线缝合线，以固定血管内丝线并防止出血。随后拆除远端颈总动脉上的缝线。

继续将细丝插入大脑中动脉的管腔，同时控制位于颈外动脉周围的缝线。启动计时器，并记录闭塞开始的时间。使用3-0丝线缝合颈部切口。

将动物小心地放入恢复笼中。在完成缺血模型制备后，重新打开麻醉大鼠的颈部切口。在解剖显微镜下，轻柔地撤出阻塞尼龙线，同时将微型夹水平放置于血管内缝合结附近。

继续撤出，直至白色尖端在颈总动脉切口附近清晰可见。然后完全取出尼龙线，并松开已固定的管腔内缝线结。在近端颈总动脉结扎线靠近心脏一侧附近放置另一个微型夹。

随后，移除颈总动脉近端的缝合结。用生理盐水冲洗切口部位。使用无菌棉球擦干区域，清除血液，以获得清晰的手术视野。

现在在4倍放大倍数下，使用11-0显微缝合线以间断缝合方式缝合颈总动脉切口。缝合后，移除颈总动脉两端的微型夹子以恢复血流。用无菌棉球对颈总动脉缝合部位加压30秒。

观察颈总动脉两分钟，确保无出血发生。缝合颈部切口，并将大鼠置于35°C的护理箱中以恢复麻醉。缺血再灌注三天后，从处死的大鼠体内取出脑组织。

将脑组织在 -20 °C 下冷冻 20 分钟。冷冻后，使用解剖刀将脑组织切成 2 毫米厚的冠状切片。在 37 °C 条件下，用 2% TTC 孵育脑切片 20 分钟。

孵育后，将脑切片转移至小型培养皿中，并弃去2%TTC溶液。随后在室温下用10%福尔马林固定脑切片30分钟。弃去福尔马林，并用PBS冲洗脑切片。

拍摄连续切片的数字照片。使用 ImageJ 软件定量测量梗死区域。经 TTC 染色后，可在纹状体和大脑皮层中均观察到脑缺血所致的梗死灶。

缺血性脑卒中术后3天，整个半球的总梗死面积百分比约为30%，术后死亡率为16.7%。