立即部分去除卵丘-卵母细胞复合物:一种快速观察体外受精的改进方法

我们的研究重点是通过评估立即部分切除卵丘卵母细胞是否会压缩、增强受精来改善 IVF 结果。观察效率影响受精种族和胚胎质量，并优化实验室程序。我们的目标是改进 IVF 技术以获得更好的临床结果。

我们已经确定，在卵丘卵母细胞的内侧部分切除显着压缩，提高了 IVF 中受精观察的效率。这导致评估受精事件的时间缩短，并可能优化胚胎质量和 IVF 结果。我们的方案通过减少手工时间、最大限度地减少环境暴露并可能提高胚胎质量来提高 IVF 效率。

与传统技术相比，它提供了一种简化且有效的方法。首先，将取卵皿放入 37 摄氏度的培养箱中过夜。将 12 毫升卵泡作培养基在 14 毫升圆底试管中于 37 摄氏度孵育过夜。

然后在取卵前 30 分钟将试管转移到预热的试管架上。接下来，将 9 毫升卵泡作培养基添加到 14 毫升圆底试管中，并在 37 摄氏度下孵育过夜。在取卵当天，将 4.5 毫升培养基转移到覆盖有 2 毫升 100% 石蜡油的预孵育卵母细胞拾取皿中。

然后将 4.5 毫升受精培养基加入卵母细胞拾取皿中，并在 37 摄氏度下孵育过夜。然后，将 1 毫升施肥培养基加入覆盖有 100% 石蜡油的 6 厘米培养皿中。要钝化和磨圆玻璃巴斯德移液管的尖端，请在酒精灯上燃烧约 5 秒钟。

将吸头连接到巴斯德移液器的尖端，使其可以接触培养皿底部而不会刮伤。用卵泡作培养基在 10 厘米的培养皿中通过移液器冲洗玻璃杯。简而言之，使用 17 号针头在经阴道超声引导下取出卵母细胞。

将 14 毫升圆底试管中收集的卵泡液倒入 10 厘米的培养皿中。将培养皿放在恒温平台上。在立体显微镜下观察 OCCC 以确认卵母细胞的存在并评估其成熟度。

确认 OCCC 中是否有卵母细胞，并对卵母细胞成熟度进行初步评估。用圆形火焰抛光巴斯德移液器预先准备硅胶吸液管。吸出 OCCC，同时用左手无名指将培养皿轻轻抬高到 9 到 10:00 位置，并将其向左倾斜约 15 度。

在培养皿的 11:00 位置吐出吸出的 OCCC 的同时，轻轻向右水平拉长。然后观察扩增的 OCCC 周围颗粒细胞的大小。现在，使用巴斯德移液管轻轻去除多余的颗粒细胞，并在细长的 OCCC 上的适当位置快速向下切割。

将切好的 OCCC 转移到装有 OCCC 冲洗液的收集皿中。将剩余的卵泡液倒入无菌样品容器中。首先，在光学显微镜下评估收集的精液样本的精子浓度、活力和形态。

然后将精子沉淀转移到新的离心管中，并在受精培养基中洗涤两次。将它们在 6% 二氧化碳和 37 摄氏度下孵育，直到需要为止。去除多余的颗粒细胞后，向受精皿中加入 6 到 8 个 OCCC 和 1 毫升受精培养基。

在受精培养皿中取出后约 2 至 3 小时，将 OCCC 与模态精子在单个液滴中授精。对于短期受精，将 OCCC 与精子共孵育 4 到 6 小时。孵育后，机械去除卵母细胞周围的卵丘细胞。

使用内径略小于卵母细胞的移液器吸出卵母细胞，以确保完全去除细胞。要确认受精，请观察两个极体的存在。显示第二个极体的卵母细胞被认为是受精的。

对于常规受精，在共孵育 18 至 20 小时后，使用移液器去除卵丘细胞以进行受精评估。取卵后，将受精卵母细胞培养 3 至 5 天。在授精后 20 小时评估受精以确定原核的数量。

随后，在培养基液滴中单独培养每个受精卵，并将受精后的胚胎转移到卵裂培养基中。将第 3 天的胚胎转移到囊胚细胞培养基中，并在第 5 天进行评估。将连续数据报告为均值和标准差，并将顺序数据表示为比率。

在 47 名接受短期授精的患者中，未观察到患者年龄和取卵母细胞数量的显著差异。与对照组相比，部分切除 OCC 组的平均手术时间显著缩短，尽管在卵裂率、最佳胚胎率和最佳芽细胞率方面没有发现显著差异。在接受传统 IVF 的患者中，两组患者年龄和取卵母细胞数量存在相似性。

尽管在部分切除 OCCC 组时观察到平均手术时间略短，但无统计学意义差异。与前一组一样，在卵裂率、最佳胚胎率和最佳囊胚细胞率方面未发现显着差异。