基于量子点纳米珠的荧光侧向流免疫分析法

目前，我们的研究重点是构建高质量的多功能纳米材料，并将其应用于超灵敏即时检测技术的开发。侧向流动免疫分析试纸条是即时检测中关键的快速检测工具，尤其在流行病期间的疾病筛查中具有重要作用。为了提高侧向流动免疫分析的检测灵敏度，已涌现出多种新型纳米颗粒，包括彩色乳胶颗粒、上转换荧光纳米颗粒、时间分辨荧光微球以及量子点。

我们介绍了一种一步乳化蒸发法制备量子点纳米微球，并将其应用于高灵敏度检测，例如侧向荧光免疫分析。与其他制备量子点纳米微球的方法相比，该方案具有操作简便和产率高的优势。此外，这种聚合物复合纳米微球具有良好的生物相容性，而二氧化硅纳米微球通常需要额外的聚合物表面修饰才能实现类似性能。

利用制备的量子点纳米珠已开发出高灵敏度的荧光侧向流动免疫分析试纸条。这些试纸条可用于在临床现场对疾病生物标志物进行定性和定量检测。这种新型检测方法可帮助医疗专业人员快速、准确地诊断疾病。

首先，将 0.4 毫升苯乙烯-马来酸酐共聚物溶液与 0.1 毫升量子点溶液混合，制备 1 毫升油相。然后用氯仿补足至总体积为 1 毫升。接着，使用十二烷基硫酸钠溶液制备水相。

将1毫升油相与5毫升水相加入一个样品瓶中。将样品瓶置于磁力搅拌器上并启动搅拌。待油相与水相充分混合后，立即将样品瓶转移至预设程序的超声处理装置，并开启电源。

然后将小瓶放回室温下的磁力搅拌器上，持续搅拌过夜。溶剂蒸发后，向纳米微珠悬浮液中加入0.1毫升0.1毫摩尔的氢氧化钠，并使其反应一小时。首先，将100微升制备好的量子点纳米微珠加入200微升磷酸盐缓冲液中。

然后加入6 µL的EDC。随后，在室温下于旋转混合仪中孵育混合物30分钟。在室温下以13,523 ×g离心10分钟，弃去上清液。

接下来，向沉淀物中加入100 µL磷酸盐缓冲液。盖上管盖，并将其浸入工作中的超声水浴中，直至沉淀物完全分散。将100 µg抗体分散于200 µL磷酸盐缓冲液中，然后将活化的量子点纳米微球悬浮液加入抗体溶液中。

将混合物在室温下孵育30分钟，并持续旋转。然后，在室温下以6,010×g离心5分钟以去除过量抗体，并小心弃去上清液。为封闭纳米珠，向残渣中加入200 µL的1%酪蛋白溶液。

将试管盖上盖子后浸入运行中的超声水浴中，直至残留物完全分散。将混合物在室温下孵育两小时，并持续旋转。向混合物中加入100微升防腐溶液，于4摄氏度保存以供后续使用。

首先，制备检测线和质控线的包被溶液。用磷酸盐缓冲液稀释C反应蛋白捕获抗体和羊抗兔免疫球蛋白G。接着，将聚氯乙烯板正确放置，并揭去距板边缘25毫米处的保护纸。

将硝酸纤维素膜沿剩余保护纸的下边缘对齐并粘附于聚氯乙烯板上。将检测线和质控线包被液分别点加到硝酸纤维素膜上，确保其距离上边缘20毫米处，形成检测线。干燥时，将硝酸纤维素膜置于湿度低于30%、温度为18至26摄氏度的条件下。

为制备结合垫，将结合垫浸入结合垫处理液中。然后将浸透的结合垫置于干燥烘箱中过夜干燥。用保存液稀释制备好的量子点纳米微球抗体结合物溶液，并将其滴加到结合垫上。

样品垫制备时，将样品垫浸入样品垫处理液中。随后将浸透的样品垫置于45摄氏度的干燥烘箱中干燥24小时。接着，将吸水纸、结合物垫和样品垫依次放置在带有硝酸纤维素膜的聚氯乙烯板上。

取10微升血浆样本或校准液，加入到含有0.1% Tween 20的1毫升PBS缓冲液中。然后将100微升稀释后的样本转移至试纸条的加样垫上。反应15分钟后，在紫外光照射下观察检测线和质控线的荧光信号，以获得定性结果。

将试纸条插入荧光侧向流动分析仪中，以获取荧光强度进行定量分析。