Name: 68个 Ga-labeled Nano 分子的放射性合成、质量控制和小动物正电子发射断层扫描成像 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 55 s
Description: 学习放射性合成⁶⁸Ga标记纳米抗体NM-02的方法，用于小动物PET/CT成像及癌症诊疗研究。该技术通过质量控制验证，为临床核医学应用提供新工具。

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作者感谢 Susanne Allekotte 提供的技术支持。

Radiosynthesis and PET/CT Imaging of 68Ga-Labelled Nanobody in Xenograft Models

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FMM 是 NanoMab Technology Ltd. 和 Advanced Accelerator Applications (AAA) GmbH 的医学顾问。他近期获得了来自 NanoMab Technology Ltd.、西门子（Siemens）和 GE Precision Healthcare LLC 的机构资助。此外，他与 CURIUM 签有介入性研究合同。

放射性合成 
此处描述的放射性合成是新型68Ga标记化合物的典型方法——合成时间短，重点在于合适的pH值，并尽可能避免金属污染。为此，必须严格遵守各组分的添加顺序。首先，必须使用3 M NH4OAc将68Ga溶液的pH值调节至pH 4；否则，若pH值过低，纳米抗体可能发生降解。有关68Ga合成的一般原理此前已有报道16，因此本文不再详述。自动化合成模块仍需进一步优化以降低辐射剂量，但这需要大量工作，超出了本文所述典型临床前探索性研究的范围。此外，自动化合成难以实现当前方法所能达到的小体积产物（&#60; 1 mL），而小体积有利于获得更高浓度的68Ga和更高的比活度。
仍需详细进行质量控制并详细记录。对此详细程度的一个例外是pH值：虽然临床合成中的pH值测量通常使用pH计非常精确地进行，但此处使用简单的pH试纸测量即可，因为静脉注射的要求允许这样做（pH值在6至8之间均可接受14）。这种简单的方法可降低费用，并减少设备被放射性物质污染的风险。
动物模型的制剂 
示踪剂的最终制剂是示踪剂一个至关重要的方面，但在临床前研究中这一方面往往描述得不够充分。尽管对于用于人体试验的药物（包括放射性药物）已有明确的法规要求，但在临床前阶段，仅有若干指南17,18，且这些指南并未具体讨论溶剂或制剂形式。这些指南常被用于起草或评估需经（动物）伦理委员会批准的法定实验方案（在德国为：LANUV19），但这些文件对制剂重要性的强调仍显不足。不良的制剂可能导致错误的（阴性）结果，但考虑到目前仍然存在的发表偏倚问题，尤其是在肿瘤学领域20，这一观点难以得到验证。
除了遵循ARRIVE指南外，我们还尽可能参照适用于人体的法规，因为适用于人体的制剂通常也适用于啮齿类动物。主要区别在于受试对象的体型，因此可安全注射的体积也不同。为此，我们尽可能采用分子量截断（MWCO）滤器来纯化化合物，因为这类滤器已被证明对纯化大分子化合物有效21。该方法可使典型的68Ga标记示踪剂最终溶解于合适溶液中，并达到适用于小鼠的较小体积（通常最大静脉注射体积为100 - 150 µL）。
在德国，GV-SOLAS（Gesellschaft für Versuchstierkunde，英文：实验动物协会）在动物保护与科研之间发挥着桥梁作用，使人类和动物均从中受益。因此，该协会针对动物实验的多个方面制定了建议，特别是在肿瘤学和麻醉领域，以在全国范围内标准化动物护理14。此后，大多数主管机构和国家伦理委员会均要求动物实验方案必须遵守这些建议。GV-SOLAS 对大多数给药途径的最大容积提出了建议：静脉注射推荐的最大剂量为每公斤体重5 mL；对于一只25 g的小鼠，相当于150 µL。因此，所有放射性示踪剂的制备均以每只动物最大注射体积150 µL为标准。静脉注射时若超过此阈值，会因血容量过多而增加急性心功能不全的风险。反复静脉注射超过该阈值，则会增加肺纤维化的风险，因为每次注射根据流速不同，均可能引起轻微的肺水肿。本文所述小鼠静脉注射剂量换算成人体等效剂量，相当于在10秒内以推注方式向一名75 kg的成年人静脉注射总计375 mL液体。在标准临床护理中，500 mL的0.9% NaCl溶液通常在1小时内输注完毕；这意味着为避免任何并发症，375 mL应于45分钟内输注完成。
GV-SOLAS 建议，肿瘤负荷不应超过 5%；如果动物正在接受治疗，负荷可延长至 10%22。&#160;治疗组与未治疗组之间的这一差异可能导致研究偏倚，尤其是在生存分析中，接受治疗的荷瘤小鼠可能达到比对照组更高的肿瘤负荷。为避免此类情况，可将治疗组动物的肿瘤负荷也固定为 5%；然而，这可能导致在动物尚未达到所谓人道终点前就实施安乐死的伦理困境；或者（更优方案）应论证将对照组的上限提高至 10% 在伦理上是合理的，以避免产生偏倚。
由于需要以非侵入性方式每天计算肿瘤负荷，我们应用一个校正因子（即0.82），将每日计算的肿瘤体积转换为肿瘤重量。该因子是通过在动物按照实验方案处死前使用数显卡尺测量肿瘤直径，随后用天平测量实际肿瘤重量而计算得出的。此校正因子不同于肿瘤组织的密度，因为所测量的肿瘤体积还包括皮肤部分。因此，该因子可能&#60;1.0，因为所测得的肿瘤体积大于实际肿瘤体积。由于我们称重的肿瘤相对较大（测量是在实验最后一天进行的），该因子确实会高估小肿瘤的重量。此因子仅可用于肿瘤负荷的评估。
GV-SOLAS 建议的另一个方面是，对于小鼠，将固定的肿瘤直径 15 mm 设为仁慈终点17。通常情况下，如果在含有肿瘤细胞的溶液注射后未注入空气或栓塞物，肿瘤倾向于沿皮下注射所形成的针道快速生长。因此，某些给药途径会更快达到 15 mm 的标准。鉴于经验表明，部分肿瘤呈椭圆形生长，我们采用并使用了上述肿瘤体积计算公式，以在不同给药途径之间进行无偏倚的比较。
我们所使用的动物模型遵循ARRIVE17和PREPARE18指南设计，便于实验的重复。由于不同小鼠之间的肿瘤生长速率&#160;存在差异，该模型在一定程度上具有变异性，使得标准化和结果解读更为困难。然而，这些变异反映了癌症患者中存在的肿瘤内和肿瘤间异质性23。
该方案并非没有局限性。动物在注射过程中必须保持镇静，尤其是在进行PET/CT扫描时。镇静（特别是使用异氟烷）会影响血流，且动物可能出现低体温，因此需要使用加热垫并监测镇静深度&#160;。这一问题可通过扫描清醒动物来避免；然而，这需要专门的内部软件和专业技术，而这些条件通常难以具备。
另一个局限性是辐射剂量。尽管单次扫描时动物所接受的剂量可忽略不计，但进行多次扫描（尤其是超过10次）可能导致累积剂量显著增加，从而可能影响肿瘤生长。当肿瘤生长作为观测指标时，必须确保所有动物接受相同次数的扫描和相同的辐射剂量，以保证组间可比性，这会增加整个项目的负担。使用PET/MRI系统替代PET/CT系统可减少辐射暴露。然而，这种方法需要更长的扫描时间，增加成本，并且获取解剖信息的方式也有所不同。
通过遵循德国GV-SOLAS等福利组织的建议，并依据ARRIVE和PREPARE等既定指南，我们致力于标准化动物模型并尽量减少实验方案中的变异性。这些努力对于确保临床前研究的可靠性和可重复性至关重要，最终有助于将有前景的放射性药物从实验室顺利转化至临床应用。

一个极为重要的研究领域是乳腺癌研究。乳腺癌仍是一种高发癌症，约占所有癌症病例的1/3rd 女性所有癌症中的。治疗方案需根据肿瘤的生物学和组织学特征以及疾病分期进行个体化制定。若肿瘤尚未转移，预后通常较好；一旦发生转移，5年生存率仅为约30%。1其他妇科恶性肿瘤也面临类似情况，例如卵巢癌就表现出 &#62; 1期肿瘤的5年生存率为95%，而转移性4期肿瘤仅为15%2,3.
非侵入性成像技术，特别是正电子发射断层扫描（PET），正在深刻改变癌症研究，因为它能够以前所未有的方式揭示肿瘤的分子特征，例如代谢活动、受体表达以及对治疗的反应4,5,6。PET不仅能够可视化特定的代谢区域，还能对其进行定量分析，从而不仅有助于精确诊断，还可以在极短的时间内监测（新）疗法的效果。事实上，PET能够在1至3个治疗周期后即可评估治疗是否有反应，相较于传统的计算机断层扫描（CT）所观察到的形态学变化，其评估更为准确和迅速7。PET的非侵入性特点还使其适用于纵向研究。
为了充分评估新型（放射性）药物的治疗潜力，任何动物模型都需要最大程度的标准化，因此必须重视这一问题——无论是在肿瘤模型的建立过程中，还是在小动物PET成像及数据分析中。关于动物体内最佳肿瘤模型的选择（皮下接种或原位移植，使用小鼠、人源或同源性肿瘤，是否伴随常规临床护理）可能存在争议，但这超出了本出版物的目标范围。我们目前在癌症研究中采用多种模型，而本文所描述的是一种相对简单的皮下肿瘤模型。
放射化学中的质量控制对于动物安全和治疗效果至关重要。这不仅涉及放射性药物本身，还包括产品的配方。针对临床应用放射性药物的生产，已有大量法规要求8,9（详见&#160;10中对现行法规和指南的全面概述），同时也有若干关于临床前研究用放射性药物特性的指导原则（详见11中的全面概述）。我们同时为临床和临床前应用生产放射性药物，从而可将临床级合成中所采用的高标准质量控制简化并应用于临床前研究中。
我们的研究重点是靶向诊疗，特别是针对人表皮生长因子受体2（HER2）阳性癌症。因此，我们开发新型放射性药物，用于癌症的诊断以及治疗过程中的监测。成功的诊断用放射性药物还将通过使用不同的放射性同位素被评估为治疗性化合物。这些放射性药物首先在动物模型中进行评估，在获得有希望的临床前结果后，致力于实现临床转化。本文将以一种放射性药物为例，介绍我们在质量控制与保障、小鼠静脉注射标准操作以及PET/CT扫描方面的实验方案，以提高分子影像学临床前研究的准确性和可靠性。该实验方案分为三个部分：放射化学（示踪剂合成与质量控制）、动物模型构建（皮下肿瘤模型）和影像学检测。

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;仪器&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>活动度检测仪 ISOMED 2010</td><td>Nuviatech Healthcare&amp;nbsp;</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>离心机 MIKRO 185</td><td>Andreas Hettich GmbH &amp; Co. KG</td><td>1203</td><td></td></tr><tr><td>内毒素检测仪 Endosafe nexgen-PTS</td><td>Charles River</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>加热块 NANOCOLOR VARIO C2</td><td>Macherey-Nagel</td><td>919350</td><td></td></tr><tr><td>高效液相色谱系统（含放射性检测器）</td><td>Knauer & Raytest</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>图像分析软件 Pmod 4.4&amp;nbsp;</td><td>PMOD Technologies LLC</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>小动物PET/CT系统 &amp;beta;-CUBE 和 X-CUBE</td><td>Molecubes NV</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>TLC MiniGITA*</td><td>Elysia-Raytest</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;材料&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>直径0.3 mm的PE10管</td><td>fisher scientific</td><td>22-204008</td><td></td></tr><tr><td>30G针头</td><td>B|Braun</td><td>4656300</td><td></td></tr><tr><td>离心过滤器；截留分子量10 kDa，0.5 mL</td><td>Millipore</td><td>UFC501008</td><td></td></tr><tr><td>色谱纸条 iTLC-SG</td><td>Agilent Technologies</td><td>SGI0001</td><td></td></tr><tr><td>内毒素检测 cartridge，灵敏度0.05 EU/mL&amp;nbsp;</td><td>Charles River</td><td>PTS-2005</td><td></td></tr><tr><td>HPLC色谱柱 Biosep SEC-s2000</td><td>Phenomenex</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>微量离心管（1.5 mL）</td><td>Eppendorf</td><td>0030125150</td><td></td></tr><tr><td>pH试纸 0.0 - 6.0</td><td>Merck KGaA</td><td>109531</td><td></td></tr><tr><td>pH试纸 0-14</td><td>Merck KGaA</td><td>109535</td><td></td></tr><tr><td>PS-H&lt;sup&gt;+&lt;/sup&gt;固相萃取 cartridge</td><td>Macherey Nagel GmbH &amp; Co. KG</td><td>731861</td><td></td></tr><tr><td>无菌西林瓶 10 mL</td><td>ALK Life Science Solutions</td><td>SEV100</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;试剂&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;sup&gt;68&lt;/sup&gt;Ge/&lt;sup&gt;68&lt;/sup&gt;Ga-发生器</td><td>NRF-iThembaLABS</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>乙酸铵</td><td>Merck KGaA</td><td>101116</td><td></td></tr><tr><td>柠檬酸</td><td>Merck KGaA</td><td>100241</td><td></td></tr><tr><td>盐酸</td><td>Merck KGaA</td><td>320331</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merck KGaA</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>纳米抗体 NM-02</td><td>Radiopharm Theranostics</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>P-SCN-Bz-DOTA-GA</td><td>CheMatech</td><td>C115</td><td></td></tr><tr><td>三氟乙酸</td><td>Merck KGaA</td><td>T6508</td><td></td></tr><tr><td>超纯水</td><td>Merck KGaA</td><td>101262</td><td></td></tr></tbody></table>

68ga标记纳米分子的放射性合成、质量控制及小动物正电子发射断层成像

Radiosynthesis, Quality Control, and Small Animal Positron Emission Tomography Imaging of 68Ga-Labelled Nano Molecules

小型动物正电子发射断层扫描（PET）和单光子发射计算机断层扫描（SPECT）成像技术在临床前癌症研究中至关重要，需要对放射性示踪剂的合成、质量控制以及体内注射方案给予细致关注。本研究提出了一套全面的工作流程，旨在提高小型动物PET实验的稳健性和可重复性。文中详细描述了在放射化学实验室中使用68Ga进行示踪剂合成的过程，并强调了每次放射性示踪剂制备过程中严格的质量控制与质量保证规程。浓度、摩尔活性、pH值和纯度等参数均被严格监测，符合适用于人体研究的标准。该方法引入了简化的注射器制备流程，以及一种定制设计的30G套管，用于对小鼠进行精确的静脉注射。在扫描过程中对动物健康状况（包括体温和心率）的监测，确保了实验全程动物的福利。PET和SPECT扫描的剂量预先确定，以在数据采集与尽量减少动物及研究人员的辐射暴露之间取得平衡。同样，CT扫描采用预设程序设置，以限制辐射暴露，这在评估治疗效果的长期研究中尤为重要。通过优化这些步骤，该工作流程旨在标准化操作程序、减少变异，并提升小型动物PET/SPECT/CT成像的质量。本资源为致力于提高分子成像领域临床前研究准确性与可靠性的研究人员提供了有价值的参考，从而推动该领域的发展。

放射性药物质量控制最重要的方面之一是采用高效液相色谱法（HPLC），因为该方法不仅能够显示药物的化学纯度和放射化学纯度（本例中为98.2%），还可通过将洗脱时间及色谱峰形与非放射性参照化合物进行比较，以确认放射性药物的身份。本例中的参照化合物是一种未标记的纳米抗体，其结构已通过质谱或核磁共振等经典技术验证为正确的化合物。这些技术无法直接应用于放射性化合物（因其质量过低，无法产生可检测信号），但通过将放射性化合物与其参照物进行比较，可以获得充分证据，证明目标化合物确实已被成功标记，并且在合成过程中未发生结构改变。请注意图1中放射性产物与参照物之间保留时间的微小差异，这是由于HPLC流路中检测顺序所致（紫外信号首先被检测，流份随后需要约0.2分钟才能到达放射性检测器，这在典型装置中是常见情况）。
<img alt="色谱结果示意图；通过高效液相色谱分离肽；280 nm 紫外检测；CPS 数据。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图 1"> 
图 1：68Ga 标记纳米抗体 NM-02（GLNM-02）质量控制的典型分析型高效液相色谱图。 冷标化合物的紫外吸收（即上图）在 280 nm 处测定，显示在 4.18 min 处出现峰，偏移 0.22 min。在伽马检测器（即下图）中可观察到 68Ga 标记产物的峰。放射化学产率为 98.2%。mAU = 毫吸收单位，NM-02 = 我们的产品，UV = 紫外光通道，nm = 纳米，min = 分钟，CPS = 每秒计数，GLMN-02 = 68Ga 标记纳米抗体 NM-02，68Ga-DOTA-GA = [68Ga]Ga-DOTA-GA，γ ChA = 伽马通道。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig01large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
在缺乏高效液相色谱（HPLC）或作为其补充的情况下，薄层色谱（TLC）可用于测定最终产物的标记产率和纯度（但无法确定其结构，且详细程度不及HPLC）。由于操作简便，TLC在放射性合成路径尚处于优化阶段时尤为适用。图2展示了68Ga标记纳米抗体NM-02的薄层色谱图（表观放射化学纯度为99.9%）。
<img alt="色谱图、薄层色谱结果、浓度与迁移距离关系、峰分析、溶剂前沿可视化。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图 2"> 
图 2：68Ga标记纳米抗体NM-02（GLNM-02）质量控制的典型分析型薄层色谱图。 图中显示了放射计数（Area counts）随溶剂（柠檬酸盐）在薄层板上迁移距离的变化情况。Rf 值为 0.2，放射化学纯度为 99.9%。C = 计数，mm = 毫米，GLNM-02 = 68Ga标记纳米抗体NM-02，TLC = 薄层色谱法。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig02large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
在准备用于发表的成像数据时，通常需要展示至少一幅独立的CT和PET图像。这种方法能够对示踪剂的生物分布进行全面评估。标准的CT灰度范围在-1000 HU至1000 HU之间，可在单个窗宽下实现所有软组织的可视化。如图3A所示，该方法不仅能清晰显示小鼠肾脏，还可同时用于骨骼评估。
对于PET图像标尺，将下限阈值设为SUV 0.0，同时保持上限阈值不低于1.0（图3B），建议在计算SUV时采用基于体重的归一化方法（即SUVbw）。此外，在定量分析中，优先使用SUVmean而非SUVmax；若使用SUVmax，则应取SUVbw计算中最热的10个体素的平均值，而非单个体素的最大值。通过融合CT和PET层面图像，生成PET/CT的特征融合图像（图3C）。
为了进一步帮助读者独立评估全身示踪剂的生物分布，可使用与PET切片相同的标度来展示同一PET扫描的最大强度投影（图3D）。
<img alt="CT、PET、PET/CT 成像对比示意图；揭示研究中的解剖与功能数据。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图 3"> 
图 3：皮下荷 SKOV-3 肿瘤小鼠的 体内 PET/CT 图像。 图像为静脉注射 5 MBq 68Ga 标记的纳米抗体 NM-02（GLNM-02）后 3 小时采集所得。（A）CT 图像的灰度范围为 -1000 HU 至 1000 HU，而（B）PET 图像的标准化摄取值（SUV）范围为 0.0 至 5.0。（C）PET/CT 融合图像采用相同的标度。（D）最大强度投影（MIP）PET 图像同样使用 SUV 0.0 至 5.0 的标度。所有 PET 图像均显示 GLNM-02 在肿瘤部位有良好的摄取，且肾脏清除清晰可见。CT = 计算机断层扫描，PET = 正电子发射断层扫描，MIP = 最大强度投影，HU = Hounsfield 单位，SUV = 标准化摄取值。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig03large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的高清版本。</a>
对于68Ga标记的纳米抗体NM-02而言，在小鼠左侧 flank 可观察到显著的肿瘤摄取。此外，示踪剂的肾清除也十分明显。通过展示PET最大强度投影图像，可清晰看到膀胱内的放射性信号，进一步印证了示踪剂经肾脏排泄的特征。特别需要指出的是，在该实例中，肾脏、肿瘤和膀胱无法在同一个二维切片中同时显示。在发表的研究中若包含最大强度投影图像，则可在同一幅图像中完整呈现示踪剂的全身分布情况。

本文描述了一种新型放射性标记探针（即68Ga标记的纳米抗体NM-02）的放射性合成、制剂制备、质量控制，及其在异种移植模型中小动物PET/CT成像中的应用。

68Ga标记纳米分子的放射性合成、质量控制及小动物正电子发射断层成像

小型动物正电子发射断层扫描（PET）和单光子发射计算机断层扫描（SPECT）成像技术在临床前研究中至关重要……

我们的研究聚焦于放射性药物学，旨在为动物和人类开发新型放射性药物。最终目标是可视化特定疾病的某些方面，在本案例中为癌症，从而助力临床治疗。目前，我们的研究已不仅局限于成像领域。相反，我们开发诊疗一体化化合物，这类化合物只需更换示踪剂中所含的放射性同位素，即可同时用于成像和治疗。核医学领域使用的主要技术是正电子发射断层扫描（简称 PET），该技术既可用于小型实验动物，也可用于临床实践。利用 PET，我们能够量化并定位放射性示踪剂在体内的聚集情况，从而进一步评估新型示踪剂在小型实验动物疾病模型中的表现，判断其是否适用于临床。主要的实验挑战在于拥有一种适合静脉注射的放射性药物。此外，动物模型也存在挑战。一方面，我们需要一种能够模拟人类情况的动物模型。另一方面，我们需要一种可重复且可预测的动物模型，而要实现这两者的结合十分困难。未来，我们的实验室将继续致力于乳腺癌的无创成像与治疗研究。尽管近年来肿瘤学领域已取得多项进展，但乳腺癌的发病率和死亡率仍然很高。当此类癌症发生转移时，情况尤其复杂。我们希望利用无创分子成像技术，提高对这些患者的诊断水平；同时结合放射治疗，提高患者的生存率。首先，在微离心管中使用活度计，并设置正确的参数，测量放射性标记的纳米抗体-螯合剂偶联物样品的放射性活度。取10至15微升样品点在pH试纸上以测定pH值。取1微升放射性标记反应混合物点在浸渍硅胶的薄层色谱条上，静置干燥1分钟。用柠檬酸作为流动相填充薄层色谱展开槽，展开色谱条直至液体前沿到达色谱条顶端。将薄层色谱条置于放射性薄层扫描仪上，并根据制造商的方案进行测量。使用放射色谱图计算反应的放射标记产率：将RF处色谱峰曲线下的积分面积除以曲线总面积，再乘以100。用正确的溶剂冲洗HPLC管路10分钟后，设置检测条件，采用等度洗脱模式，其中溶剂A为50%乙腈，溶剂B为0.9%氯化钠溶液与三氟乙酸和柠檬酸溶液的混合液，两者的比例为50:50。在280纳米处测定紫外吸收值。取5微升产物，用15微升0.9%氯化钠溶液稀释。取15微升稀释后的混合液注入分析型放射性高效液相色谱仪（radio HPLC）。采用先前所述的设置，检测产物在280纳米处的放射性信号和紫外吸收值。紫外通道与伽马通道之间保留时间的微小偏移是由于高效液相色谱仪的设计所致。接下来，通过积分伽马通道中的峰来确定放射化学纯度。对伽马通道中所有其他峰进行积分，并将其评估为杂质。使用经认证的无内毒素水，将产品稀释至一比二十，终体积为 150 微升。将市售预装有所有必要试剂的一次性内毒素检测 cartridge 插入内毒素检测仪中。向每个 cartridge 的反应腔内加入 25 微升稀释后的产品。检测运行15分钟后，PTS包含内部阳性和阴性对照。若产品在最大体积为20毫升时，每毫升内毒素含量低于8.7内毒素单位，则判定为无内毒素。高效液相色谱（HPLC）分析证实放射性药物的化学纯度和放射化学纯度为98.2%，且放射性产物与非放射性参比化合物的保留时间之间仅有微小差异。薄层色谱图显示，68-镓标记的纳米抗体NM02的表观放射化学纯度为99.9%。首先根据给药途径，用放射性示踪剂填充注射器。使用活度计测量示踪剂的放射性活度。制备30号导管时，可通过使用金属剪刀剪断或将其弯离塑料部分的方式，从30号针头中移除金属针芯。手动将一段直径为0.3毫米的PE-10管插入已从接头端移除的针芯部分。用0.9%氯化钠缓冲液填充30号导管。将麻醉小鼠的眼睛涂抹眼膏，以防止在镇静期间眼睛干燥。选择尾部静脉后，轻轻旋转尾巴，使所选静脉与加热垫接触，并使其扩张一分钟。然后将小鼠转为侧卧位，使所选静脉朝上。用胶带固定尾尖和尾根部。用优势手持30号导管，非优势手的食指轻轻按压所选静脉处，使血液在静脉内积聚，形成一个小隆起。用优势手将30号导管平行于尾部，朝向静脉上的隆起处放置。将惯用手向前移动，以确保直接进行静脉穿刺。进入静脉后，可在塑料管内观察到血液回流。固定塑料管，以确保注射过程中针头在静脉内不移动。在管路的自由端，插入连接30号针头的示踪剂注射器。缓慢注入示踪剂注射器中的内容物，持续10秒。保持30号针头与导管系统连接的同时，仅取下示踪剂注射器，并连接含有0.9%氯化钠缓冲液的注射器以冲洗导管。从尾静脉中移除30号导管，并使用无菌棉球压迫止血。使用活度计测量30号导管、缓冲液注射器、空示踪剂注射器以及棉球的放射性活度，计算剩余活度。将麻醉后的小鼠置于动物床的腹侧卧位，并固定于PET扫描仪上。确保小鼠在扫描期间的呼吸频率保持在每分钟50至75次之间。使用医用胶带将小鼠颈部后方固定在动物床台上。将采集时间设置为45分钟，并选择扫描的兴趣区域。输入注射的放射性活度及注射时间。然后选择 68-镓作为研究用同位素并开始扫描。CT 图像清晰地勾画出小鼠肾脏，并可用于骨骼评估。采用0.0至5.0标准化摄取值标尺的PET图像显示，小鼠左侧 flank 区域有明显的肿瘤摄取，且示踪剂经肾脏清除。PET-CT融合图像可对示踪剂的生物分布进行全面评估。PET最大强度投影图像显示出膀胱内的放射性活性，进一步证实示踪剂通过肾脏清除。

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