Name: 逍遥丸治疗小鼠绝经后骨质疏松症的抗炎作用研究 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 20 s
Description: 了解逍遥丸治疗小鼠绝经后骨质疏松症的抗炎作用机制。本研究结合传统中医药与现代药理学方法，通过组织学分析和免疫组化技术评估骨密度及关键生物标志物变化。

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本研究得到百色市科学研究与技术发展计划项目（20224128）的资助。作者感谢伦敦帝国理工学院的Dev Sooranna博士和YMUN对稿件的编辑。YYX和ZYW对本研究贡献相同。

Therapeutic Effects of Xiaoyao Pills on Postmenopausal Osteoporosis in Mice

作者声明不存在利益冲突。

据统计，骨质疏松症每年在美国导致150万例骨折，其中绝大多数发生在绝经后女性27。随着人口老龄化加剧，预计全球未来大部分髋部骨折将发生在亚洲，到2050年，全球髋部骨折总数将达到820万例28。预防骨折的成本几乎与治疗成本相当，而药物治疗不可避免地会带来一些副作用29。因此，在一个负责任的社会中，迫切需要一种更具成本效益的方法来应对这一问题。
逍遥丸由八种成分组成。目前针对其成分对骨质疏松症作用的研究仍在进行中。 Poria cocos 在卵巢切除诱导的骨质疏松小鼠模型中抑制破骨细胞生成及溶骨活性30甘草与熟地黄两种成分的组合可能通过抑制NF-κB信号通路发挥抗氧化作用31传统的中草药滋补品， 当归补血汤，可能通过抑制骨转换并调节下丘脑-垂体-性腺（HPG）轴功能，从而在卵巢切除大鼠模型中预防骨丢失，因此在骨质...

世界卫生组织（WHO）将骨质疏松症（OP）定义为一种以骨量减少和骨组织微结构退化为特征的疾病，导致骨脆性增加，从而提高骨折风险1。骨质疏松症的临床意义在于其可能导致骨折，而骨折与高死亡率、高发病率以及高昂的经济负担相关2。绝经后骨质疏松症（PMOP）是由于女性绝经后雌激素水平下降，导致破骨细胞活性增强，进而引起骨量丢失和骨微结构破坏，常引发严重影响健康的骨质疏松3。目前针对PMOP的治疗包括雌激素替代疗法、双膦酸盐类药物和甲状旁腺激素，但这些疗法可能产生不同程度的不良反应，长期依从性不足，且治疗成本较高4。因此，价格合理的草药治疗对大部分人群而言是一种可行的替代方案。
逍遥丸被收录于《中国药典》5，其由八味中药组成，包括柴胡、Angelica sinensis、White paeonia lactiflora、Atractylodes macrocephala、Poria cocos、Menthae Herba、甘草和生姜。这些药材均具有保肝解毒、健脾益气、养血调经的功效，该复方亦曾用于抑郁症的治疗6。然而，逍遥丸在骨质疏松症中的作用尚不明确。
早期研究表明，炎症可导致骨质流失7，且这一过程相关的骨密度下降可能在绝经后进一步加剧。此外，骨质疏松症的发生与炎症之间存在密切关联。炎症因子白细胞介素-17（IL-17）是由Th17细胞（一种CD4+ T淋巴细胞亚群）分泌的促炎因子。这类细胞与多种慢性炎症性疾病相关，并在类风湿关节炎中骨破坏的发生过程中发挥重要作用8。此外，IL-17可刺激核因子-κB配体受体激活剂（RANKL）的表达，从而调控破骨细胞生成，导致骨吸收超过骨形成9。IL-17还可促进其他促破骨细胞生成的细胞因子（如TNFα、IL-1、IL-6和IL-8）的表达。它能够与其他炎症因子产生协同作用，因而是一种重要的炎症效应因子10。
研究还表明，逍遥丸与炎症之间存在&#160;关联。Shi 等人11和 Fang 等人12最近分别证实，逍遥丸可降低 IL-6 和 TNF-α 的水平。在另一项关于代谢相关性脂肪性肝炎的研究中，报道指出逍遥丸可上调丙酸的表达，进而抑制 TNF-α 的表达，发挥抗炎作用13。然而，目前尚不清楚逍遥丸是否能够通过 IL-17 介导的炎症反应来调控 PMOM 的发展，这正是本研究的目的。
本研究通过网络药理学和生物信息学分析，预测了逍遥丸作用靶点与骨质疏松相关基因的交集，并对交集基因进行蛋白质相互作用、GO和KEGG分析。基于预测结果，可观察白细胞介素-17（IL-17）信号通路中的关键蛋白Act1和IL-6的表达14,15，以及骨转换标志物碱性磷酸酶（ALP）和Ⅰ型胶原（COL-1）的表达，以评估逍遥丸在PMOM小鼠模型中的治疗效果。

<table><tbody><tr><td>1ml 取样器</td><td>广西北仑河医药工业集团有限公司</td><td>JYQ001</td><td>用于小鼠麻醉</td></tr><tr><td>4%多聚甲醛</td><td>北京索莱宝科学技术 &amp;amp; 技术有限公司</td><td>P1110</td><td>用于组织固定</td></tr><tr><td>6-0 可吸收缝线（带角针）</td><td>上海浦东金环医疗用品有限公司</td><td>HZX-06</td><td>用于术后缝合</td></tr><tr><td>吸水棉球</td><td>优胜者</td><td>MIANQIU-500g</td><td>用于灭菌和止血</td></tr><tr><td>粘附载玻片</td><td>江苏世泰实验设备有限公司</td><td>188105</td><td>用于组织切片</td></tr><tr><td>阿米妥钠</td><td>Sigma Aldrich（上海）贸易有限公司</td><td>A-020-1ML</td><td>小鼠麻醉</td></tr><tr><td>蓝染液</td><td>北京索莱宝科技有限公司 &amp;amp; 技术有限公司</td><td>G1866</td><td>苏木精分化液作用后细胞核呈蓝色</td></tr><tr><td>C57BL/6 小鼠</td><td>北京维通利华实验动物技术有限公司</td><td>（SCXK 2033-0063）</td><td>用于动物实验</td></tr><tr><td>碳钢手术刀片</td><td>Premier Medical Equipment Co.</td><td>SP239</td><td>小鼠手术</td></tr><tr><td>CIKS/TRAF3IP2 兔多克隆抗体</td><td>BIOSS 抗体</td><td>bs-6202R</td><td>与组织中的 Act1 结合</td></tr><tr><td>科氏苏木精溶液（用于常规染色）</td><td>北京索莱宝科技有限公司 &amp;amp; 技术有限公司</td><td>G1140</td><td>用于石蜡切片染色</td></tr><tr><td>I型胶原多克隆抗体</td><td>Proteintech</td><td>14695-1-AP</td><td>与组织中的 COL-1 结合</td></tr><tr><td>DAB 底物试剂盒，20x</td><td>北京索莱宝科技有限公司 &amp;有限公司</td><td>DA1010</td><td>用于组织显色</td></tr><tr><td>一次性手术单 50*60CM</td><td>南昌徐汇医疗器械有限公司</td><td>SP4529777</td><td>用于小鼠手术</td></tr><tr><td>EDTA 脱钙溶液（pH 7.2）</td><td>北京索莱宝科技有限公司 &amp;amp; 技术有限公司</td><td>E1171-500ml</td><td>用于组织脱钙</td></tr><tr><td>增强型内源性过氧化物酶封闭缓冲液</td><td>碧云天生物技术</td><td>P0100B</td><td>内源性过氧化物酶的封闭</td></tr><tr><td>环保型脱蜡透明液体</td><td>Servicebio</td><td>G1128-1L</td><td>用于脱蜡石蜡切片</td></tr><tr><td>乙醇</td><td>CHRON CHEMICALS</td><td>64-17-5 (CAS)</td><td>石蜡切片脱水步骤</td></tr><tr><td>通用型抗体稀释液</td><td>Epizyme Biotech</td><td>PS119L</td><td>用于抗体稀释</td></tr><tr><td>苏木精分化液</td><td>Servicebio</td><td>G1039-500ML</td><td>用于苏木精染色后分化，并去除组织中过度结合及非特异性吸附的染料</td></tr><tr><td>苏木精-伊红（HE）染色试剂盒</td><td>北京索莱宝科技有限公司 &amp;amp; 技术有限公司</td><td>G1120-3*100ml</td><td>用于组织染色</td></tr><tr><td>高品质不锈钢手术刀柄</td><td>Premier Medical Equipment Co.</td><td>SP0088</td><td>用于小鼠手术</td></tr><tr><td>HRP标记的Affinipure山羊抗兔IgG(H+L)</td><td>Proteintech</td><td>SA00001-2</td><td>与一抗结合并放大信号</td></tr><tr><td>IL-17A 多克隆抗体</td><td>Proteintech</td><td>13082-1-AP</td><td>与组织中的 IL-17 结合</td></tr><tr><td>IL-6 多克隆抗体</td><td>Proteintech</td><td>21865-1-AP</td><td>在组织中与 IL-6 结合</td></tr><tr><td>免疫组化笔</td><td>北京中杉金桥生物技术有限公司</td><td>ZLI-9305 (YA0310)</td><td>用于免疫组织化学中绘制圆形</td></tr><tr><td>医用外科缝线 非吸收性（线球）5-0 3.5米</td><td>扬州源立康医疗设备有限公司</td><td>FHX-5-2</td><td>用于术后缝合</td></tr><tr><td>医用缝合针 角针 4*10 3/8</td><td>巢湖宾雄医疗器械有限公司</td><td>FHZ612-4</td><td>用于术后缝合</td></tr><tr><td>中性树胶</td><td>北京索莱宝科技有限公司 &amp;amp; 技术有限公司</td><td>G8590</td><td>作为切片封片剂</td></tr><tr><td>PBS(1X)</td><td>深圳墨宏科技有限公司</td><td>B0015</td><td>用于玻片清洗和部分溶液稀释的缓冲液</td></tr><tr><td>无蛋白快速封闭缓冲液（1X）</td><td>Epizyme Biotech</td><td>PS108P</td><td>避免蛋白质的非特异性结合</td></tr><tr><td>兔抗骨碱性磷酸酶抗体</td><td>BIOSS 抗体</td><td>bs-6292R</td><td>与组织中的碱性磷酸酶结合</td></tr><tr><td>生理盐水</td><td>右江民族医学院附属医院</td><td>LHN500</td><td>通过灌胃法给予动物</td></tr><tr><td>剃须/电动剪刀</td><td>杭州华元宠物用品有限公司</td><td>DTJ-002</td><td>用于小鼠脱毛</td></tr><tr><td>不锈钢医用持针器 14厘米 粗针</td><td>Premier Medical Equipment Co.</td><td>SP784</td><td>用于小鼠手术</td></tr><tr><td>不锈钢眼科镊 10.5 cm 弯型（无钩）</td><td>Zhuoyouyue</td><td>YKNWW-10.5</td><td>用于小鼠手术</td></tr><tr><td>不锈钢眼科剪/外科手术剪 10厘米直头</td><td>Premier Medical Equipment Co.</td><td>ZYJD-10-ZJ</td><td>用于小鼠手术</td></tr><tr><td>不锈钢尖端胃部穿刺针 12 号规格 55 毫米弯头</td><td></td><td>GWJ-12-55W</td><td>用于小鼠灌胃</td></tr><tr><td>Tris-EDTA抗原修复液（50倍浓缩）</td><td>Proteintech</td><td>PR30002</td><td>用于石蜡切片的抗原修复</td></tr><tr><td>木质解剖板 25*16 cm</td><td></td><td>JP16*24</td><td>用于小鼠手术</td></tr><tr><td>逍遥丸</td><td>九芝堂股份有限公司</td><td>YPG-041</td><td>用于动物药物递送</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;其他&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>R 4.3.1</td><td></td><td></td><td>数据处理</td></tr><tr><td>Cytoscape3.9.1</td><td>国家网络生物学资源中心</td><td></td><td>构建中药调控网络</td></tr><tr><td>ImageJ 1.54f</td><td>美国国立卫生研究院</td><td></td><td>免疫组织化学结果的图像处理</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop 24.0.0</td><td>Adobe</td><td></td><td>用于图像合并</td></tr><tr><td>Graphpad Prism 9.5</td><td>GraphPad Software</td><td></td><td>数据的统计分析</td></tr><tr><td>Cellsens Dimension</td><td>OLYMPUS</td><td></td><td>用于切片与拍照</td></tr><tr><td>OLYMPUS BX53</td><td>OLYMPUS</td><td></td><td>用于HE染色和免疫组织化学切片摄影</td></tr></tbody></table>

逍遥丸治疗小鼠绝经后骨质疏松症抗炎作用的研究

Studies on the Anti-Inflammatory Effect of Xiaoyao Pills in The Treatment of Postmenopausal Osteoporosis in Mice

骨质疏松症是一种常见的老年人及绝经后女性代谢性疾病，早期无明显症状。疾病后期患者易发生骨折，严重影响健康和生活质量。随着全球预期寿命的延长，骨质疏松症已成为全球性关注的健康问题。逍遥丸此前曾被 
用于治疗抑郁症。此外，该药物似乎具有类雌激素活性，可影响碱性磷酸酶（ALP，成骨细胞早期特异性标志物）和I型胶原蛋白（COL-1，骨细胞外基质主要成分）的表达。研究评估了逍遥丸对去卵巢小鼠绝经后骨质疏松症（PMOM）的作用。通过中药系统药理学数据库（TCMSP）获取逍遥丸各中药成分的作用靶点信息，并结合GeneCards、OMIM、PharmGkb、TTD、DrugBank等网站的数据，利用Cytoscape和String网络构建中药复方的调控网络，以分析蛋白质相互作用。实验对小鼠进行卵巢切除术，并分别给予高剂量和低剂量逍遥丸治疗，同时设立对照组进行比较。通过骨组织免疫组织化学染色评估小鼠症状。结果表明，逍遥丸可通过IL-17信号通路缓解去卵巢小鼠PMOM的症状。该药物有望成为治疗骨质疏松症的一种新型治疗剂。

逍遥丸的活性成分及其作用靶点 
通过检索TCMSP数据库，并根据口服生物利用度（OB）≥ 30% 和类药性（DL）≥ 0.18 的标准进行筛选，共发现逍遥丸中存在 125 种活性成分。其中，成分 6、4、9、13、2、6、83 和 2 分别来源于白芍Paeonia lactiflora、白术Atractylodes macrocephala、薄荷Menthae herba、柴胡、当归Angelica sinensis、茯苓Poria cocos、甘草和生姜。部分活性成分见表1。此外，从TCMSP数据库中共获得有效活性成分的 879 个作用靶点，经基因ID转换并去除重复值后，共保留 232 个靶点。
中医药-活性成分-交集靶点-疾病网络分析 
通过以“骨质疏松症”为关键词检索多个数据库，获取与该疾病相关的基因。在GeneCards数据库中，根据相关性评分≥1的条件筛选后获得1692个...

绝经后骨质疏松症已成为全球性的公共卫生问题。本研究旨在探讨中药逍遥丸对该病症的治疗作用及相关作用机制。

骨质疏松症是一种常见的代谢性疾病，多发于老年人和绝经后女性，早期无明显症状。在疾病后期……

本研究旨在探讨中成药逍遥丸对绝经后骨质疏松小鼠的治疗作用。本研究拟验证逍遥丸是否具有治疗效果及其具体作用机制。本研究结合传统中医药理论与现代药理学方法，并利用正常属类及经授权的信息资源，对蛋白质剂量效应事件进行搜索与医学分析，以揭示其治疗作用。此外，与单一药理学方法相比，我们的基因组分析方案更为全面，可能为骨质疏松症的治疗提供新的思路。该思路将推动骨质疏松症领域中医药的发展，促进并深化对中医药作用机制及其演变的理解，明确其主要研究思路，并为临床应用提供切实可行的指导和疗效评价依据。开始进行疾病相关基因整合时，将此前保存的来自五个数据库的文本文件与草药名称、成分ID、基因ID以及脚本 disease.dot.R 放置在同一文件夹中。打开 R 代码。将文本文件存储路径复制并粘贴到 R 代码中设置工作目录（set WD）的位置。启动 R 软件。运行修改后的 R 代码并保存。设置基因并命名文件为 disease dot text。打开维恩图网站。在输入部分，将已保存的文本内容复制并粘贴到列表中。使用相应的数据库命名该内容，然后点击提交。在图像下方点击“保存图像为PNG”，并将文本结果保存到同一文件夹中。将所有目标点符号文本文件和疾病文本文件放在同一文件夹中。打开 R 代码，将文本文件存储路径复制并粘贴到 R 代码中设置 WD 的位置。打开 R 软件，运行修改后的 R 代码并保存。设置基因并命名文件为 drug disease dot text。打开维恩图网站。在输入部分，将所有“targets.符号.text”和“disease.text”复制粘贴到列表中，并为文件命名。单击图像下方的“将图像另存为PNG”，并将文本结果保存在同一文件夹中。打开String网站，点击“多蛋白”选项。单击“浏览”并上传药物-疾病关联点文本文件。然后在生物体中选择 Homo sapiens。单击“搜索”，然后单击“继续”。现在点击设置，将最低必需相互作用评分设为最高置信度。在网络显示选项中，勾选隐藏网络中的未连接节点。然后点击更新。调整网络图中的节点，确保无重叠或遮挡。点击“导出”，然后选择“下载为高分辨率位图”，以 PNG 格式获取蛋白质相互作用网络图。下载 TSV 文件以获得简明的表格文本输出。将 PNG 和 TSV 文件保存在统一的文件夹中。首先，取注射逍遥丸后处死的小鼠，制备石蜡块。将石蜡块切成六微米厚的连续切片，并在 70 至 72 摄氏度下烘烤 30 至 60 分钟。将切片转移至脱蜡液中处理8分钟，然后在75%无水乙醇中脱水两次，每次5分钟，再用PBS冲洗5分钟。接着进行EDTA高压修复15分钟。用PBS冲洗后，逐滴加入3%过氧化氢至组织上，孵育10分钟。用 PBS 洗涤组织三次，每次五分钟。使用免疫组化笔在组织周围画一个圆圈。用 PBS 洗涤组织后，在一抗溶液中4°C孵育过

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科研

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生物学

逍遥丸治疗小鼠绝经后骨质疏松症的抗炎作用研究

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逍遥丸治疗小鼠绝经后骨质疏松症抗炎作用的研究

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