Proximity Ligand Assay to Localize Proteins in DNA Damage Sites

Fernanda Luisa Basei; L&#237;via Alves dos Reis Moura; Victor da Cruz Ferreira; Andrey Fabricio Ziem Nascimento; J&#246;rg Kobarg

doi:10.3791/67072

JoVE Journal
Biology

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JoVE Journal Biology

Proximity Ligand Assay to Localize Proteins in DNA Damage Sites

邻位配体检测，用于定位 DNA 损伤位点的蛋白质

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09:39 min

August 2, 2024

DOI: 10.3791/67072-v

Fernanda Luisa Basei¹, Lívia Alves dos Reis Moura¹, Victor da Cruz Ferreira¹, Andrey Fabricio Ziem Nascimento², Jörg Kobarg¹

¹Faculty of Pharmaceutical Sciences,University of Campinas, ²Brazilian Synchrotron Light Laboratory (LNLS) Brazilian Center for Research in Energy and Materials (CNPEM)

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

在这里，我们提出了一种简单快速的方案，用于检测 DNA 损伤位点的蛋白质相互作用。

DNA 损伤反应是一种维持基因组稳定性和完整性的细胞系统。这个过程中的功能障碍会导致多种疾病，例如癌症、与年龄相关的疾病和慢性炎症。我们的目标是确定在此过程中合作的蛋白质，从而确定治疗整合的替代靶点。

为了表征蛋白质参与 DNA 损伤反应的情况，通常使用 H2AX 组蛋白（DNA 损伤的标志物）的磷酸化形式进行免疫荧光研究。此外，可以在 DNA 损伤后进行蛋白质收集测定，例如免疫共沉淀，以确定蛋白质在信号传导中的作用。相互作用研究通常基于免疫沉淀测定，但这些是在体外进行的，不能提供有关相互作用位置的信息。

免疫荧光可以提供有关蛋白质细胞定位的信息，但证明相互作用可能很困难，并且取决于显微镜的分辨率。我们在这里表明，将邻位配体测定与 Gamma-H2AX 染色相结合的简单方案可以对 DNA 损伤背景下蛋白质相互作用的空间和时间表征。此外，我们还提供了一个用户友好的宏用于数据分析。

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