建立小鼠薄型子宫内膜模型

子宫内膜过薄已被广泛认为是导致不孕的关键原因。关于子宫内膜过薄发病机制的研究依赖于动物模型，因此选择合适的模型至关重要。本文中，我们描述了一种在小鼠中建立可靠且可重复的子宫内膜过薄模型的详细实验方案。

该操作具有创伤性，因为需要解剖小鼠并暴露其子宫角以进行操作。操作不当可能导致感染，甚至引起小鼠死亡。因此，在进行实验操作前，确实需要经过仔细的训练并积累相关经验。

我们成功构建了一种植入时间从一分钟到三分钟不等的子宫内膜模型，以模拟临床病例中观察到的不同程度的子宫内膜薄症状。该方法可根据我们研究的具体需求，建立不同损伤程度的模型。本方案所采用的方法具有成本低、适用性强以及实验周期短的优势。

该研究探讨了三种初始方法的病理机制及治疗，与其他技术相比具有优势。首先，将麻醉后的小鼠仰卧置于预热的手术台上，并使用医用胶带固定小鼠的四肢。采用无菌剪刀和镊子，在腹部距离尿道口约一厘米处做一个长约一厘米的切口，深入至腹膜腔。

用无菌镊子轻轻拨开内脏以找到子宫。暴露右侧子宫角，并在靠近宫颈的近端和靠近卵巢的远端分别施加止血钳。使用25号注射器，将约50 µL的95%乙醇注入子宫腔内，针头方向应与子宫角保持平行。

根据需要将注射器保持一到五分钟。然后，从宫腔内抽出乙醇，并用无菌生理盐水冲洗宫腔五次，以清除残留的乙醇。此时，移除止血钳，并将子宫及内脏复位至其原始位置。

使用5/0可吸收外科缝线缝合腹膜，然后缝合表皮。首先，将安乐死后的薄子宫内膜小鼠模型置于解剖台上，用手术剪剪开缝线以暴露子宫。接着，使用手术镊小心取出整个子宫，并将子宫与周围脏器分离。

立即取出两侧子宫角，并将每个子宫角分割成三到四个小段。将子宫组织放入含有1 mL 4%多聚甲醛的1.5 mL离心管中。将经甲醛固定的样品放入组织包埋盒中，并将包埋盒依次转移至不同浓度的乙醇中，随后经二甲苯和石蜡处理。

将熔化的石蜡（加热至 55 摄氏度）注入石蜡模具中。使用预热的镊子迅速将浸透的组织片段从包埋盒转移至石蜡模具内。待组织片段位置调整妥当后，将包埋盒底部置于组织学模具上方。

接下来，将模具直接置于设定为4°C的冷却板上，至少放置20分钟，使石蜡完全凝固。然后，从模具中取出样本，并使用石蜡修整器修去周围多余的蜡。与对照组相比，1分钟、2分钟和3分钟组的子宫内膜厚度及子宫内膜腺体数量均显著减少。

在四分钟和五分钟组中观察到严重的子宫粘连及几乎不可见的子宫腔，且未发现子宫内膜腺体。与对照组相比，随着乙醇灌注时间的延长，子宫内膜纤维化程度增加，表现为一分钟至五分钟组染色过度。