具有天然微生物群的小鼠实验设施的操作与生物安全防护程序：免疫表型分析流程

我们研究营养对免疫系统的影响，尤其关注热量限制和禁食方案的抗衰老和抗炎作用，以及微生物群在这些过程中的作用。野生型小鼠结合了实验室小鼠品系遗传背景明确的特点，以及自由活动小鼠的天然微生物组。

然而，这些野生小鼠的天然微生物组含有病毒、细菌以及寄生虫，因此对动物饲养设施构成了挑战。QUEST负责任研究中心的贡献是提出了“六R”框架，该框架在我们熟知的罗素和伯奇提出的“三R”原则——替代（replacement）、优化（refinement）和减少（reduction）——基础上，增加了另外三个R：稳健性（robustness）、注册（registration）和报告（reporting）。该框架旨在提高临床前研究的可重复性和透明度。

其理念在于，实验结果将更加可靠、可信，并最终可转化为临床应用。在过去四年中，我们建立了具有独立生物安全控制措施的野生型小鼠设施概念。我们希望与研究人员分享我们的专业知识，使他们能够在研究中纳入具有自然微生物组的小鼠。

中风在老年人群中最为常见。免疫系统具有因对抗病原颗粒和与异质性微生物群共存而形成的记忆细胞。因此，在野生型小鼠中建立中风模型是一种更为优化的啮齿类动物模型，能更好地反映患者的实际情况。

更换区域专用裤、绑腿和一次性鞋套后，在风淋室的前室脱下鞋子和袜子。穿上区域专用袜子和全身个人防护装备，包括Tyvek防护服、发网、棉质手套、丁腈手套和口罩。穿着区域专用袜子，通过粘性地面覆盖物进入风淋室。

淋浴时，抬起双臂并原地旋转360度。离开风淋室后，在另一侧换上区域专用鞋。将小鼠从其饲养房间通过密闭的独立通气笼具转移到操作室。

将麻醉后的小鼠俯卧于已消毒的实验台上，捏住其颈部皮肤以压迫颈静脉。用一只手以拇指和食指固定小鼠头部。以45度角将一根新的毛细管插入眼球内眦处瞬膜下方。

将毛细管沿眼眶后部的窦膜进行轴向旋转，直至血液开始流出。使用含有 EDTA 一滴的采血管收集至少 15 微升血液。在拔出毛细管前，先松开对颈部背侧皮肤的抓握，以尽量减少血液渗入组织。

使用干净的纱布垫或棉签止血，确保止血完全。轻轻旋转试管，使血液与EDTA混合，切勿剧烈摇晃，并将血液样本置于冰上保存。完成采血后，更换手套并对所有材料和表面进行消毒。

在位于层流洁净台（LAF）舱前部的进入式层流空气工作台内穿上新的防护服。对样本容器进行消毒，并通过LAF舱玻璃墙上的滑动门取出。将样本容器转移给二号操作人员后，对所有表面进行消毒。

通过LAF舱玻璃墙上的滑动门，从野外界区接收消毒后的样本容器，避免直接接触。随后，将一次性防护服和区域专用鞋留在指定区域内。丢弃发网、橡胶手套和口罩。

立即穿着区域专用袜进入风淋室。在风淋时举起双臂，并原地旋转360度。离开风淋室后，将区域专用袜放入洗衣收集器中。

穿上个人袜子、鞋子和一次性鞋套。将区域专用衣物放入更衣室的洗衣收集箱，并换上日常衣物。