微生物样品的 Bergmeyer 葡萄糖定量

该研究使用细菌和酵母过滤器的定量技术评估微生物样品中的葡萄糖浓度。目的是提高微生物学研究中葡萄糖质量图的准确性。挑战包括准确定量复杂微生物样品中的低葡萄糖浓度，以及区分混合培养物中葡萄糖的微生物来源和环境来源。

研究表明，特定微生物菌株与其葡萄糖消耗率之间存在明显的相关性，揭示了环境因素如何影响代谢途径。我们的实验方案通过提高特异性和灵敏度来增强葡萄糖检测，同时缩短处理时间。以受控方式使用硫酸可最大限度地减少干扰。

未来的研究将侧重于优化工业微生物学应用的葡萄糖检测方法，并研究特定基因在不同环境条件下葡萄糖代谢中的作用。首先，在玻璃烧杯中称取 1.28 克磷酸二氢钾和 0.1304 克磷酸氢钾。加入 70 毫升去离子水，并使用 1 摩尔盐酸或氢氧化钾将 pH 值调节至 5.5。

然后将溶液转移到 100 毫升容量瓶中，并用去离子水将体积调节至 100 毫升。将制备好的溶液存放在 4-8 摄氏度的琥珀色容器中长达三个月。接下来，在 2 毫升离心管中称取 0.01 克邻二苯胺二盐酸盐。

使用 1， 000 微升移液器，加入 1 毫升去离子水溶解化合物，然后缓慢混合溶液。用铝箔包裹离心管以避光，并储存在 20 摄氏度。然后将邻二茴胺二盐酸盐溶液加入 100 毫升容量瓶中取的 10 毫升磷酸盐缓冲液中，并用磷酸盐缓冲液将最终体积调节至 100 毫升。

将溶液转移到琥珀色瓶中后，在 4-8 摄氏度下储存 3-4 个月。现在将一个装有 30 毫升去离子水的 100 毫升容量瓶放入冰浴中。10 分钟后，将 51 毫升 98% 硫酸缓慢倒入培养瓶壁，同时轻轻摇动培养瓶。

稍后，用去离子水将最终体积调整至 100 mL，并将溶液转移到琥珀色玻璃瓶中储存。对于酶制备，在 2 毫升无菌微管中称取 0.01 克葡萄糖氧化酶。向微管中加入 1 毫升 pH 值为 5 的 50 毫摩尔乙酸钠缓冲液，并轻轻混合。

然后在新的 2 毫升微管中，称取 0.0031 克过氧化物酶，并将其溶解在 1 毫升设置为 pH 值为 5.5 的磷酸盐缓冲液中。用铝箔覆盖含有酶的两个微管，并将它们储存在 20 摄氏度。然后使用去离子水制备 1 克/升 D-葡萄糖标准溶液。

首先，准备葡萄糖标准品和测定所需的所有其他溶液。将适量的葡萄糖加入新鲜的 2 毫升试管中。将干燥的恒温浴设置为 37 摄氏度，并使其稳定下来。

向每个微管中加入适当体积的缓冲液，然后加入 3.3 微升葡萄糖氧化酶和 1.2 微升过氧化物酶。在 37 摄氏度下孵育试管，并将计时器设置为 20 分钟。孵育后，立即向每个微管中加入 750 微升 50% 硫酸，并将其置于冰浴中 2 分钟冷却。

将冷却的 1， 500 微升混合物转移到塑料比色皿中，并测量 529 纳米处的吸光度。然后用 70% 酒精溶液清洁工作区域并点燃燃烧器以确保无菌。在液体培养基中获得细菌或酵母。

使用无菌吸头将 100 微升培养物转移到 1.5 毫升微管中。将样品在 7， 500 G 和 4 °C 下离心 7 分钟。离心后，小心去除上清液，其中含有溶液中的葡萄糖。

将 0.5 μL 上清液与所有必需的组分混合，以制备反应混合物。将微管在 37 摄氏度下孵育 20 分钟，并立即加入 750 微升 50% 硫酸。让混合物在冰浴中冷却 2 分钟。

最后，测量 529 纳米处的吸光度。分光光度法分析表明最大吸光度峰为 529 纳米。Debaryomyces hansenii 对葡萄糖消耗量的分析表明葡萄糖氧化酶和 DNS 方法之间的结果一致，直到在 6 、 8 和 12 小时出现显着差异。

葡萄糖氧化酶硫酸法的应用有助于分析高达 100 克/升的高葡萄糖浓度，稀释后获得可靠的结果。