Name: 基于 MultiBac 系统的人肌球蛋白 7a 纯化和生物物理表征 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-23T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: 学习使用MultiBac杆状病毒系统纯化人肌球蛋白7a全酶并进行体外丝滑动实验。该方法有助于研究Myosin-7a的结构功能机制及其在听觉中的作用。

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感谢西弗吉尼亚大学显微成像设施和视觉功能与形态学核心团队在图像分析方面的讨论与帮助。本工作得到西弗吉尼亚大学医学院向R.L.提供的终身教职启动资金支持。本工作还获得美国国立普通医学科学研究所（NIGMS）视觉科学生物医学研究卓越中心（Vs-CoBRE）（P20GM144230）以及NIGMS西弗吉尼亚生物医学研究卓越网络（WV-INBRE）（P20GM103434）的支持。

Recombinant Human Myosin-7a Production and Functional Characterization Protocol

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</ol>

作者声明无利益冲突。

本文介绍了一种利用昆虫细胞生产重组人源肌球蛋白-7a蛋白的详细实验方案。尽管Sf9/杆状病毒系统已被用于生产多种肌球蛋白40,41,42,43，但直到最近才成功利用MultiBac杆状病毒系统纯化出哺乳动物来源的肌球蛋白-7a14。研究表明，哺乳动物肌球蛋白-7a可与三种轻链结合，这三种轻链对其蛋白结构和功能完整性均至关重要14。这与无脊椎动物中的同源蛋白及其他大多数肌球蛋白不同，后者通常仅结合一种或两种类型的轻链44,45。因此，要合成人源肌球蛋白-7a全酶，必须在每个Sf9细胞中同时表达至少四个不同的基因。在此情况下，MultiBac系统相较于多种杆状...

肌球蛋白是一类分子马达蛋白，可与肌动蛋白相互作用，驱动多种细胞过程1,2,3,4。人类拥有12个类别共39个肌球蛋白基因5，参与多种生理功能，如肌肉收缩6和感觉过程7。每个肌球蛋白分子是由重链和轻链组成的多聚复合物。重链可分为头部、颈部和尾部区域。头部含有肌动蛋白和核苷酸结合位点，负责ATP水解并在肌动蛋白丝上产生作用力2。颈部由多个α螺旋IQ基序构成，特定的一组轻链结合于此处。它们共同作为杠杆臂，将马达蛋白的构象变化放大为大幅度的运动8,9,10。尾部包含类别特异性的亚结构域，在调节肌球蛋白马达活性以及介导与细胞内结合伴侣的相互作用方面发挥调控作用2,11。
人类肌球蛋白-7a（myosin-7a）属于肌球蛋白-7类家族，对听觉和视觉过程至关重要12,13。人类肌球蛋白-7a的IQ基序与一组独特的轻链结合，包括调节性轻链（RLC）、钙调蛋白以及钙调蛋白样蛋白4（CALML4）14,15,16。这些轻链除了稳定杠杆臂外，还能响应钙信号调节肌球蛋白-7a的机械特性，这一特征似乎是哺乳动物亚型所特有的14。
编码肌球蛋白-7a重链的基因（MYO7A/USH1B）发生缺陷会导致Usher综合征1型，这是人类最严重的视、听功能联合丧失疾病17。此外，轻链基因CALML4也是被定位到USH1H（Usher综合征1型的另一种亚型）致病等位基因区域的候选基因之一15,18。在视网膜中，肌球蛋白-7a表达于视网膜色素上皮细胞和感光细胞13。研究表明，该蛋白参与视网膜色素上皮（RPE）中黑素体的定位19，以及RPE细胞对感光细胞外节盘的吞噬作用20。在内耳中，肌球蛋白-7a主要存在于静纤毛中，对毛细胞束的形成以及机械-电转导过程的通道门控起关键作用12,21,22。
尽管肌球蛋白-7a在感觉细胞中的重要性已得到充分证实，但其在分子水平上的功能机制仍不清楚。这一知识空白部分是由于难以纯化完整的蛋白质，尤其是哺乳动物同工型。最近，利用MultiBac系统成功实现了对完整人源肌球蛋白-7a全酶的重组表达14。这一进展使得对该马达蛋白进行结构和生物物理表征成为可能，并揭示了人源肌球蛋白-7a特有的多种性质，这些性质特别适应于哺乳动物的听觉功能14,23。
MultiBac 系统是一种先进的杆状病毒/昆虫细胞表达平台，专为真核生物多亚基复合物的表达而设计24,25该系统的一个关键特征是能够在单个多基因杆状病毒（MultiBac baculovirus）中容纳多个基因表达盒，每个表达盒编码复合物的一个亚基。多基因表达盒的组装通过一种称为“倍增模块”（multiplication module）的结构实现：该模块在多克隆位点（MCS）两侧分别包含一个归巢内切酶（HE）位点和一个匹配设计的BstXI位点。该模块通过限制性内切酶切割/连接的方式实现单个表达盒的迭代组装，其原理在于HE和BstXI限制性酶切位点在连接后即被消除。本文中， 人肌球蛋白-7a重链，RLC，钙调蛋白 和 CALML4 分别克隆至 pACEBac1 载体的扩增模块中（图1A），然后通过迭代过程组装成一个多基因表达盒 (图1B)肌球蛋白-7a 多基因盒通过 mini-Tn7 元件从 pACEBac1 载体转座至基因组中的 mini-attTn7 靶位点，整合到杆状病毒基因组（bacmid）中 (图1C). 昆虫细胞杆状病毒系统中杆状病毒DNA纯化、病毒产生及扩增的操作步骤 (图1D，E），可制备重组肌球蛋白-7a MultiBac 杆状病毒，用于大规模蛋白质生产 (图1F)此外，肌球蛋白-7a 的轻链可单独表达 E. coli 并使用可切割的His6-SUMO标签进行纯化26,27,28纯化的轻链可用于研究其与肌球蛋白-7a的结合动力学及调控机制。
纯化的肌球蛋白-7a蛋白可进行结构、生物化学和生物物理研究，以深入了解该马达蛋白的结构与功能调控机制。此外，还可研究其与肌动蛋白网络及其他结合蛋白的相互作用。29 可以采用多种体外重建方法进行研究。这些分析的结果将揭示该肌球蛋白的生物物理特性，从而深入理解肌球蛋白-7a如何驱动细胞骨架的改变，并最终决定感觉细胞独特形态与功能的分子机制。本文详细描述了一种专为哺乳动物肌球蛋白-7a优化的肌动蛋白丝滑动实验工作流程。肌动蛋白丝滑动实验是一种可靠的 体外 一种定量研究由固定在盖玻片表面的大量肌球蛋白马达驱动的荧光肌动蛋白丝运动的运动性分析方法30,31,32该检测方法的优点包括操作简便、设备需求少（仅需配备数字相机的宽场荧光显微镜）以及高度可重复性。此外，由于肌动蛋白丝的运动由固定化的肌球蛋白马达簇驱动，该方法特别适用于研究单体肌球蛋白（如肌球蛋白-7a）的运动特性。14,33这些方案包含多项改进，从实验操作到成像分析，均针对哺乳动物肌球蛋白-7a独特的运动特性进行了专门优化。随着完整肌球蛋白-7a蛋白的可获得性以及本文所述功能表征方案的建立，本研究为深入探究肌球蛋白-7a在生理与病理过程中的分子作用奠定了基础。

<table><tbody><tr><td>1.7 mL 微量离心管</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>1X FLAG 肽</td><td>GenScript</td><td>N/A</td><td>定制多肽合成</td></tr><tr><td>22x22 mm 盖玻片，No. 1.5</td><td>VWR</td><td>48366-227</td><td></td></tr><tr><td>250 mL 锥形离心管</td><td>Nunc</td><td>376814</td><td></td></tr><tr><td>250 mL 通气锥形摇瓶</td><td>IntelixBio</td><td>DBJ-SF250VP</td><td></td></tr><tr><td>2-巯基乙醇</td><td>VWR</td><td>M131</td><td></td></tr><tr><td>75x25x1 毫米 Vistavision 显微镜载玻片</td><td>VWR</td><td>16004-42</td><td></td></tr><tr><td>肌动蛋白&gt;99% 纯度）</td><td>细胞骨架</td><td>AKL99</td><td></td></tr><tr><td>Amicon Ultra-0.5 离心滤过装置</td><td>默克生命科学</td><td>UFC510024</td><td></td></tr><tr><td>Amicon Ultra-4 离心过滤单元</td><td>默克生命科学</td><td>UFC801024</td><td></td></tr><tr><td>ANTI-FLAG M2 亲和凝胶</td><td>Millipore Sigma</td><td>A2220</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>默克生命科学</td><td>A7699</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>Millipore Sigma</td><td>A7699</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Spin 一次性层析柱</td><td>伯乐（Bio-Rad）</td><td>732-6008</td><td></td></tr><tr><td>BL21 感受态大肠杆菌</td><td>New England Biolabs</td><td>C2530H</td><td></td></tr><tr><td>Bluo-Gal</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>15519028</td><td></td></tr><tr><td>牛血清白蛋白</td><td>Millipore Sigma</td><td>5470</td><td></td></tr><tr><td>BstXI 酶</td><td>New England Biolabs</td><td>R0113S</td><td></td></tr><tr><td>钙调蛋白</td><td>Millipore Sigma</td><td>208694</td><td></td></tr><tr><td>过氧化氢酶</td><td>Millipore Sigma</td><td>C40</td><td></td></tr><tr><td>Champion pET-SUMO 表达系统</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>K30001</td><td></td></tr><tr><td>cOmplete，无EDTA蛋白酶抑制剂混合物</td><td>罗氏诊断</td><td>5056489001</td><td></td></tr><tr><td>Cutsmart 缓冲液</td><td>New England Biolabs</td><td>B6004S</td><td></td></tr><tr><td>DL-二硫苏糖醇</td><td>Millipore Sigma</td><td>DO632</td><td></td></tr><tr><td>DL-二硫苏糖醇</td><td>Millipore Sigma</td><td>DO632</td><td></td></tr><tr><td>DNase I，Spectrum Chemical</td><td>Fisher Scientific</td><td>18-610-304</td><td></td></tr><tr><td>双面胶带</td><td>Office Depot</td><td>909955</td><td></td></tr><tr><td>EGTA，分子生物学级</td><td>Millipore Sigma</td><td>324626-25GM</td><td></td></tr><tr><td>EGTA，分子生物学级</td><td>Millipore Sigma</td><td>324626-25GM</td><td></td></tr><tr><td>乙醇</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>BP2818</td><td></td></tr><tr><td>ExpiFectamine Sf 转染试剂</td><td>Gibco</td><td>A38915</td><td></td></tr><tr><td>FAST项目</td><td>http://spudlab.stanford.edu/fast-for-automatic-motility-measurements&amp;nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand&amp;nbsp;Model 505 超声波破碎仪</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB505110</td><td></td></tr><tr><td>庆大霉素试剂溶液</td><td>Gibco</td><td>15710-064</td><td>10 mg/mL，溶于蒸馏水</td></tr><tr><td>葡萄糖</td><td>默克生命科学</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>葡萄糖氧化酶</td><td>Millipore Sigma</td><td>G2133</td><td></td></tr><tr><td>甘油</td><td>Invitrogen</td><td>15514-011</td><td></td></tr><tr><td>HisPur 钴树脂</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>89966</td><td></td></tr><tr><td>I-CeuI 酶</td><td>New England Biolabs</td><td>R0699S</td><td></td></tr><tr><td>图像稳定插件</td><td>https://www.cs.cmu.edu/~kangli/code/Image_Stabilizer.html</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ FIJI</td><td>https://imagej.net/Fiji/Downloads</td><td></td><td></td></tr><tr><td>咪唑</td><td>默克生命科学</td><td>I2399</td><td></td></tr><tr><td>In-Fusion Snap Assembly Master Mix</td><td>TaKaRa</td><td>638948</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>15529019</td><td></td></tr><tr><td>异丙醇</td><td>Fisher Scientific</td><td>A451SK</td><td></td></tr><tr><td>卡那霉素</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAJ67354AD</td><td></td></tr><tr><td>大孔径移液器吸头</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-134</td><td>1-200 μL</td></tr><tr><td>LB 琼脂，即用型粉末</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>J75851-A1</td><td></td></tr><tr><td>亮肽素蛋白酶抑制剂</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>78435</td><td></td></tr><tr><td>氯化镁</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>J61014.=E</td><td>1M</td></tr><tr><td>氯化镁</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>J61014.=E</td><td>1M</td></tr><tr><td>Max Efficiency DH10Bac 感受态细胞</td><td>Gibco</td><td>10361012</td><td></td></tr><tr><td>微量离心管，1.7 mL</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>1.7 mL 微型离心管</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>微量离心管，1.7 mL</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>显微镜</td><td>尼康</td><td>型号：Eclipse Ti 配备 H-TIRF 系统，100X TIRF 物镜</td><td></td></tr><tr><td>显微镜相机</td><td>ORCA-Fusion BT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>显微镜激光单元</td><td>Andor iXon Ultra</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Miller's LB肉汤</td><td>康宁</td><td>46-050-CM</td><td></td></tr><tr><td>MOPS</td><td>默克生命科学</td><td>M3183</td><td></td></tr><tr><td>MOPS</td><td>Millipore Sigma</td><td>M3183</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop One/OneC 微体积紫外-可见光分光光度计</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>ND-ONE-W</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop One/OneC 微量紫外-可见分光光度计</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>ND-ONE-W</td><td></td></tr><tr><td>NEB 5-alpha 感受态大肠杆菌（高效）</td><td>New England Biolabs</td><td>C2987H</td><td></td></tr><tr><td>NEBuffer r3.1</td><td>新英格兰生物实验室</td><td>B6003S</td><td></td></tr><tr><td>NIS Elements</td><td>尼康</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-Elements</td><td>尼康</td><td></td><td></td></tr><tr><td>硝酸纤维素</td><td>LADD Research Industries</td><td>53152</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I 低血清培养基</td><td>Gibco</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>pACEBac1 载体</td><td>日内瓦生物技术公司</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>默克生命科学</td><td>P7793</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>Millipore Sigma</td><td>78830</td><td></td></tr><tr><td>PureLink RNase A（20 mg/mL）</td><td>Invitrogen</td><td>12091021</td><td></td></tr><tr><td>QIAprep Spin Miniprep 试剂盒（250）</td><td>QIAGEN</td><td>27106</td><td></td></tr><tr><td>QIAquick 凝胶回收试剂盒（50）</td><td>QIAGEN</td><td>28704</td><td></td></tr><tr><td>QIAquick PCR 纯化试剂盒（50）</td><td>QIAGEN</td><td>28104</td><td></td></tr><tr><td>快速CIP</td><td>新英格兰生物实验室</td><td>M0525S</td><td></td></tr><tr><td>罗丹明鬼笔环肽</td><td>Invitrogen</td><td>R415</td><td></td></tr><tr><td>S.O.C. 培养基</td><td>Invitrogen</td><td>15544034</td><td></td></tr><tr><td>SENP2 蛋白酶</td><td></td><td>PMID:17591783</td><td>实验室纯化</td></tr><tr><td>Sf9细胞</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>11496015</td><td></td></tr><tr><td>Sf-900 III SFM (1X) - 无血清完全培养基</td><td>Gibco</td><td>12658-027</td><td></td></tr><tr><td>Slide-A-Lyzer G3 透析盒，10K 截留分子量，3 mL</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>A52971</td><td></td></tr><tr><td>氯化钠</td><td>默克生命科学</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>氯化钠</td><td>Millipore Sigma</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Stericup Quick Release 真空驱动一次性过滤系统</td><td>默克生命科学</td><td>S2GPU01RE</td><td></td></tr><tr><td>Superdex 75 Increase 10/300 GL</td><td>Cytiva</td><td>29148721</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA连接酶</td><td>New England Biolabs</td><td>M0202S</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA连接酶缓冲液 - 10X，含10 mM ATP</td><td>新英格兰生物实验室</td><td>B0202A</td><td></td></tr><tr><td>盐酸四环素</td><td>Millipore Sigma</td><td>T7660-5G</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Millipore Sigma</td><td>10708976001</td><td></td></tr><tr><td>Triton X</td><td>American Bioanalytical</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr></tbody></table>

基于multibac系统的入源肌球蛋白-7a的纯化及生物物理表征

MultiBac System-Based Purification and Biophysical Characterization of Human Myosin-7a

肌球蛋白-7a 是一种以肌动蛋白为底物的马达蛋白，在听觉和视觉过程中发挥关键作用。肌球蛋白-7a 的突变会导致 Usher 1 型综合征，这是人类最常见且最严重的聋盲疾病形式。目前认为，肌球蛋白-7a 可与其他 Usher 蛋白形成跨膜黏附复合物，对感光细胞和耳蜗毛细胞的结构与功能完整性至关重要。然而，由于难以获得纯净且完整的蛋白样品，人类肌球蛋白-7a 的确切功能机制仍不明确，相关的结构与生物力学研究十分有限。近期研究表明，哺乳动物的肌球蛋白-7a 是一种多聚体马达复合物，由一条重链和三种轻链组成：调节轻链（RLC）、钙调蛋白以及钙调蛋白样蛋白 4（CALML4）。与钙调蛋白不同，CALML4 不能结合钙离子。这两种对钙离子敏感和不敏感的钙调蛋白对于哺乳动物肌球蛋白-7a 机械特性的精确调控均具有关键作用。本文详细描述了一种利用 MultiBac 杆状病毒蛋白表达系统制备重组人源肌球蛋白-7a 全酶的方法。该方法可获得毫克级高纯度的全长蛋白，从而实现对其生化与生物物理特性的表征。我们进一步提供了一种利用定制化手段评估其机械与运动特性的实验方案 体外 运动性分析和荧光显微镜技术。完整的人源肌球蛋白-7a蛋白及其功能表征的详细实验方案的建立，为深入研究肌球蛋白-7a在视觉和听觉中的分子机制奠定了基础。

纯化的肌球蛋白-7a复合物和轻链蛋白可通过SDS-PAGE凝胶电泳进行分析，如图3所示。位于200 kDa标记上方的条带对应于肌球蛋白-7a重链（255 kDa）。从上到下，在22 kDa与14 kDa标记之间迁移的三条带分别为RLC（20 kDa）、钙调蛋白和CALML4。尽管钙调蛋白与CALML4的分子量相似，均约为17 kDa，但使用16% Tris-甘氨酸凝胶可将这两种蛋白分离。
视频 1 和 图 5 展示了使用哺乳动物肌球蛋白-7a 进行的典型肌动蛋白丝滑动实验。该实验揭示的一个显著特征是肌球蛋白-7a 的运动速度较慢。为更清晰地观察由该肌球蛋白驱动的肌动蛋白丝运动，视频以正常速度的 500 倍回放。该实验可进一步改进，用于研究温度、离子强度和溶液黏度等外部因素对肌球蛋白-7a 活性的影响。此外，可将肌球蛋白-7a 结合蛋白引入流动池，以探究其对肌动蛋白-肌球蛋白相互作用及运动行为的影响。
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本方案详细介绍了利用MultiBac杆状病毒系统重组表达人源肌球蛋白-7a全酶，并通过定制的体外丝状蛋白滑动实验研究其运动特性的操作步骤。

基于MultiBac系统的入源肌球蛋白-7a的纯化及生物物理表征

肌球蛋白-7a 是一种以肌动蛋白为作用底物的马达蛋白，在听觉和视觉过程中发挥关键作用。肌球蛋白-7a 的突变可导致 Usher 综合征 1 型，这是最常见的……

我们正致力于解答为何肌球蛋白分子马达的突变会导致人类疾病，以及这些蛋白质在听觉过程中发挥哪些作用。我们的研究重点是理解Myosin-7a的分子机制，以及它如何与Usher蛋白协同作用，组装并维持听觉所必需的细胞机器。要阐明Myosin-7a的结构与功能机制，需要高质量的完整蛋白，而这一问题长期以来一直是该领域的挑战。近期，我们取得了重要进展，成功纯化了全长的Myosin-7a空心酶，为进一步研究这一重要蛋白质奠定了基础。随着该蛋白的获得，我们现在可以深入探究该分子马达的关键特性，包括其结构、力生成能力及其运动特性。这些研究结果对于理解Myosin-7a在听觉中的作用机制以及导致人类患者耳聋的分子缺陷至关重要。未来，我们的实验室将利用在多组分表达系统方面的专长，重组表达大型生物分子复合物，例如对人类感觉功能至关重要的Usher 1复合物。该方法将使我们能够解析这些复合物的结构，并阐明其在感觉细胞中发挥作用的分子机制。

multibac-system-based-purification-biophysical-characterization-human

Research

科研

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

基于 MultiBac 系统的人肌球蛋白 7a 纯化和生物物理表征

蛋白质复合物催化细胞内的关键功能。对许多重要复合物进行详细的功能和结构表征需要通过重组表达来实现。MultiBac 是一种杆状病毒/昆虫细胞表达系统，专为表达真核蛋白及其复合物而设计。MultiBac...

欧洲分子生物学实验室的 MultiBac 蛋白复合物生产平台

在心肌细胞中，管状膜结构形成细胞内网络。本文描述了以下优化方案：i）从小鼠心脏分离心肌细胞（包括质量控制），ii）用于先进荧光显微镜成像的活细胞染色，以及...

心房与心室心肌细胞中管状膜网络的分析

Bacillus anthracis 是致命性吸入性炭疽病的专性病原体，因此对其基因和蛋白质的研究受到严格管制。一种替代方法是研究其直系同源基因。本文描述了对 B. anthracis 在 B. cereus 中的直系同源基因 bc1531...

重组蛋白表达、结晶及生物物理研究 芽孢杆菌属保守的核苷酸焦磷酸化酶，BcMazG

本文介绍了一种表达和纯化肌球蛋白5a的实验流程，并讨论了如何利用群体和单分子水平的体外荧光显微镜检测方法对其进行表征，以及如何修改这些方法以适用于非肌肉肌球蛋白2b的表征。...

基于体外荧光显微镜的运动分析技术针对肌球蛋白的特异性优化

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本文描述了如何筛选热稳定突变体、纯化人源5-羟色胺转运蛋白、制备高亲和力抗体，以及对结合抗抑郁药物...

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本文介绍了一种表达和纯化S100A12（钙粒蛋白C）的方法，并描述了一种检测其对人类病原体H.

S100A12的表达、纯化及其抗菌活性

我们介绍了利用生物膜干涉技术、等温滴定热量法和X射线晶体学对具有免疫球蛋白折叠结构的糖蛋白进行生物物理和结构表征的方法。...

利用X射线晶体学与生物物理技术对具有免疫球蛋白折叠结构的糖蛋白进行表征

本文描述了获取去垢剂溶解的TRPV1生化量以进行光谱分析的具体方法。这些联合方案提供了生物化学和生物物理工具，可经适当调整后用于在膜环境可控条件下开展哺乳动物离子通道的结构与功能研究。...

用于光谱分析的TRPV1纯化与重组

离子通道的纯化通常具有挑战性，但一旦成功，就有可能使其得以 体外 对通道功能与结构的研究。在此，我们描述了表达与纯化哺乳动物 bestrophin 蛋白（一类 Ca²⁺ 激活的氯离子通道）的逐步操作步骤。2+-激活的 Cl-...

哺乳动物Bestrophin离子通道的表达与纯化

学习使用MultiBac杆状病毒系统纯化人肌球蛋白7a全酶并进行体外丝滑动实验。该方法有助于研究Myosin-7a的结构功能机制及其在听觉中的作用。

基于MultiBac系统的入源肌球蛋白-7a的纯化及生物物理表征

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