Name: 水性缺乏性干眼症小鼠模型的建立 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-01T14:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 21 s
Description: 学习通过切除小鼠眶外腺和眶下腺建立水性缺乏性干眼症动物模型的方法。该模型有效模拟严重干眼病理状态，为研究干眼症发病机制和开发新疗法提供可靠的实验基础。

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本研究部分得到了贵州省科技项目（黔科合JC-ZK[2024]ZD043）、福建省杰出青年科学基金（2023J06053 [致S.O]）、国家自然科学基金（No.82101084 [致S.O.]）以及国家留学基金管理委员会（CSC，202306310049 [致Y.W.]）的支持。

本研究使用7至8周龄的雌性C57BL/6（C57）小鼠。所有实验程序均遵循ARVO关于眼科和视觉研究中动物使用指南，并经贵州医科大学动物伦理委员会批准（批准号：2305193）。裂隙灯检查未发现眼表病变。
1. 术前步骤
<ol>
	<li>使用快速灭菌器对器械进行灭菌：持针器、带线的5-0缝合针、眼科手术剪和镊子。</li>
	<li>通过腹腔注射1.25%阿佛丁（Avertin），剂量为0.3 mL/100 g，对小鼠进行麻醉。</li>
	<li>麻醉完成后，将小鼠置于侧卧位，并去除手术区域的毛发。术前30分钟腹腔注射美洛昔康（meloxicam）20 mg/kg，术后每8小时给予一次后续剂量。</li>
	<li>用碘伏和酒精交替消毒手术区域三次。</li>
	<li>干眼模型的建立
	<ol>
		<li>将小鼠置于侧卧位，在手术显微镜下暴露手术区域。</li>
		<li>切口前通过夹趾法确认麻醉深度。用有齿镊夹住小鼠面部右侧皮肤，在外耳廓与下颌线连线至内眼角的中点处做切口。暴露肌肉组织，小心分离并去除位于肌肉上的外泪腺（ELG）。</li>
		<li>将皮肤切口延伸至内眼角，钝性分离肌肉，找到肌肉下方淡红色的腺体。剥离并切除内泪腺（ILG）。</li>
		<li>在持针器、眼科手术剪和镊子的辅助下，使用预先灭菌的5-0尼龙缝合线带针缝合切口。</li>
		<li>手术结束时涂抹氧氟沙星软膏以预防感染。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>单侧切除ELG和ILG后，将小鼠饲养于12小时光照/12小时黑暗循环环境中，自由摄食饮水。由此建立单侧干眼模型，而对侧保留内外泪腺的眼睛作为正常对照组。</li>
</ol>
2. 泪液分泌量的测量
<ol>
	<li>以每100 g体重0.3 mL的剂量，通过腹腔注射1.25%阿佛丁对小鼠进行麻醉。</li>
	<li>在全身麻醉下，使用包装完好且经商业灭菌的酚红棉线进行泪液分泌量测定。</li>
	<li>轻柔下拉待测眼的下眼睑，将酚红棉线顶端置于下眼睑内侧和外侧三分之一处，并立即启动计时器。</li>
	<li>每次仅测试一只眼睛，持续时间为15秒。</li>
	<li>规定时间结束后，小心回拉下眼睑，并谨慎向下取出酚红棉线。</li>
	<li>利用酚红棉线外包装袋上提供的刻度，测量从棉线顶端至红色部分末端的长度。</li>
	<li>使用电子秒表准确记录测试持续时间。</li>
</ol>
3. 冷冻组织切片的制备
<ol>
	<li>在使用 CO2 进行窒息处理后，对小鼠实施快速颈椎脱位。</li>
	<li>使用剪刀和镊子小心摘除眼球。</li>
	<li>将眼球包埋于最佳切割温度包埋剂中，并使用冷冻切片机获取厚度为 5–7 µm 的冷冻组织切片28。</li>
	<li>将所有载玻片在室温下的标本盒中存放约 30 分钟，随后转移至 -80 °C 超低温冰箱中保存。</li>
</ol>
4. 苏木精和伊红（H&amp;#38;E）染色
<ol>
	<li>从超低温冰箱中取出冷冻组织切片，平放在组织盒中，并在通风橱内干燥。</li>
	<li>用1×PBS洗涤切片，覆盖5分钟，然后吸去PBS。加入4%多聚甲醛覆盖样本，并确保盖子关闭以防止蒸发。室温孵育15分钟后，用1×PBS冲洗样本3次，每次5分钟。</li>
	<li>将样本放入染色架中，浸入0.5%苏木精染液中染色5分钟。</li>
	<li>用自来水冲洗样本5分钟，以去除多余染液。随后将其浸入0.1%盐酸酒精中1–2秒，以促进分化。</li>
	<li>将样本架置于自来水中15分钟，以去除非特异性染色。</li>
	<li>沥去多余水分后，将样本浸入0.05%伊红染色液中染色3分钟。</li>
	<li>用自来水洗涤样本，然后依次浸入75%、80%、95%及两轮100%乙醇中，每轮2分钟。</li>
	<li>将样本架浸入二甲苯中两轮，每轮2分钟。</li>
	<li>将样本架置于通风橱中干燥，然后用封片剂封片，注意避免损伤和产生气泡。</li>
	<li>将染色后的样本存放于室温下的盒子中，并使用生物显微成像系统进行拍照。</li>
</ol>
5. 免疫荧光染色
<ol>
	<li>从冷冻箱中取出样本，将其平放在盒内，并在通风橱中干燥。</li>
	<li>用1×PBS清洗样本，覆盖5分钟，吸除多余液体。用4%多聚甲醛覆盖样本，在免疫组化湿盒中加入水，盖上盖子以防止蒸发。室温孵育15分钟，然后用1×PBS冲洗样本3次，每次5分钟。 
	注意：此过程中请小心操作样本。</li>
	<li>去除样本表面多余的PBS，用滤纸轻轻擦拭组织切片周围的残留液体。用细胞通透液（0.2% Triton X-100）覆盖样本表面，室温孵育20分钟，以实现膜通透。</li>
	<li>去除通透液，用1×PBS冲洗样本3次，每次5分钟。</li>
	<li>倒掉样本表面的PBS，用滤纸轻轻擦拭组织切片周围的残留液体。用预热的封闭液（2% BSA）覆盖样本，盖上盖子防止蒸发，室温孵育1小时。</li>
	<li>封闭过程中，根据实验需求选择合适的抗体，按照推荐比例用免疫荧光抗体稀释液（1% BSA）配制一抗，并将配制好的一抗在4 °C离心机中以2,000 × g离心10分钟。 
	注意：上述操作均需在冰上或低温条件下进行。建议每份样本使用约120 µL一抗。</li>
	<li>弃去或倒掉一抗，用1×PBS缓冲液清洗样本3次，每次10分钟。倒掉PBS后，用新鲜的1×PBS冲洗样本。确保第一次冲洗时PBS完全覆盖载玻片。</li>
	<li>在一抗清洗的同时，根据其类型选择合适的二抗。用1% BSA稀释液按1:300比例稀释二抗。将配制好的抗体在4 °C离心机中以2,000 × g离心10分钟。整个过程需在冰上或低温、避光条件下进行。</li>
	<li>用PBS冲洗载玻片，用滤纸轻轻擦拭样本周围的液体，用移液泵吸除残留液体，迅速将配制好的二抗加至样本上。覆盖后室温孵育1小时。确保所有步骤均在避光条件下进行。</li>
	<li>弃去二抗，用1×PBS缓冲液冲洗，然后清洗3次，每次10分钟。确保PBS完全覆盖载玻片。操作时动作轻柔，避免将样本冲走。</li>
	<li>倒掉1×PBS，用滤纸吸除多余液体，用移液泵去除残留液体，用含DAPI的封片剂封片。盖上盖玻片，用锡箔纸包裹后置于4 °C冰箱中避光保存。注意避免损伤样本或产生气泡。</li>
	<li>使用激光共聚焦显微镜或正置荧光显微镜系统对染色样本进行拍照。确保在一周内完成成像，以防止荧光淬灭。</li>
</ol>
6. 角膜 mRNA 的提取
<ol>
	<li>将小鼠暴露于 CO2 中窒息后，立即实施快速颈椎脱位。然后使用剪刀和镊子小心摘除眼球，用 1× PBS 清洗 3 次，并将眼球置于含有 1× PBS 的培养皿中。</li>
	<li>在显微镜下，使用剪刀和镊子从眼球后极开始剪开，以分离晶状体。清除多余的巩膜和虹膜，但保留 0.5 mm 的白色巩膜及完整的角膜。根据试剂盒说明书，使用 RNA 提取试剂盒从小鼠眼球中提取 mRNA。</li>
</ol>
7. 逆转录 PCR
<ol>
	<li>进行逆转录之前，使用紫外分光光度计测定RNA的浓度。</li>
	<li>根据测得的RNA浓度，取1 mg的RNA。使用逆转录试剂盒进行逆转录反应。</li>
	<li>加入反应组分后，将混合物加入200 μL离心管中，轻轻振荡混匀，低速离心以避免产生气泡，并立即放入普通PCR仪中进行反应。</li>
	<li>通过实时PCR直接分析逆转录得到的cDNA，或将其储存在-20 °C冰箱中。</li>
</ol>
8. 实时定量 PCR 反应（qRT-PCR）
<ol>
	<li>根据实时PCR试剂盒说明书29配制10 µL反应体系：3.6 μL DEPC处理水，0.2 μM 正向引物，0.2 μM 反向引物，1 μL cDNA，5 μL Mix。引物详细信息见表1。</li>
	<li>根据实验分组情况，将反应体系加入专用于qRT-PCR的96孔板或八联管中。配置好qRT-PCR体系后，确保充分混匀，并使用台式离心机短暂离心，使液体脱离管壁。在进行qRT-PCR前，务必检查反应管中是否存在气泡。</li>
	<li>每个样本设三个复孔，进行三次重复反应，并计算平均Ct值（循环阈值）。</li>
</ol>

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</ol>

作者声明无利益冲突。

我们通过手术切除双侧眼睑泪腺（ELG）和眶后泪腺（ILG），成功建立了水液缺乏型干眼病的小鼠模型，旨在研究水液缺乏型干眼病条件下眼表的变化。我们系统记录了因同时切除ELG和ILG所导致的干眼小鼠模型中出现的形态学和生理学改变。在建模后两周，我们对建立的干眼小鼠模型进行了观察和取样。
考虑到温度、气流速度、相对湿度、季节性变化以及污染物等因素可能影响泪膜蒸发速率，并加重或缓解干眼症症状，我们在治疗前后均严格控制小鼠的饲养环境。我们为小鼠维持规律的12小时光照与12小时黑暗交替的昼夜节律，提供自由摄食和饮水条件，并尽量减少研究中可能的混杂因素。术前给予充分麻醉，确保小鼠在整个手术过程中保持静止，从而减轻其应激反应及生理干扰。此外，我们始终保持手术器械清洁无菌，以预防感染。在手术过程中，特别关注小鼠眼睑腺（ELG）和眶下腺（ILG）的解剖位置，因其位于眼眶较深部位。采用精细的外科技术识别并避开周围血管和神经，以最大程度减少对小鼠不必要的损伤。手术切口的大小、形状和位置均经过仔细考量，因其对手术结果具有显著影响。我们的首要原则是在手术中尽量减少对小鼠的创伤，避免皮肤和黏膜损伤，以防细菌侵入...

干眼症已成为全球最常见的眼表疾病，估计有5%至50%的人口受此疾病困扰1。干眼引起的干涩和不适若持续存在，可导致视物模糊和泪膜不稳定，进而引发眼表损伤2。部分干眼症患者甚至可能出现慢性疼痛2。
根据2017年TFOS DEWS II干眼症共识，干眼症是一种涉及多种因素的复杂疾病，其特征是泪膜自然平衡的破坏。该疾病伴随一系列眼部症状、泪膜不稳定、泪液渗透压升高、眼表炎症与损伤以及神经性疼痛，这些因素对于理解疾病的进展至关重要3。在此反馈环中，干眼症可导致角膜上皮细胞损伤、角膜基质厚度减少和内皮细胞密度下降、触发免疫细胞在角膜表面的活化与聚集、杯状细胞黏蛋白分泌减少，并引起泪腺免疫功能障碍，从而进一步加重病情4,5,6,7,8,9,10。该共识明确了干眼综合征的三种主要类型：水液缺乏型干眼、蒸发过强型干眼，以及两者并存的混合型干眼3。水液缺乏型干眼与泪腺的结构和功能改变相关11。这些改变包括腺泡萎缩、导管阻塞导致泪液流出受阻、淋巴细胞浸润提示存在免疫反应，以及维持泪膜健康与稳定所必需的蛋白质分泌减少12,13。
泪腺是一种管状外分泌腺，负责产生泪膜中的水性成分13,14，包括水、电解质和蛋白质，并有助于维持眼表微环境的稳定性15,16。眼睛的健康和视觉清晰度依赖于泪膜的存在，泪膜在角膜表面形成关键的光学层，确保角膜和结膜的平滑润滑17。泪膜促进眼表细胞的代谢活动，并发挥清洁作用，有效清除眼表的杂质和潜在刺激物，从而维持眼睛的生理平衡与舒适性18,19。
在啮齿类动物（如大鼠和小鼠）中，泪腺由两个叶组成：眶内叶和眶外叶。眶外叶位于耳部下方，其功能部分通过一条延伸的导管与眼睛相连。该导管在到达眼球之前先与眶内的泪腺叶相连接，并参与泪液的生成20。眶内叶，也称为眶内泪腺，位于外眦的球结膜下方。ILG 比 ELG 更小。泪腺功能受损可导致水样液缺乏性干眼症，若不及时治疗，可能进展为角膜溃疡并造成视力丧失21。
干眼症的动物模型（以水液缺乏为主）可分为三类干预方法：手术诱导模型、药物诱导模型和转基因模型。手术诱导模型通过切除ELG实现，但由于ILG的存在，该模型稳定性较差22。&#160;在药物诱导模型中，通常采用全身注射胆碱能受体阻滞剂东莨菪碱23。局部应用阿托品24和苯扎氯铵25也可减少黏蛋白和泪液分泌。将刀豆蛋白A（Concanavalin-A）局部注射至兔的泪腺，可诱发免疫性泪腺炎，从而建立水液缺乏型干眼模型26。此外，转基因动物（如NOD、Aly/aly、NFS/sld、IQI/Jic、Id3 KO等小鼠品系）可模拟原发性干燥综合征的症状和表型27，用于复制水液缺乏型干眼。
本研究的核心实验设计包括通过手术无痛且精确地摘除小鼠的眶内泪腺（ELG）和眶外泪腺（ILG）。这些泪腺对于维持眼球湿润和润滑至关重要；摘除后会显著减少泪液分泌，从而模拟小鼠的水液缺乏型干眼症。该方法可实现对干眼状态下小鼠行为、生理反应及眼部组织变化的观察与分析，为干眼病的病理学研究及治疗方案的评估提供关键的实验基础。

<table><tbody><tr><td>10 mL 注射器</td><td>Zhejiang KDL Medical Devices Co., Ltd. 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-0 缝合针</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>无水乙醇</td><td>上海国药化学试剂有限公司，中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488，驴抗小鼠 IgG</td><td>Invitrogen</td><td>811493</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594，驴抗兔 IgG</td><td>Invitrogen</td><td>A21207</td><td></td></tr><tr><td>抗角蛋白12抗体 EPR17882</td><td>Abcam</td><td>ab185627</td><td></td></tr><tr><td>抗PAX6抗体</td><td>Abcam</td><td>ab5790</td><td></td></tr><tr><td>高压灭菌器</td><td>Hirayama. 日本</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 小鼠</td><td>上海斯莱克实验动物有限公司</td><td></td><td></td></tr><tr><td>室温离心机</td><td>Eppendorf. 德国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ddH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>上海生工生物工程有限公司，中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>电子天平</td><td>上海奥豪斯生物科技有限公司，中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>荧光倒置相差显微成像系统</td><td>TE-2000U, Nikon. 日本</td><td></td><td></td></tr><tr><td>冷冻包埋盒</td><td>江苏世泰实验器材有限公司，中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>冷冻切片刀</td><td>厦门泰景生物科技有限公司，中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>H-1200 含 DAPI 封片剂</td><td>厦门聚因生物科技有限公司，中国</td><td></td><td>含 DAPI 的封片剂</td></tr><tr><td>H-5000 片剂封片剂</td><td>Vector. 美国</td><td></td><td>封片剂</td></tr><tr><td>HCl</td><td>上海国药化学试剂有限公司，中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>苏木精-伊红染色试剂盒</td><td>Auragene. 美国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>碘</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ki-67 抗体</td><td>Abcam</td><td>ab16667</td><td></td></tr><tr><td>液氮</td><td>厦门亿东气体有限公司，中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>显微持针器</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>显微有齿镊</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>显微无齿镊</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Model 3050 冷冻切片机</td><td>Leica, Deerfield, IL. 美国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>OCT 包埋剂</td><td>上海茂康生物科技有限公司，中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>氧氟沙星软膏</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>眼科荧光素钠试纸条</td><td>天津晶明新技术开发有限公司，中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>多聚甲醛粉末</td><td>Sigma. 美国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>酚红棉线</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>快速灭菌器</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>重组人 SPRR1b 蛋白&amp;nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab167925</td><td></td></tr><tr><td>冷藏台式离心机</td><td>Eppendorf. 德国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>载玻片架</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>裂隙灯</td><td>Topcon. 日本</td><td></td><td></td></tr><tr><td>标本盒</td><td>兰博立德（福州）生物科技有限公司，中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>叔戊醇</td><td>上海麦克林生化科技有限公司，中国</td><td>A800283</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>三溴乙醇</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma. 美国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>超低温冰箱</td><td>Thermo Fisher Scientific. 美国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>正置荧光显微镜</td><td>Leica DM2500. 美国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>正置普通生物显微成像系统</td><td>Eclipse 50i, Nikon. 日本</td><td></td><td></td></tr><tr><td>二甲苯</td><td>上海国药化学试剂有限公司，中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>蔡司手术显微镜</td><td>VISU150, Carl ZEISS. 德国</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

建立干眼症中水样液缺乏型小鼠模型

Establishment of A Mouse Model of Aqueous Deficiency Dry Eye

干眼症是一种常见疾病，影响全球5%至50%的人口。动物模型研究在揭示其发病机制方面发挥着关键作用。因此，我们通过手术切除小鼠的眼眶外泪腺（ELG）和眼眶内泪腺（ILG），建立了一种干眼症小鼠模型，用于研究水样液缺乏型干眼状态下眼表的病理变化。术后两周，小鼠表现出严重的干眼症状，包括泪液分泌减少、角膜上皮不规则、荧光素钠染色阳性以及新生血管形成。通过苏木精-伊红染色进行组织学检查，发现存在炎性细胞浸润和角膜上皮发育异常。免疫荧光染色和定量逆转录聚合酶链反应结果显示，角膜上皮中正常角膜上皮标志物K12和Pax6的表达下调，而Sprr1b的表达上调。这些眼表改变提示角膜上皮细胞分化异常。此外，Ki67免疫荧光染色显示细胞增殖增加。综上所述，联合切除ELG和ILG的小鼠模型适用于研究眼表变化，并有助于阐明水样液缺乏型干眼的发病机制。

为了研究水样液缺乏性干眼对眼表的影响及其潜在机制，我们通过手术切除ELG和ILG建立了水样液缺乏性干眼的小鼠模型（图1A）。在泪腺切除术后2周，干眼小鼠（切除泪腺后）的泪液分泌量与正常组相比显著减少（图1B、C）。通过裂隙灯显微镜对角膜进行评估，结果显示明显的干燥现象，荧光素钠染色显示角膜表面出现弥漫性点状着染，提示存在角膜上皮缺损。此外，在角膜的浅层上皮层和基质层均观察到新生血管，且向角膜中央区域弥漫性延伸（图1D）。
通过H&amp;E染色进行的组织学分析显示，角膜上皮出现鳞状上皮化生，并伴有少量圆形炎性细胞在角膜基质层内聚集，这些细胞的细胞核呈深蓝紫色（图2A）。此外，实验组角膜上皮基底层中可见明显的异型增生改变（图2B）。
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本文介绍了一种通过切除眶外腺和眶下泪腺建立水液缺乏型干眼小鼠模型的方法，并评估水液缺乏型干眼中眼表的变化。

干眼病是一种影响全球5%至50%人群的常见疾病。动物模型研究在其发病机制、病理生理学及治疗策略的探索中发挥着关键作用。

我们致力于建立一种可靠的干眼综合征模型。通过切除眼睑的ELG和ILG，我们已成功复制出水样液缺乏型干眼的病理状态。由于ILG位于较深的解剖位置，联合切除ELG和ILG更具挑战性，且创伤更大。手术过程中还可能引起出血，这对我们的操作技术提出了较高要求。我们的模型成功诱导出明显的房水缺乏型干眼症，同时对动物的损伤极小，且显著简化了手术流程。所构建的小鼠模型与严重的干眼综合征（如干燥综合征和史蒂文斯-约翰逊综合征）高度相似，为相关研究提供了有力支持。该方法可避免系统性注射效应，解决局部注射效果耐久性差的问题，克服干眼模型的不足之处，并通过消除对专用动物环境的需求来简化实验流程。首先，将麻醉后的小鼠置于侧卧位，并在手术显微镜下暴露手术区域。使用有齿镊子夹住小鼠面部右侧的皮肤。在外部耳道与下颌线至眼内眦的连线中点处做一切口。然后暴露肌肉组织，并小心移除位于肌肉上的眼轮匝肌（ELG）。现在将皮肤切口延伸至眼内眦。钝性分离肌肉，找到位于肌肉下方的浅红色腺体，然后剥离并移除ILG。使用持针器、眼科手术剪和镊子，以5-0缝线缝合切口。手术结束时涂抹氧氟沙星软膏以预防感染。切除单侧 ELG 和 ILG 后，将小鼠置于具有规律 12 小时光照-黑暗循环的环境中，并自由摄取食物和水。取一根包装良好的酚红线用于泪液测量。麻醉水缺乏型干眼小鼠后，轻轻下拉待测眼睛的下眼睑。将酚红棉线的顶端置于下眼睑内侧和外侧三分之一处，并立即启动计时器。在规定时间结束后，小心收回下眼睑，并谨慎地向下取出酚红棉线。利用酚红丝外包装袋上提供的刻度，从丝线顶端测量至红色部分的末端。使用电子秒表准确记录测试持续时间。为制备用于染色的组织切片，取安乐死小鼠摘除的眼球。然后将眼球包埋于最佳切割温度化合物中，并使用冷冻切片机获取厚度为5至7微米的冷冻组织切片。用于角膜mRNA提取时，在显微镜下用剪刀和镊子从眼球后极部剪下眼球。分离晶状体并清除多余的巩膜和虹膜，但保留0.5毫米的白色巩膜及完整的角膜。在泪腺切除术后两周，干眼小鼠的泪液分泌量较正常组明显减少。干眼组角膜上皮层及基质层出现鳞状上皮化生及炎性细胞浸润。与正常组相比，干眼组小鼠角膜上皮细胞中角蛋白12的表达显著降低。与正常组相比，干眼组角膜上皮细胞中 Pax6 的表达显著降低。干眼组中异常分化的角膜上皮细胞标志物 Sprr1b 的表达显著高于正常组。

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水性缺乏性干眼症小鼠模型的建立

本视频演示了一种在大鼠中诱导慢性实验性自身免疫性干眼病的技术。通过在预定时间间隔向大鼠注射含有自身抗原和外来抗原的抗原-佐剂乳剂，随后将相同抗原注射到眼部表面组织，可在免疫大鼠中诱导产生慢性眼表炎症。...

一种在大鼠中诱导慢性实验性自身免疫性干眼症的技术

在不使用麻醉的情况下，将乳剂皮下注射至大鼠尾根部。随后，在第14天以相同方式注射200微升相同抗原与不完全弗氏佐剂的混合物。同一天，将300纳克百日咳毒素溶于100微升磷酸盐缓冲液（PBS）中，进行腹腔注射。...

本视频展示了一种在大鼠中诱导慢性实验性自身免疫性干眼病的技术。通过在预定时间间隔向大鼠注射含有自身抗原和外来抗原的抗原-佐剂乳剂，随后将相同抗原注射至眼部表面组织，可在免疫大鼠中诱导产生慢性眼表炎症。...

本视频展示了一种在自身免疫性大鼠模型中评估角膜光滑度和泪膜稳定性的方法。该方法强调了腺体功能障碍对泪膜稳定性的影响，对于理解干眼症具有重要意义。...

自身免疫性干眼大鼠模型中角膜与泪膜光滑度的评估

本报告描述了一种通过免疫诱导Lewis大鼠产生慢性实验性自身免疫性干眼症的方法：首先使用大鼠泪腺提取物、卵清蛋白和完全弗氏佐剂的乳剂进行免疫，六周后再次向结膜穹隆下和泪腺内注射泪腺提取物和卵清蛋白。...

一种眼组织中效应记忆T细胞增加的慢性自身免疫性干眼大鼠模型

本文介绍了一种通过向兔眼眶泪腺系统的全部部位注射刀豆球蛋白A来诱导急性或慢性干眼病的方法。该方法优于已报道的其他方法，可建立可重复且稳定的干眼动物模型，适用于药理学药物的研究。...

一种通过刀豆蛋白A注射至泪腺诱导的水样缺乏型干眼病兔模型：在药物疗效研究中的应用

提出一种通过手术切除所有眶部泪腺在兔体内诱导慢性干眼病的新型方法。该方法不同于以往报道的方法，可产生稳定且可重复的水样缺乏型干眼模型，非常适合用于研究泪液生理学与病理生理学以及眼表治疗药物。...

通过完全性泪腺切除术建立兔严重干眼模型

本研究建立了一种大鼠泪腺功能障碍模型，为研究水样液缺乏型干眼症提供基础。...

一种由东莨菪碱诱导泪腺功能障碍的大鼠干眼模型

角膜的独特之处在于其缺乏血管组织。然而，通过强效的促血管生成因子，可在角膜中诱导出显著的血管生长与存活。因此，角膜可为我们提供一种研究血管生成的宝贵工具。本方案展示了如何开展小鼠角膜囊袋实验模型，以及如何利用该模型评估促血管生成因子所诱导的血管生成。...

用于血管生成研究的角膜囊袋实验小鼠模型

建立尿路感染（UTI）模型的能力对于理解细菌致病机制以及推动新型治疗方法的开发至关重要。本研究的目标是展示能够重现并预测人类中观察到的实验结果的小鼠实验性尿路感染模型以及导管相关性尿路感染模型。...

小鼠模型中尿路感染和导管相关尿路感染的建立与表征

学习通过切除小鼠眶外腺和眶下腺建立水性缺乏性干眼症动物模型的方法。该模型有效模拟严重干眼病理状态，为研究干眼症发病机制和开发新疗法提供可靠的实验基础。

建立干眼症中水样液缺乏型小鼠模型

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