通过比色分析量化弹性蛋白酶活性的调节

我们的研究范围集中在天然反应性化合物的开发上。因此，使用体外方法，我们的目标是评估弹性蛋白酶的活性，弹性蛋白酶是一种参与弹性蛋白降解和弹性丧失的酶，以恢复组织的稳态。量化天然植物提取物（该活动）带来了一些挑战，主要与它们复杂的化学成分和通常很强的着色有关，这可能会干扰常见的测量。

开发可靠的自适应协议对于推进这一研究领域至关重要。我们的研究为这些领域提供了几个好处，包括简单、敏感、张力快速结果以及适应不同的研究需求。首先，使用分析天平称量适量的 Tris 碱，然后将称量好的 Tris 碱转移到烧杯中。

使用量筒，将去离子水加入烧杯中。用磁力搅拌器搅拌溶液，直到 Tris 碱完全溶解。然后使用四个正常盐酸将溶液的 pH 值调节至 8。

达到所需的 pH 值后，将溶液转移至容量瓶中。使用去离子水，将烧瓶装满至标记体积。将制备好的缓冲液转移到贴有标签的储存瓶中，并在室温下储存。

对于样品制备，使用分析天平准确称量所需样品量。将样品溶解在制备的反应缓冲液中以达到所需的浓度。使用涡旋混合器完全溶解样品。

并将准备好的样品储存在冰上。接下来，在反应缓冲液中制备弹性蛋白酶的工作溶液，最终浓度为 10 μg/mL。将弹性蛋白酶溶液储存在冰上，直到准备好使用。

现在在反应缓冲液中制备 0.8 毫摩尔的 SANA 溶液。将溶液避光保存，并在 4 摄氏度下储存直至使用。对于苯基甲磺酰氟或 PMSF 原液，在异丙醇中制备 100 毫摩尔的 PMSF 溶液。

将准备好的溶液储存在冰上。使用微量离心管一式三份准备所有反应。将所有试管在室温下孵育 20 分钟。

然后向每个试管中加入 100 微升 SANA 底物溶液，颜色对照除外。轻轻地将试管倒置数次以混合样品，并将 300 μL 从每根试管转移到 96 孔板中，确保每个样品重复测量三次。最后，将 96 孔板放入设置为 410 纳米的酶标仪中，定期测量吸光度，每分钟测量一次，持续 20 分钟，或直到信号在室温下稳定下来。

提取物 1 在 1、0.75 和 0.5 毫克/毫升的浓度下显示出微弱但显着的弹性蛋白酶抑制活性，在 0.25 毫克/毫升浓度下没有显着影响。提取物 2 在所有测试浓度下均表现出高弹性蛋白酶抑制活性，抑制水平与阳性对照相似，分别为 1 毫克/毫升、0.75 毫克和 0.5 毫克/毫升。