Name: 颅骨骨髓血管动力学的活体纵向成像 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: 了解活体颅骨骨髓血管动力学研究方法，利用双光子显微成像技术追踪血管在正常与病理造血过程中的动态变化。该技术可长期可视化血管重塑，为癌症生物学和再生医学研究提供重要工具。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

作者谨向科钦研究所 IMAG’IC 和动物设施的全体工作人员致以诚挚感谢，感谢他们在显微成像实验和小鼠饲养方面提供的支持。Tg(Nes-EGFP)33Enik 和 Tg(Pdgfb-icre/ERT2)1Frut 小鼠由伦敦弗朗西斯·克里克研究所的 Bonnet 博士惠赠。Tg(Cdh5-cre/ERT2)1Rha 和 B6.Cg-Gt(ROSA)26Sortm9(CAG-tdTomato)Hze/J 小鼠由纽约威尔康奈尔医学院的 Rafii 博士惠赠。本研究工作得到了法国国家科学研究中心（CNRS）、法国国家健康与医学研究院（INSERM）和巴黎城市大学的资助，以及 ATIP-AVENIR 项目、法国抗癌研究基金会（Fondation ARC pour la recherche sur le cancer，项目号 R19084KS - RSE20008KSA）、巴黎市政府“Emergence”计划（项目号 R20192KK - RPH20192KKA）、Laurette Fugain 基金会（项目号 R23197KK）、法兰西岛癌症研究中心（Cancéropôle IDF，项目号 RPH23177KKA）、法国国家癌症研究所 PLBIO 项目（INCA PLBIO，项目号 RPH21162KKA）、法国基金会（Fondation de France，项目号 RAF23152KKA）、抗癌联盟（Ligue contre le cancer，项目号 282273/807251）、巴黎癌症研究所（Institut du cancer Paris Carpem）、欧洲血液学会（European Hematology Association，项目号 RAK23130KKA）和欧洲研究理事会启动基金（European Research Council ERC-STG，项目号 EEA24092KKA）的资助。IMAG’IC 核心设施得到了法国生物成像国家基础设施（France BioImaging）的支持（项目号 ANR-10-INBS-04）。Passaro 实验室隶属于“心血管科学校外研究所”（Institut Hors Murs des Sciences Cardiovasculaires）和“巴黎圣路易白血病研究所”（Leukemia Institute Paris Saint-Louis）。

<ol><li>Lo Celso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-animal+tracking+of+individual+haematopoietic+stem%2Fprogenitor+cells+in+their+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Live-animal tracking of individual haematopoietic stem/progenitor cells in their niche.</a> Nature. 457 (7225), 92-96 (2009).</li>
<li>Pittet, M. J., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging.</a> Cell. 147 (5), 983-991 (2011).</li>
<li>Itkin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+bone+marrow+blood+vessels+differentially+regulate+haematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Distinct bone marrow blood vessels differentially regulate haematopoiesis.</a> Nature. 532 (7599), 323-328 (2016).</li>
<li>Christodoulou, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-animal+imaging+of+native+haematopoietic+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Live-animal imaging of native haematopoietic stem and progenitor cells.</a> Nature. 578 (7794), 278-283 (2020).</li>
<li>Upadhaya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+reveals+motility+of+adult+hematopoietic+stem+cells+in+the+bone+marrow+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging reveals motility of adult hematopoietic stem cells in the bone marrow niche.</a> Cell Stem Cell. 27 (2), 336-345.e4 (2020).</li>
<li>Hawkins, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+acute+leukaemia+exhibits+dynamic+interactions+with+bone+marrow+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-cell acute leukaemia exhibits dynamic interactions with bone marrow microenvironments.</a> Nature. 538 (7626), 518-522 (2016).</li>
<li>Duarte, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+in+vivo+characteristics+of+acute+myeloid+leukemia+cells+behavior+by+intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Defining the in vivo characteristics of acute myeloid leukemia cells behavior by intravital imaging.</a> Immunol Cell Biol. 97 (2), 229-235 (2019).</li>
<li>Passaro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+permeability+in+the+bone+marrow+microenvironment+contributes+to+disease+progression+and+drug+response+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Increased vascular permeability in the bone marrow microenvironment contributes to disease progression and drug response in acute myeloid leukemia.</a> Cancer Cell. 32 (3), 324-341.e6 (2017).</li>
<li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FLT3+inhibitors+upregulate+CXCR4+and+E-selectin+ligands+via+ERK+suppression+in+AML+cells+and+CXCR4%2FE-selectin+inhibition+enhances+anti-leukemia+efficacy+of+FLT3-targeted+therapy+in+AML%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">FLT3 inhibitors upregulate CXCR4 and E-selectin ligands via ERK suppression in AML cells and CXCR4/E-selectin inhibition enhances anti-leukemia efficacy of FLT3-targeted therapy in AML.</a> Leukemia. 37 (6), 1379-1383 (2023).</li>
<li>Pendleton, E. G., Tehrani, K. F., Barrow, R. P., Mortensen, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second+harmonic+generation+characterization+of+collagen+in+whole+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Second harmonic generation characterization of collagen in whole bone.</a> Biomed Opt Express. 11 (8), 4379-4396 (2020).</li>
<li>Dispositif de liaison d'un animal de laboratoire à au moins un système d'expérimentation, et procédé de fixation d'un tel dispositif. France patent. , WO/2021/123449 (2021).</li>
<li>Horton, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myeloid+leukemia+induced+by+MLL-ENL+is+cured+by+oncogene+ablation+despite+acquisition+of+complex+genetic+abnormalities%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Acute myeloid leukemia induced by MLL-ENL is cured by oncogene ablation despite acquisition of complex genetic abnormalities.</a> Blood. 113 (20), 4922-4929 (2009).</li>
<li>Scott, M. K., Akinduro, O., Lo Celso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+4-dimensional+tracking+of+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+in+adult+mouse+calvarial+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo 4-dimensional tracking of hematopoietic stem and progenitor cells in adult mouse calvarial bone marrow.</a> J Vis Exp. (91), e51683(2014).</li>
<li>Jung, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+mouse+bone+marrow%3A+Hemodynamics+and+vascular+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of mouse bone marrow: Hemodynamics and vascular permeability.</a> Methods Mol Biol. 1763, 11-22 (2018).</li>
<li>Le, V. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+longitudinal+visualization+of+bone+marrow+engraftment+process+in+mouse+calvaria+using+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo longitudinal visualization of bone marrow engraftment process in mouse calvaria using two-photon microscopy.</a> Sci Rep. 7, 44097(2017).</li>
<li>Spencer, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+measurement+of+local+oxygen+concentration+in+the+bone+marrow+of+live+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Direct measurement of local oxygen concentration in the bone marrow of live animals.</a> Nature. 508 (7495), 269-273 (2014).</li>
<li>Yang, M., Mahanty, A., Jin, C., Wong, A. N. N., Yoo, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+metabolic+imaging+for+sensitive+and+robust+monitoring+of+anti-CD47+immunotherapy+response+in+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother+Cancer%22%5BJournal%5D)">Label-free metabolic imaging for sensitive and robust monitoring of anti-CD47 immunotherapy response in triple-negative breast cancer.</a> J Immunother Cancer. 10 (9), e005199(2022).</li>
<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+strain-specific+morphogenesis+and+angiogenesis+of+murine+calvaria+with+large-scale+optoacoustic+and+Ultrasound+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Tracking strain-specific morphogenesis and angiogenesis of murine calvaria with large-scale optoacoustic and Ultrasound Microscopy.</a> J Bone Miner Res. 37 (5), 1032-1043 (2022).</li>
<li>Lassailly, F., Foster, K., Lopez-Onieva, L., Currie, E., Bonnet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+imaging+reveals+structural+and+functional+heterogeneity+in+different+bone+marrow+compartments%3A+functional+implications+on+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Multimodal imaging reveals structural and functional heterogeneity in different bone marrow compartments: functional implications on hematopoietic stem cells.</a> Blood. 122 (10), 1730-1740 (2013).</li>
<li>Rindone, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+3D+imaging+of+the+cranial+microvascular+environment+at+single-cell+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Quantitative 3D imaging of the cranial microvascular environment at single-cell resolution.</a> Nat Commun. 12 (1), 6219(2021).</li>
<li>Mills, W. A. 3rd, Coburn, M. A., Eyo, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emergence+of+the+calvarial+hematopoietic+niche+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">The emergence of the calvarial hematopoietic niche in health and disease.</a> Immunol Rev. 311 (1), 26-38 (2022).</li>
<li>Bixel, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+is+uncoupled+from+osteogenesis+during+calvarial+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis is uncoupled from osteogenesis during calvarial bone regeneration.</a> Nat Commun. 15 (1), 4575(2024).</li>
<li>Koh, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+skull+bone+marrow+is+an+expanding+and+resilient+haematopoietic+reservoir%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Adult skull bone marrow is an expanding and resilient haematopoietic reservoir.</a> Nature. 636 (8041), 172-181 (2024).</li>
<li>Kolabas, Z. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+molecular+profiles+of+skull+bone+marrow+in+health+and+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Distinct molecular profiles of skull bone marrow in health and neurological disorders.</a> Cell. 186 (17), 3706-3725.e9 (2023).</li>
<li>Rosenhain, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+preclinical+micro-computed+tomography+database+including+3D+whole+body+organ+segmentations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Data%22%5BJournal%5D)">A preclinical micro-computed tomography database including 3D whole body organ segmentations.</a> Sci Data. 5, 180294(2018).</li>
</ol>

Jozsua Fodor 是 YMETRY 公司的创始人（注册号 888312352）。其他作者无利益冲突。

活体显微成像技术的主要优势在于能够在其原生环境中实时捕捉动态的细胞过程，克服了传统组织学和 离体 成像方法。通过采用本方案所述的先进成像技术结合荧光标记直接观察颅骨骨髓，研究人员不仅能够研究血管功能参数8,14，还包括白血病细胞的植入和迁移等纵向过程6,15增殖和代谢活性16,17 保持生理相关性，并避免与组织固定和处理相关的假象。
与其它骨组织成像部位相比，颅骨骨髓活体成像具有多项优势：易于操作、颅骨透明有利于在不损伤骨组织的情况下实现更清晰的可视化、颅骨结构稳定可最大限度减少组织运动伪影，且在不同实验动物间具有良好的可重复性，便于不同实验组之间的比较。此外，动物可在成像后恢复并进行纵向重复成像，从而减少单个研究所需的动物数量。值得注意的是，已有研究发现不同小鼠品系在颅骨血管生长模式及随之发生的成骨过程方面存在品系特异性差异18，因此在为特定小鼠品系设计成像植入装置时，必须考虑这一因素，以确保理想的解剖兼容性并准确到达目标成像区域。
另一个需要提及的重要问题是，颅骨骨髓（calvarial BM）在血管和造血特性方面可能与其他骨骼存在差异，这一问题在近年来才开始受到关注。最新研究表明，不同骨骼具有局部特异性的功能，颅骨骨髓在造血作用、骨结构与血管结构及功能方面均与其他骨骼存在差异19,20,21,22,23，且对神经系统疾病的反应也有所不同24。在将特定颅骨研究结果推广之前，这些差异需要进一步研究并予以充分考虑。
成像植入物的设计与构建是本实验设置中的关键步骤，始于材料的选择。生物相容性植入物在生物医学研究中发挥着关键作用，可支持多种应用，涵盖组织工程、再生医学到药物递送系统等领域 体内 监测设备。用于活体成像的颅骨植入物材料选择至关重要。理想的材料应具备优异的生物相容性、适合维持最小形变和整体稳定性的力学性能，以及能够在不引发炎症的情况下与颅骨整合的能力。钛因其在动物体内具有良好的耐受性，与生物组织接触时不会诱发不良反应，同时具有抗腐蚀性，即使暴露于体液或实验溶液中也能确保长期稳定性，因而成为理想选择。此外，其较高的机械强度使其具有抗变形和抗断裂能力。尽管强度高，钛的密度相对较低，可制成轻量化的活体成像设备，从而减轻对实验动物和研究人员的负担。最后，钛在加工方面具有高度可塑性，可根据特定实验需求（如尺寸、形状和功能）定制活体成像设备。
本文中，我们利用具有内置有限元分析（FEA）功能的参数化建模CAD软件（特别是SolidWorks）设计了一种生物相容性的头部固定植入物。该方法可对植入物的结构和空间需求进行精确的迭代调整，从而确保其解剖相容性与机械强度。FreeCAD等免费替代软件也提供类似的建模与仿真功能。设计过程的主要输入包括小鼠颅骨的高分辨率解剖模型、显微镜物镜模型以及固定系统模型，这些共同决定了植入物的尺寸与构型。最终输出为一种平台无关的网格文件，通常为STL或STEP格式，可兼容大多数3D打印软件。
第一步是利用高分辨率成像技术（如活体微计算机断层扫描（in vivo micro-CT））获取小鼠头部的详细解剖特征。该方法能够提供最高的解剖细节和精度，可捕捉颅骨的微观结构。对已制备的无软组织颅骨进行3D扫描也是一种可选方案。该方法采用激光或结构光扫描仪，通常应用于已清理软组织的颅骨，可精确获取表面轮廓，但在内部结构细节方面不如micro-CT。此外，也可从开源出版物和数据库25或DigiMorph {https://www.digimorph.org/specimens/Mus_musculus/}下载解剖模型。尽管这种方式较为便捷，但这些模型可能缺乏特定标本的细节，因此通常需要根据研究中具体动物的实际情况进行调整，例如按实际前囟-后囟距离（Bregma-Lambda distance）进行比例缩放。所获取的数据随后用于构建小鼠颅骨的精确三维模型，作为植入物设计的基础模板。
为了将植入物固定在颅骨上，设计了一种粘接结构，用于覆盖观察窗未占据的颅骨表面。该结构必须提供牢固的附着点，同时避开关键的解剖结构。粘接结构设有多个开口，以确保粘合剂通过扩散在植入物下方充分聚合。此外，粘接结构的侧壁具有微小的拔模角度，使粘合剂能够牢固地锚定在这些倾斜的壁面上。植入物的尾部从主体延伸至固定系统，其设计至关重要，可在观察过程中实现植入物的对齐与稳定，其结构需考虑小鼠头部的可用空间及解剖学限制。最后，植入物设计中集成了燕尾槽结构，便于植入物与固定系统之间的快速安装与拆卸。该设计提升了植入物在重复观察过程中的实用性与操作便捷性。燕尾槽结构可实现可重复的精确定位，便于在多次成像过程中对观察组织进行便捷取回与复位。
考虑采用颅骨骨髓活体显微成像的研究人员应仔细评估其研究目标和实验需求，以确定该方法是否适用于其研究。尽管活体显微成像可提供关于造血作用、组织微环境调控及血管动态的无与伦比的洞察 在体，它也存在一定的技术挑战和局限性。研究人员应通过精心设计实验、优化成像参数以及使用适当的对照措施来应对这些挑战。此外，研究人员还需考虑专用成像设备的可及性、荧光标记技术的专业知识，以及图像分析所需的计算资源。总体而言，颅骨骨髓的活体显微成像在推动我们对造血作用和血管生物学的理解方面具有巨大潜力，为观察骨髓微环境中发生的动态过程提供了独特的窗口。

颅骨骨髓（BM）的活体显微成像是一种强大且不可或缺的技术，用于研究骨髓微环境中的造血过程、组织微环境调控以及血管动态变化。该方法学的主要目的是实现对骨髓微环境中细胞行为、细胞间相互作用及空间组织结构的实时可视化与分析 体内通过结合荧光标记与先进的成像技术直接观察骨髓颅骨，研究人员能够阐明造血干细胞（HSCs）、基质细胞及其周围血管系统之间复杂的相互作用，从而为造血作用和免疫应答的调控机制提供关键见解。
活体显微成像技术的发展与应用源于传统组织学和离体（ex vivo）成像方法的局限性，这些传统方法往往无法捕捉细胞在组织内动态行为及其相互作用的真实情况。与静态成像技术不同，活体显微技术使研究人员能够实时观察细胞动态过程，从而在不牺牲实验动物的前提下，研究细胞迁移、增殖和分化等在其原生微环境中的长期生物学过程。此外，活体显微成像具有独特优势，可在体内（in vivo）研究功能性行为，例如血管功能（如灌注、通透性、缺氧状态），从而保持生理相关性，并避免组织固定和处理过程中可能引入的人为假象。该领域早期的开创性研究已充分证明了这一技术的巨大优势1,2，而近年来更精细的技术改进进一步验证并拓展了这些发现3,4,5，这些研究利用活体显微成像追踪了内源性造血干细胞（HSC）在骨髓（BM）微环境中的定位、迁移及其与血管系统的相互作用。此外，活体显微成像在阐明血液系统疾病（如白血病和骨髓衰竭综合征）的发病机制方面发挥了关键作用，为白血病细胞的运动特性6,7、疾病相关的血管改变8以及药物反应机制9提供了新的见解。
颅骨骨髓（BM）的活体显微成像相较于其他骨组织位点具有多项优势。首先，颅骨内的骨髓相比于股骨或胫骨等较深部的骨骼更易于进行活体成像观察。这种可及性使得无需侵入性外科手术即可通过二次谐波成像（SHG）直接观察组织微环境，包括骨组织本身10。其次，颅骨相对较薄且具有半透明特性，有利于更好地观察骨髓微环境中细胞的动态行为。这种透明性使得无需进行骨组织减薄或透明化处理，即可利用双光子显微镜、共聚焦显微镜和光片显微镜实现高分辨率成像。颅骨为活体成像实验提供了稳定、平坦且刚性的平台，可最大限度减少组织运动伪影，并在长时间观察过程中保持成像条件的一致性。这种稳定性对于长期追踪细胞行为及其随时间变化的响应尤为有利。此外，由于实验动物间颅骨结构相对较小且空间位置明确，具有良好的可重复性。这种结构的一致性有助于不同实验组之间的比较，并支持对成像数据进行可靠的统计分析。
本文介绍一种通过活体双光子显微镜成像小鼠颅骨骨髓（BM）的方法，采用新开发的头部固定植入装置11，该装置由生物相容性 Grade 23 钛合金（Ti6Al4V）3D 打印而成，配备由相同钛合金制成的专用且易于定位的硬质保护盖，可安全闭合伤口，避免感染或手术部位受损。该植入装置通过植入物支架将小鼠头部牢固、稳定地固定在显微镜载物台上，最大限度减少呼吸运动伪影，实现对同一区域的长期连续成像。文中提供了多色成像示例，展示骨髓微环境中的细胞与结构（SHG+ 骨表面；nestin-GFP+ 间充质细胞；cdh5-DSRED+、cdh5-GFP+ 或 pdgfb-GFP+ 内皮细胞）以及恶性造血细胞区室（tdTOMATO+ 急性髓系白血病细胞），同时使用荧光对比剂标记血管腔（dextran-TRITC）。在数小时至数天内测量的不同血管区域的血管参数，包括血管长度、直度、直径以及通透性，可为组织行为与健康状态提供重要信息。

<table><tbody><tr><td>Amira</td><td>赛默飞世尔科技™</td><td></td><td></td></tr><tr><td>麻醉</td><td></td><td></td><td>异氟烷 2% 至 3%</td></tr><tr><td>麻醉面罩（动物检测）</td><td>Minerve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>麻醉机</td><td>Minerve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>B6.Cg-Gt(ROSA)26Sortm9(CAG-tdTomato)Hze</td><td>杰克逊实验室</td><td>MGI:3809523</td><td></td></tr><tr><td>CalvariaVue</td><td>Ymetry</td><td>https://ymetry.com/site/head-fixion-implants/44-mouse-head-fixation-implant-for-calvaria.html</td><td></td></tr><tr><td>牙科水泥</td><td>Kemdent</td><td>SUN527</td><td></td></tr><tr><td>Dextran 500 kDa-Cy5&amp;nbsp;</td><td>Tebu-bio</td><td>DX500-S5-1</td><td>3 mg/只</td></tr><tr><td>70 kDa 葡聚糖-TRITC</td><td>Sigma</td><td>T1162</td><td>3 mg/只小鼠</td></tr><tr><td>消毒剂</td><td>MP-Labo</td><td>Dermidine-60ml</td><td></td></tr><tr><td>电动剃须刀</td><td>七叶树属</td><td>伊西斯</td><td></td></tr><tr><td>眼用凝胶</td><td>Ocry-gel</td><td>10g</td><td></td></tr><tr><td>Fiji&amp;nbsp;</td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td><td>v 17 5月30日</td><td></td></tr><tr><td>Fiji 插件用于与 Imaris 连接</td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td><td>Imaris_Bridge96.jar；ImarisBridgeUtils.jar</td><td></td></tr><tr><td>加热箱&amp;nbsp;</td><td>日期和</td><td>Thermacage</td><td></td></tr><tr><td>手术用加热垫</td><td>Minerve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>成像加热垫 &amp;和直肠探头</td><td>F. Haer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Imaris v9.6.0</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Intrasite 凝胶</td><td>Chinoxia</td><td>2390766</td><td></td></tr><tr><td>LAS AF 软件</td><td>Leica</td><td>LAS X 3.5.7.23225</td><td></td></tr><tr><td>药物</td><td></td><td></td><td>布托啡诺，0.01 mg/kg</td></tr><tr><td>目标物镜 HCX IRAPO L 25x/0.95 水镜</td><td>Leica</td><td>506374</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（1× PBS）</td><td>Sigma</td><td>P4417</td><td>高压灭菌器灭菌</td></tr><tr><td>SP8 DIVE FALCON 多光子显微镜&amp;nbsp;</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>立体毒性掩膜</td><td>Minerve</td><td>1201261</td><td></td></tr><tr><td>灭菌珠</td><td>Sigma</td><td>Z742555</td><td></td></tr><tr><td>手术器械</td><td>莫里亚</td><td>4877A; 2183</td><td></td></tr><tr><td>保温毯</td><td>SECURIMED</td><td>11006</td><td></td></tr><tr><td>拭子/组织</td><td></td><td></td><td>高压灭菌器灭菌</td></tr><tr><td>1 mL 26 G 注射器</td><td>BD Plastipak</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>温度控制器</td><td>F. Haer</td><td>40-90-5D-02</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Nes-EGFP)33Enik 小鼠&amp;nbsp;</td><td>杰克逊实验室</td><td>MGI:5523870</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Pdgfb-icre/ERT2)1Frut 小鼠</td><td>杰克逊实验室</td><td>MGI:3793852</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Cdh5-cre/ERT2)1Rha 小鼠</td><td>杰克逊实验室</td><td>MGI:3848982</td><td></td></tr><tr><td>超声耦合剂&amp;nbsp;</td><td>帕克实验室</td><td>Aquasonic 100</td><td></td></tr></tbody></table>

颅骨骨髓血管动态的活体纵向成像

Intravital Longitudinal Imaging of Vascular Dynamics in the Calvarial Bone Marrow

活体纵向荧光显微成像技术已成为研究动态生物学过程的关键方法，尤其在组织再生、肿瘤发生及治疗反应等领域具有重要意义。颅骨骨髓是一种高度动态的组织，其中造血命运与周围微环境密切相关，特化的血管会响应正常和病理状态下的造血活动。传统的固定组织成像仅能提供静态信息，往往限制了对这些过程的全面理解。
转基因动物（表达细胞特异性标记物）、活细胞示踪剂、成像设备的进步以及专用腔室的应用，已使活体显微镜技术成为研究动态生物学现象的关键工具。活体成像的一个应用是研究肿瘤血管行为及其治疗效应。一种新设计的3D打印钛合金头部固定植入物可稳定连接小鼠颅骨，适用于在多次成像过程中进行长期观察。
本方案可实现对颅骨骨髓中血管动态的时空分析，包括血管异质性的可视化与定量、血管与基质细胞及造血细胞相互作用的观察，以及血管功能参数的测量。此外，该技术还可利用双光子显微镜对已形成的血管网络进行可视化，并实现对治疗效应、干细胞动员以及化疗药物在体内的定位随时间变化的动态监测。总体而言，这种活体纵向成像方案为研究肿瘤血管行为和造血细胞动态提供了全面的平台，有助于深入理解调控这些生物学过程的复杂机制。

在 图1 和 图2，图示为钛合金头固定植入物的CAD模型，该植入物置于扫描得到的小鼠颅骨上，设计上贴合颅骨解剖结构，具有轻量化和生物相容性，能够牢固地固定在显微镜载物台上，确保细胞水平的稳定性。通过遵循本逐步操作方案，可将植入物稳定地固定于小鼠颅骨，并利用其燕尾结构牢固连接至显微镜支架，提供平坦的成像区域，便于液体保留及长时间活体观察。植入物可加装盖板以减少伤口损伤或感染风险，实现对同一组织区域连续数周的重复成像。小鼠苏醒后，佩戴头颅植入物可自由行走、进食并维持正常生活节律。
图3 显示了颅骨骨髓血管系统的平铺扫描图像，其由异质性的毛细血管组成，包括小动脉、过渡型毛细血管和窦状毛细血管。这些血管嵌入在一个复杂的组织微环境中，与骨表面及血管周围间充质细胞紧密接触。在白血病发展过程中，可在骨髓微环境中检测到单个孤立的白血病细胞，这些细胞紧邻血管分布；随着时间推移，其植入程度逐渐增加，在疾病晚期阶段充满整个颅骨。
图4 展示了如何利用本方案获得的图像提供可定量的数据，并可通过统计学方法进行分析。我们展示了如何使用IMARIS的filament工具对血管进行分割，并测量血管片段的长度和直径，以及其直度。这些参数之间的相关性也可进行评估。
图5 显示了急性髓系白血病（AML）进展过程中第4、7和10天颅骨骨髓（BM）两个不同位置的纵向成像结果，其中第10天时通过流式细胞术检测显示骨髓中白血病细胞的植入率约为50%（未展示）。我们可以观察到已有血管的尺寸发生了显著重塑，同时在与局部骨质丢失相关的特定区域出现了新血管的形成。
最后，在图6中，我们展示了如何通过延时成像将血管通透性作为动态参数进行测量，以显示不同血管屏障随时间保留荧光染料的能力。
<img alt="生物力学支架与显微镜装置，展示应力分析、组件及装配示意图。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图1"> 
图1设计与制备一种基于钛的生物相容性头部固定装置 (A) 植入物的组成部分 原位：1 观察环，2 粘接结构，3 稳定锚，4 尾部，5 榫槽，6 螺纹孔，7 前囟。B) 头部植入物与固定装置的连接：8 固定体，9 夹具，10 偏心杠杆，11 结构，12 显微镜物镜。C通过有限元模拟分析植入物在载荷作用下的变形，其中最大位移为 0.23 µm 对抗 0.04 N 的力。 (D保护盖及其螺钉 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig01large.jpg" target="_blank">请点击此处以查看此图的放大版本。</a>
<img alt="小鼠脑成像装置示意图，显示成像区域和实验研究" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图 2"> 
图 2：小鼠活体成像前的准备。 （A）成像前手术暴露头部植入物及成像区域的视图。 （B）头部植入物牢固固定于小鼠颅骨上。 （C）小鼠清醒状态下置于恢复笼中，头部植入物上已安装封闭盖。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig02large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="骨组织血管中VE-CAD免疫荧光，显微图像，细胞结构分析。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图3"> 
图3：颅骨血管系统的活体成像。（A）通过cdh5-DSRED标记的颅骨血管系统的平铺扫描z轴投影图像。（B）对所示区域进行放大，以描述由箭头指示的不同类型血管：红色箭头指示小动脉，橙色箭头指示过渡型毛细血管，黄色箭头指示窦状毛细血管。（i）和（ii）为X µm厚组织的z轴投影图像；（iii）为单层切片图像。（C）骨髓血管多个视野的单层切片图像，显示骨表面（SHG信号）、血管周围细胞（nes-GFP+）以及血管腔（dextran-TRITC标记）。（D）与急性髓系白血病（AML）进展相关的血管微环境。分别为AML发展早期（上图）和晚期（下图）的代表性切片图像。MLL-AF9型白血病细胞用tdTOMATO标记（红色箭头），血管用pdgfb-GFP标记（绿色箭头），骨表面通过SHG信号显示，巨噬细胞呈黄色（自发荧光，黄色星号）。比例尺 = 200 µm（A），40 µm（B、D下图），50 µm（C）。缩写：BM = 骨髓；GFP = 绿色荧光蛋白；AML = 急性髓系白血病；EC = 内皮细胞。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig03large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的高清版本。</a>
<img alt="微血管结构分析；血管直径、长度、直度；显微镜与散点图数据" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图4"> 
图4血管参数定量分析 (A通过 IMARIS 测量血管参数 丝状工具 在用TRITC-葡聚糖标记的小鼠骨髓血管的代表性z轴投影图像中，显示了线条和锥形结构的示意图。（B) 对所示图像中血管参数的定量分析 A. (C) 血管参数之间的相关性显示血管直度与长度呈负相关（Spearman r = -3523；p &lt; 0.0001；R2 = 0.2102）与直径（正相关；Spearman r = 0.4110；p &lt; 0.0001；R2 = 0.1299）。比例尺 = 100 µm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig04large.jpg" target="_blank">请点击此处以查看此图的放大版本。</a>
<img alt="骨组织中VE-cad+EC的显微镜结果，第4、7、10天的时间序列z-stack/切片分析。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig05.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Figure 5"> 
图5：AML发展过程中颅骨骨髓两个不同位置的纵向成像。 血管内皮细胞用cdh5-GFP标记，骨表面通过SHG显示，巨噬细胞呈黄色（自发荧光）。图中显示了原有血管的重塑（红色箭头）和新血管的形成（黄色箭头）。比例尺 = 100 µm。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig05large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="通过显微镜图像、分割示意图和渗漏图结果分析血管渗漏性血管。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig06.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图 6"> 
图 6：血管通透性。（A）通过 IMARIS 表面工具测量血管通透性的示意图。（B）同一区域在 1 小时内纵向成像的 Z 投影。（C）如 A 中所示区域内血管通透性的定量分析。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig06large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
补充图 S1：制备好的颅骨。 在正中平面上，创建一个与颅顶相切的轴，然后保存制备好的颅骨。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_1_JoVE67332R1_screenfile5_prepared_skull.jpg" target="_blank">请点击此处下载该文件。</a>
补充图 S2：间距为 2 mm 的平面图。如何在颅骨范围内创建一组等距平面（间距为 2 mm）。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_2_JoVE67332R1_screenfile4_plans_2mm_spaced.jpg" target="_blank">请点击此处下载该文件。</a>
补充图 S3：可见表面轮廓。 在颅骨平面上创建草图，并从前后向（AP）+6.5 至 -2 处绘制一个宽 6 mm（在 AP 0.0 处）的梨形样条曲线。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_3_JoVE67332R1_screenfile3_Observable_Surface_Contour.jpg" target="_blank">请点击此处下载该文件。</a>
补充图 S4：观察窗。在颅骨平面创建一个草图，并绘制一个0.5 mm厚的C形结构，连接至观察窗。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_4_JoVE67332R1_screenfile1_1.4.1.jpg" target="_blank">请点击此处下载该文件。</a>
补充图 S5：单击“新建研究”。 导航至 仿真 选项卡（如果可见），或转至 仿真 | 研究。在 研究 对话框中，选择 静态 作为 研究类型。单击 确定 以创建新研究。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_5_JoVE67332R1_screenfile2_clic_new_study.jpg" target="_blank">请点击此处下载此文件。</a>
补充图 S6：右键单击以创建网格。 在预期应力或变形较大的区域细化网格。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_6_JoVE67332R1_screenfile6_right_clic_create_mesh.jpg" target="_blank">请点击此处下载该文件。</a>

活体显微镜技术可实现对组织再生和肿瘤发生等动态生物学过程的研究。颅骨骨髓是一种高度动态的组织，为研究造血作用和血管功能提供了重要线索。通过使用生物相容性3D打印头部固定植入物，可实现重复的纵向成像，从而加深我们对组织动态变化及肿瘤微环境的理解。

活体纵向荧光显微成像技术已成为研究动态生物过程的关键方法，尤其在……

本研究利用活体显微镜技术，聚焦于骨髓大环境中血管动态变化的机制，旨在揭示血管在正常与病理造血过程中如何响应。我们采用先进的成像技术（如显微摄影）、转基因动物模型，并通过示踪剂分析，对活体组织中血管的动态变化进行可视化和定量分析。本研究的关键进展在于对实验方案进行了优化，以提升动物福利并符合“3R原则”。我们的纵向研究方法减少了手术步骤，显著降低了实验所需的动物数量。本方案通过使用双光子显微镜，解决了无毒、长期活体成像的需求，该技术可实现深层组织穿透，并对细胞行为与相互作用进行高分辨率可视化观察。采用3D打印的头部植入装置，可在纵向成像过程中极为便捷地定位目标区域，无需反复调整高度、角度或顺序。目前，我们正利用该方案追踪特定内皮细胞亚型及其在白血病发生和药物治疗过程中的响应，以更深入理解其在疾病发病机制中的作用。首先，启动分割软件并导入微计算机断层扫描（micro-CT）DICOM 文件以分离颅骨。采用基于阈值的分割方法，将骨组织与周围结构区分开来。对复杂或噪声较多的区域进行手动调整，以优化分割结果。在 3D Slicer 中导入 DICOM 文件并加载数据集。在轴向、矢状向和冠状向切片视图中观察 CT 切片。打开分割编辑器，单击“添加”以创建新的分割，然后再次单击“添加”以创建用于阈值分割的新片段。在分割编辑器面板中，点击阈值效果。调整下限和上限阈值滑块，或输入数值，以红色高亮显示分割区域。要将分割后的颅骨导出为 stl 文件，请切换到分割模块。确保已选中阈值分割的区域。在“导出/导入模型和标签图”部分，将导出类型设置为模型，文件格式设置为 stl，然后点击导出以保存文件。为在 CAD 中准备颅骨模型，首先将简化后的 stl 格式颅骨模型作为新零件或新模型导入 CAD 软件中。在正中矢状面内，创建一条与颅顶相切的轴线，然后保存制备好的颅骨模型。在颅顶平面内创建一个草图，并从前后向（AP）+6.5 至 -2 设计一个梨形样样条曲线。在 AP 0.0 处宽度为 6 毫米，该曲线将作为可观察的表面轮廓。设计植入物的尾部，确保其符合颅骨结构，以实现正确固定，同时兼顾可用空间。最后，制作保护盖，以便在不使用时保护观察窗。将麻醉后的小鼠置于设定为37摄氏度的加热垫上，并目视监测其呼吸频率。使用电动剃刀剃除小鼠头部的毛发，然后在小鼠眼睛上涂抹一滴眼用凝胶。确保完全去除所有毛发，以防止成像伪影并降低伤口感染的风险。现在，使用无菌镊子和剪刀在头皮中央区域做一个小切口，以暴露中央的骨性瘢痕。清除颅骨与头皮之间的结缔组织。在培养皿中混合足够的牙科水泥，制成糊状物。迅速将其涂抹至头部固定植入物的底部。在防止牙科水泥进入成像区域的前提下，将头部固定器放置在暴露的颅骨上，并使其固化。打开异氟烷气流，通向显微镜的立体定位面罩。现在，迅速将小鼠移至显微镜下。用一只手轻轻抬起小鼠的鼻子，同时小心地将小鼠的门齿插入面罩中，以确保异氟烷充分进入。用一只手固定小鼠的同时，另一只手轻轻将头部固定植入件的燕尾部分滑入固定夹持器中。用螺丝旋钮旋转半圈将其固定。接着，插入预先涂有水性凝胶的直肠探针，以监测小鼠体温。向头部成像腔内填充大量水性凝胶或磷酸盐缓冲液（PBS）。将水浸物镜降低至完全浸入水中，以在双光子激发过程中实现最佳激发和信号检测。移动 x、y 载物台和 z 轴驱动装置，聚焦于支架瘢痕中的中央骨组织。识别由骨表面和中央静脉标记的组织。关闭房间内的灯光，并将显微镜支架周围的盒子闭合。激活非TOSCAN探测器后，设置PMT1用于检测423至461纳米范围内的二次SHG信号，D2通道用于检测485至548纳米范围内的GFP荧光，D3通道用于检测551至645纳米范围内的TD D'Amato荧光。将偏移量保持在零。现在，将SHG的PMT增益设置为850伏，高D增益设置为100%。逐步增加红外激光功率，直到在三个通道中最低的通道上观察到动态范围为200个灰度级的图像。在采集软件中，定位包含骨髓腔隙的区域，该区域显示为被骨表面包绕的结构。为了识别不同的感兴趣区域（ROI），启动 Loss Navigator 并使用螺旋模式创建概览图像。单击单幅图像图标以记录选定的 ROI 位置，并在任务列表中为每个位置重命名。要获取 Z 轴层扫三维图像，选择 Z 轴层扫模式并将步进大小设置为 3 µm。取消选择“所有区域使用相同堆栈大小”选项，然后按“开始”以启动，按“结束”以完成。采集完成后，单击“重新定义堆栈”。按“开始”以启动图像采集，并将图像保存至相应文件夹中。为了测量动态特征（如血管通透性），将采集模式更改为XYZT以进行时间序列成像。在T模块中，将时间间隔调整为3分钟，持续时间设置为1小时。随后，以4毫克/毫升的浓度静脉注射100 µL的70 kDa Dextran TRITC，并开始图像采集。将小鼠转移至37摄氏度加热垫上的手术位置后，在颅骨上涂抹intrasite凝胶以保持其湿润。用特定盖板封闭头颅植入物的成像区域，并用螺丝小心固定盖板。将小鼠放入设定为37摄氏度的加热箱中，等待其苏醒。待小鼠完全恢复后，将其转移至动物房，饲养于洁净的笼具中，并提供水凝胶和环境丰富化物品。对于纵向采集实验，将眼用凝胶少量滴加至已安装头部固定装置的小鼠眼睛上。获取概览图像，操作方法如前所述。如有必要，使用加载并对齐图像模块重新对齐之前的图像和新图像。打开屏幕截图以在原始位置标记相应点。钛制头部固定植入物的CAD模型根据颅骨的解剖结构设计，以确保其能稳定地固定在显微镜载物台上，用于细胞水平的成像。植入物成功固定在小鼠颅骨上，能够在允许小鼠维持正常活动的同时实现长期稳定的成像。通过拼图扫描可视化颅骨骨髓血管系统，揭示了小动脉、过渡性毛细血管和窦状血管组成的复杂网络。定量血管分析实现了血管结构的分割，可测量血管直径、长度和直度，并分析其相关性。纵向成像捕捉到白血病进展过程中颅骨血管系统的进行性重塑，随时间推移观察到血管密度增加。通过动态评估血管通透性，发现荧光染料在不同时间点的滞留存在差异，显示出不同骨髓血管的通透性差异。

intravital-longitudinal-imaging-vascular-dynamics-calvarial-bone

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

颅骨骨髓血管动力学的活体纵向成像

采用活体显微技术追踪软脑膜微循环中血流动力学和炎症事件的时间与空间变化。...

使用封闭式颅窗对小鼠脑微循环进行活体显微成像

本文介绍一种简单且实用的脑血管铸型技术，操作简便，可用于成年小鼠脑部血管树的成像。...

成年小鼠脑血管铸型用于三维成像与形态学分析

造血干细胞与祖细胞（HSPCs）与骨髓微环境之间相互作用的性质尚不明确。通过定制的硬件改装和多步骤采集方案，可结合双光子显微镜与共聚焦显微镜进行成像 离体...

体内 成年小鼠颅骨骨髓中造血干细胞与祖细胞的四维追踪

单核细胞是先天免疫的关键调节因子，在外周单核吞噬细胞系统的更新以及炎症发生时发挥重要作用。本文描述了对小鼠颅骨骨髓进行实时成像以研究单核细胞动员机制的实验步骤。...

追踪小鼠骨髓单核细胞 体内

自体和同种异体骨移植是治疗严重颅面骨缺损的公认方法。然而，移植物成分对血管新生、细胞分化与骨形成之间相互作用的影响尚不明确。本文介绍一种多模态成像方案，旨在阐明移植物邻近区域血管生成与成骨作用之间的相互依赖关系。...

利用计算机断层扫描和光学成像技术研究颅骨自体移植与异体移植中成骨-血管生成偶联以评估骨整合

本文介绍了一种利用血管造影技术对脑内血管结构进行定量分析的方法 体内 和 离体...

利用双光子显微镜在HIV诱导的神经炎症小鼠模型中定量分析脑血管结构

本文描述了一种在淀粉样斑块积聚过程中追踪脑血管重塑的方法 体内...

纵向的 体内 脑血管成像：与中枢神经系统疾病的相关性

本文旨在介绍一种方法，该方法可在小鼠微计算机断层扫描后实现脑血管树的三维重建，并测定整个血管节段的体积，可用于量化蛛网膜下腔出血小鼠模型中的脑血管痉挛。...

一种用于量化蛛网膜下腔出血小鼠模型中脑血管痉挛的容积法

本文描述了利用双光子显微镜对活体小鼠颅骨骨髓中的巨核细胞及其血小板前体（proplatelets）进行成像的方法。...

体内 小鼠颅骨骨髓中巨核细胞与前血小板的双光子成像

本方案介绍了在麻醉小鼠中获取和分析脑包被周细胞的荧光钙成像以及邻近血管血流数据的步骤。这些技术可用于壁细胞生理学研究，并可调整用于研究任何细胞类型的钙瞬变。...

转基因小鼠脑周细胞钙成像与血流动力学成像 体内

白细胞和血小板的募集是动脉生成过程中侧支动脉有效生长所必需的关键组成部分。多光子显微镜是一种能够以高时空分辨率追踪细胞动态的高效工具。 体内...

多光子活体成像监测小鼠后肢模型中动脉生成过程中的白细胞募集

了解活体颅骨骨髓血管动力学研究方法，利用双光子显微成像技术追踪血管在正常与病理造血过程中的动态变化。该技术可长期可视化血管重塑，为癌症生物学和再生医学研究提供重要工具。

颅骨骨髓血管动态的活体纵向成像

探索更多视频