使用 杜仲 树皮提取物配制锌基纳米材料及其伤口愈合潜力

我们的研究重点是揭示生物工程金属纳米颗粒的伤口愈合潜力。我们旨在了解这些纳米颗粒如何影响愈合过程及其作用机制，以解决有关它们在组织修复中的治疗应用的关键问题。我们已成功开发出各种使用天然聚合物的纳米伤口敷料，展示了它们在多种伤口愈合应用方面的潜力，并推进了组织修复的创新方法。

这项研究将有助于确定体内模型中的潜在机制，并有助于开发具有生物相容性特性的伤口愈合材料，提高其在各种医疗应用中的有效性和安全性。首先，用剪刀将从杜仲树上收集的树皮切成小块。用双蒸水清洗切碎的树皮材料两次。

然后，在 37 摄氏度的阴凉条件下干燥树皮片 24 小时。将 20 克阴凉干燥的树皮转移到装有 220 毫升无菌双蒸水的锥形瓶中。然后，将培养瓶在 130 摄氏度下加热 20 分钟。

请注意，溶液的颜色在 10 分钟后变为浅黄色。之后，将含有聚异戊二烯的粗提取物储存在 4 摄氏度以备进一步使用。线状结构的形成表明提取物中存在聚异戊二烯。

在 500 mL 锥形瓶中，将 1 摩尔硝酸锌二水合物加入 50 mL 去离子水中。使用磁力搅拌器以 60 RPM 的速度连续搅拌溶液，直到硝酸锌二水合物完全溶解。然后，将 15 毫升杜仲树皮提取物滴加到 20 毫升一磨牙硝酸锌二水合物溶液中。

将覆盖的反应混合物放在磁力搅拌器上。打开它并将其设置为旋转三个小时。接下来，向反应混合物中滴加一种正常氢氧化钠溶液，将 pH 值调节至 9。

加入氢氧化钠，直到溶液变成乳白色，保持 pH 值低于 9，表明形成氧化锌纳米颗粒。然后，将合成的杜仲氧化锌纳米颗粒转移到 50 毫升离心管中，并在 4 摄氏度下以 100 G 离心 5 分钟。将洗涤过的杜仲氧化锌纳米颗粒收集在玻璃板上，并在 45 至 50 摄氏度下在热风烘箱中干燥一小时。

首先，在 96 孔板的每个孔中接种 1 乘以 10 倍到 4 个人脐静脉内皮细胞的幂。将板放入设置为 5% 二氧化碳和 37 摄氏度的培养箱中。对于细胞毒性评估，向 90% 汇合细胞中加入 10 微升各种浓度的杜仲氧化锌纳米颗粒。

将板在 37 摄氏度下在 5% 二氧化碳培养箱中孵育 24 小时。孵育后，小心地去除旧培养基，不要干扰细胞。向含有 90 μL 新鲜 DMEM 培养基的每个孔中加入 10 μL CCK-8 溶液，并如前所述孵育板。

然后，使用分光光度计在 450 纳米处测量用 CCK-8 溶液处理的细胞的吸光度。在含有 DMEM、补充有 10% FBS 和 1% 青霉素链霉素的 12 孔培养板中接种 1 乘以 10 倍的人脐静脉内皮细胞。将板放入设定为 5% 二氧化碳和 37 摄氏度的培养箱中。

使用无菌的 200 微升移液器吸头轻轻划过细胞单层，以创建宽度为 200 微米的代表性伤口。从孔中取出完全培养基后，用 1 毫升 PBS 轻轻洗涤单层，以去除分离的细胞。现在，将每毫升 0、10 和 20 微克的杜仲氧化锌纳米颗粒溶液与含有 10% FBS 的完全培养基混合到孔中。

将板在 37 摄氏度下在 5% 二氧化碳培养箱中孵育。使用倒置显微镜在 0 小时和 24 小时获取划痕伤口的显微照片。使用此处显示的公式计算伤口闭合的百分比。

杜仲氧化锌纳米颗粒在 24 小时后浓度高达 50 μg/mL 时对人脐静脉内皮细胞没有细胞毒性。用每毫升 20 微克杜仲氧化锌纳米颗粒处理的细胞伤口闭合显著增强，24 小时后显示 81.5% 闭合，而对照组为 16%。显微图像显示，与对照组相比，24 小时后 20 μg/mL 治疗组的伤口间隙宽度减小。