通过柠檬酸吸入建立咳嗽高敏感性小鼠模型

慢性咳嗽显著影响生活质量，导致患者外观窘迫，并带来巨大的经济负担。我们重点关注咳嗽的顽固性，尤其是咳嗽高敏感性的机制。我们建立了一种具有咳嗽高敏感性的小鼠模型，可用于进一步研究慢性咳嗽的发病机制。与其他动物模型（尤其是豚鼠）相比，该模型更易于维持、成本更低，且适合进行遗传学操作。本实验方案操作简便，模型更易于对照，MA 方法更具可行性。该模型对于深入研究慢性咳嗽的机制及潜在的新疗法也具有重要价值。

[旁白] 首先，将小鼠分别放入两个独立的暴露舱中，每个舱连接一台超声波雾化器。模型组暴露于0.1摩尔的柠檬酸气溶胶，对照组暴露于0.9%的生理盐水气溶胶。将雾化速率设置为最大值，即每分钟3毫升，并调整暴露时间为每日2小时，持续两周。每次暴露结束后，将小鼠放回各自的饲养笼中。设置非侵入性全身体积描记系统以测量咳嗽敏感性。连接暴露舱、流量传感器、偏置气流及其他组件。通过点击“校准”按钮对系统进行校准，以确保测量结果准确。随后，在系统软件中为小鼠创建一项新的咳嗽研究。配置研究参数：适应期1分钟，反应时间10分钟，化学溶液递送时间10分钟。之后，将每只清醒的小鼠单独放入各自的暴露舱中，确保每舱仅有一只小鼠。然后，向雾化器中加入1毫升适当的化学溶液（如生理盐水、柠檬酸或辣椒素），在程序开始后记录咳嗽事件的次数。准备气道高反应性测量所需的仪器。在系统软件中为小鼠创建一项剂量-反应研究。配置测量参数和任务序列：适应期1分钟，乙酰甲胆碱递送时间30秒，反应时间3分钟，恢复期1分钟。将每只清醒的小鼠单独放入各自的暴露舱中，确保每舱仅有一只小鼠。然后，向雾化器中加入50微升PBS或乙酰甲胆碱，并启动研究。记录Penh值，该值反映随着乙酰甲胆碱浓度增加所引起的支气管收缩反应。模型组在暴露1周后咳嗽敏感性显著升高，并在整个暴露期间持续存在。在实验过程中，模型组和对照组均未观察到死亡情况。暴露后，模型组的自发性咳嗽事件次数显著高于对照组。暴露后，模型组对生理盐水、柠檬酸和辣椒素诱导的咳嗽敏感性也显著升高。建模后，两组之间的气道高反应性保持相近，无显著差异。首先，将安乐死小鼠的眶窦血液收集至1.5毫升微量离心管中。将离心管置于冰上，于4摄氏度、3000 G条件下离心10分钟。使用移液器收集上清液并进行分装。然后，打开胸腔暴露气管，并将22号留置针插入气管。用0.5毫升预冷的PBS冲洗气管三次，收集支气管肺泡灌洗液。随后，将收集的液体于4摄氏度、500 G条件下离心10分钟。收集上清液，分装后于-80摄氏度保存。将沉淀物重悬于100微升PBS中。打开胸腔暴露肺组织，并小心取出肺组织。将收集的肺组织放入冻存管中。支气管肺泡灌洗液中的总炎性细胞计数及分类细胞计数在两组之间均未观察到显著差异。