利用数字平面测量法评估小鼠模型中伤口闭合动力学

我们的研究致力于通过建立受控的成像条件（包括光照位置、距离和操作流程的一致性）来标准化宏观伤口测量，旨在减少变异，提高临床前模型中伤口闭合测量的准确性。我们针对显微伤口测量中缺乏标准化的问题展开研究。目前的方法通常缺乏对照条件，导致数据不一致。

本方案提供了可适用的设置，可确保光照均匀、位置固定和距离一致，从而降低误差概率并提高可重复性。本方案通过标准化成像条件，消除了测量偏差的常见来源。与手动方法不同，该方案可确保不同实验间的一致性，实现准确比较，并减少伤口面积和周长测量中的变异性。

我们的结果通过提供标准化的方法，实现了更精确且可重复的伤口测量数据。这是评估治疗干预措施和临床前伤口研究的基础。首先，将带槽铝型材固定在屋顶侧边缘内侧区域。

将两块带有聚乙烯中心的矩形铝板插入屋顶型材的凹槽中，使其能够在两个型材中滑动。使用双面胶带将一根20厘米长的RGB LED灯管以45度角安装在第一块面板的底边下侧。然后，在每块屋顶面板上安装一块带有直径7.82厘米圆形切口的矩形泡沫板，以便安装相机镜头。

进行地面构造时，首先从40厘米×40厘米的白色泡沫板的每个角落切割出边长为2.54厘米的正方形。此步骤可确保泡沫板能够正确贴合于地面区域轮廓内。修整角落后，将泡沫板放置在地面区域轮廓的上方。

将钩面和毛面搭扣条粘贴至铝型材 A 和 B 上，以便于操作摄影亭内部组件。在两块泡沫纸板的同一侧，距边缘一厘米处固定粘合搭扣，并将纸板分别置于前墙和后墙上。使用硅胶将两块面板粘合至 C 和 D 侧，形成左侧和右侧侧壁。

将一个3D打印的麻醉面罩放置在预先切割好的40厘米×28厘米白色泡沫板矩形边缘11.5厘米处，以维持小鼠的吸入麻醉状态。然后将其粘贴至参考底板的中心位置。将3D打印的标尺块固定在小鼠底板左侧1厘米处，以提供用于数字图像处理的测量参考基准。

然后，将一根15厘米长的不锈钢刻度尺固定到尺子底座上，并将完整的参考基准装置安装在舱内，用于图像缩放。麻醉小鼠后，使用无菌的5毫米活检打孔器，以旋转方式施加压力，在肩胛骨水平位置制造一个真皮表皮切口。用锯齿状镊子取下皮瓣，并用虹膜剪刀剪除。

使用珠宝镊子将一块直径一厘米的圆形真皮膜置于伤口上，以防止污染和收缩。为拍摄伤口图像，将参考底座放置在摄影舱地板的中心位置。然后，将麻醉后的小鼠俯卧于小鼠平台之上。

安装拍照亭的前壁并拍摄宏观图像。要在 ImageJ 中打开创建的备份图像，请转到“文件”菜单，选择“打开”并进行搜索，然后点击“打开”。

现在将图像最大化，选择直线工具，然后使用加号键放大鼠标旁边的标尺。在标尺图像上绘制一条10毫米的直线。进入分析菜单并设置比例尺。

输入已知距离为10。将长度单位设置为毫米，然后单击“确定”。接下来，使用矩形工具选择伤口周围区域，宽度和高度均为150，并记录X和Y值。

然后，右键单击矩形并选择复制。为复制的图像命名，然后按回车键。在新图像中，连续按两次加号以放大。

要将图像分离为颜色通道，请转到图像、类型和RGB堆栈。在红色通道图像中，右键单击图像，选择复制，并在复制窗口中点击确定。然后，单击红色通道图像，选择图像、调整和阈值以进行分割。

选择默认值，然后点击应用以执行阈值处理。校正感兴趣区域（ROI），以确保伤口完全覆盖，并避免分割失真。要定义感兴趣区域的边界，请选择“编辑”，然后进入“选择”并选择“创建选区”。

然后，选择“编辑”，再选择“选择”，然后单击“添加到管理器”以将其添加到 ROI 管理器中。为验证分割效果，打开 ROI 管理器窗口并选择要查看的 ROI。单击“更多”、“平移”，输入记录的 X 和 Y 值，然后按“确定”。

将原始图像最大化，然后在 ROI 管理器中选择感兴趣区域（ROI）。使用方向键调整 ROI，直至其与伤口轮廓对齐。确认分割无误后，选择“分析”和“测量”以获取伤口的测量数据。

由于炎症反应，伤口闭合率在第2天初期上升至138.04%，随后逐渐下降，并进入修复与巩固阶段，第7天后观察到持续的伤口闭合。伤口边缘回缩距离在炎症期初期增加，但自第3天起开始减少，Gilman公式结果表明伤口逐渐收缩。