用于犬鼻免疫微环境采样的盐水灌洗

我们研究与放射治疗和患有鼻肿瘤的狗相关的免疫反应。我们正试图了解如何通过调节免疫系统来改善癌症患者对放射治疗的预后。免疫微环境的变化对于研究治疗效果很重要。因此，需要对微环境的细胞进行连续分析。然而，由于复杂的解剖结构和粘膜出血的倾向，通过重复活检对鼻腔组织进行取样可能具有挑战性。

盐水洗鼻技术允许对鼻腔的免疫微环境进行连续采样，同时将组织破坏降至最低。用洗鼻技术收集的细胞和蛋白质可以通过各种测定进行分析，以研究鼻免疫微环境随时间变化的状态。

手术前一天，用无菌生理盐水填充 520 毫升注射器。牢固地盖上注射器，然后将它们放入 37 摄氏度的培养箱中加热过夜。然后将麻醉的狗外卧放在治疗台上。将狗的头部调整为向下倾斜，自然舒适地离开桌子边缘，以促进最佳的洗鼻样本收集。给气管插管的袖带充气，以确保气道的紧密密封。对于洗鼻，在底部切下一根八根法国无菌红色橡胶导管，以紧贴在装有温盐水的预装 20 毫升注射器之一上。使用永久性记号笔标记导管的基端，以指示鼻孔入口处的起点。确认预定长度在鼻内跨越，尖端位于所需位置。接下来，切割导管尖端以匹配定义的鼻内导管长度，确保其落在鼻腔内的适当位置。要进行洗鼻程序，请指定一个人将导管送入鼻腔并给药，另一个人在样本离开鼻子时收集样本。将一个人放在狗的头部前面和下方，戴上手套。轻轻地将红色橡胶导管引导至鼻腔内侧，直到导管上的标记与鼻孔入口对齐。同时，另一个人将导管放在鼻孔下方的 50 毫升锥形管中。用一只手轻轻堵住对侧鼻孔。开始以缓慢、稳定的压力或脉冲输注将生理盐水注入鼻腔，同时保持狗的头部向下倾斜。将引流液收集在位于鼻孔下方的 50 毫升锥形管中。手术后，让狗从麻醉中恢复，同时保持头朝下外卧。现在记录收集的洗鼻液总量相对于输注的生理盐水总量。要处理样品，请在锥形管内轻轻涡旋或移液洗鼻样品，以打碎碎屑和细胞团块。将混合的样品通过 70 微米的细胞过滤器，以去除粘液中的大块碎片。将过滤后的样品以300G离心5至10分钟，形成细胞沉淀。使用移液器，小心地从离心机样品中吸出上清液。将上清液沉积到干净的管中，以便随后进行蛋白质分析。最后，将细胞沉淀重悬于PBS或感兴趣的细胞测定的首选溶液中。