Name: 从结核分枝杆菌中分离和分离培养滤液蛋白 （CFP） (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T12:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: 学习从结核分枝杆菌中分离培养滤液蛋白的方法，利用等电聚焦和SDS-PAGE技术获得高纯度蛋白组分。该方案有助于识别免疫原性蛋白，推动结核病诊断与疫苗研发。

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本研究中所用试剂和设备的详细信息见材料表。
1. 生长 结核分枝杆菌 以及培养滤液蛋白（CFPs）的制备
<ol>
	<li>Sauton液体培养基的制备
	<ol>
		<li>将以下组分加入 950 mL 蒸馏水中：甘油 30.0 mL；磷酸二氢钾（KH₂PO₄），1.7 g；L-酪氨酸，0.2 g；七水合硫酸镁（MgSO₄·7H₂O），0.5 g；一水合硫酸锰（MnSO₄·H₂O），0.01 g；氯化钠，0.1 g；氯化钙，0.02 g；以及溴百里酚蓝，0.03 g。2PO40.5 克；硫酸镁，0.5 克；柠檬酸，2.0 克；酪蛋白水解物，0.5 克；硫酸铁铵，0.05 克；谷氨酸钠，4.0 克。</li>
		<li>使用40%氢氧化钾调节pH至7.2（约5 mL/L）。</li>
		<li>加水定容至1 L，15 psi条件下高压灭菌20 min。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>分枝杆菌悬液的制备
	<ol>
		<li>转移菌落 结核分枝杆菌 在罗氏斜面（Lowenstein-Jensen斜面，ATCC 27294）上培养的H37Rv接种至2 mL Sauton液体培养基中。</li>
		<li>在无菌条件下，通过剧烈振荡玻璃珠来打散分枝杆菌菌团。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>启动分枝杆菌生长
	<ol>
		<li>将细菌悬液转移至含有10 mL Sauton液体培养基的McCartney瓶中。</li>
		<li>在37 °C下孵育该瓶2周。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>扩大培养规模
	<ol>
		<li>将培养好的菌液转移至1 L瓶中的200 mL Sauton培养基中。</li>
		<li>在37 °C摇床中孵育4周。</li>
		<li>将对数期培养物转移至含有2 L Sauton培养基的4 L锥形瓶中。</li>
		<li>在37 °C下静置培养额外4周，直至形成表面菌膜。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>收集培养滤液蛋白（CFPs）
	<ol>
		<li>通过离心收集培养物，离心条件为 1,000–1,500 x g 室温下孵育30分钟。</li>
		<li>通过0.45 µm真空过滤系统过滤上清液。</li>
		<li>使用截留分子量为10 kDa的切向流过滤系统浓缩含有CFP的滤液。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>储存收获的 CFP
	<ol>
		<li>使用市售的BCA法蛋白检测试剂盒测定蛋白含量。</li>
		<li>分装蛋白质，加入叠氮化钠至终浓度为0.2%，于-80 °C保存。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 制备型液相等电聚焦（IEF）
<ol>
	<li>蛋白样品的制备
	<ol>
		<li>将结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）CFP溶于60 mL等电聚焦分离缓冲液中，缓冲液含8 M尿素、1 mM二硫苏糖醇（DTT）、5%甘油、2%皂苷、2%两性电解质（pH 3.0–10.0与pH 4.0–6.0按1:4比例混合）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>设置等电聚焦系统
	<ol>
		<li>向阳极室加入0.1 M磷酸，向阴极室加入0.1 M氢氧化钠。</li>
		<li>按照制造商说明组装制备型等电聚焦电泳槽（参见材料表）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>进行等电聚焦
	<ol>
		<li>将最多350 mg蛋白上样至等电聚焦系统。</li>
		<li>在4 °C条件下，使用循环冷却水系统对蛋白进行聚焦。</li>
		<li>以恒定功率12 W电泳，直至电压稳定在约1400 V，随后继续运行30分钟。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>收集并分析组分
	<ol>
		<li>收集等电聚焦各组分，并测定其pH值。</li>
		<li>通过SDS-PAGE分析每份等分试样，并采用银染法显色蛋白。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 制备型SDS-PAGE及整胶洗脱
<ol>
	<li>SDS-PAGE 样品制备
	<ol>
		<li>将 IEF 组分与市售的 6x SDS-PAGE 上样缓冲液混合。</li>
		<li>在 95 °C 下加热混合物 5 分钟。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>制备型 SDS-PAGE 电泳
	<ol>
		<li>将最多 10 mg 蛋白质上样至一块 16 cm × 20 cm 的聚丙烯酰胺凝胶，该凝胶包含 4% 的浓缩胶和 12.5% 的分离胶。</li>
		<li>以 50 mA 的恒定电流进行电泳，直至染料前沿距凝胶底部 2 cm。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>从凝胶中洗脱蛋白质
	<ol>
		<li>用洗脱缓冲液（60 mM Tris，40 mM CAPS，pH 9.4）平衡凝胶 10 分钟。</li>
		<li>将凝胶转移至全凝胶洗脱仪中。</li>
		<li>以 250 mA 的恒定电流洗脱蛋白质，持续 1 小时。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>收集并分析各组分
	<ol>
		<li>将分离的蛋白质&#160;洗脱至 30 个独立的组分中，每个组分体积&#160;为 2.5 mL。</li>
		<li>按照生产商说明书，使用 BCA 蛋白定量法测定蛋白浓度。</li>
		<li>对每个组分中的 10 µg 蛋白质进行 SDS-PAGE 分析，并通过银染显色。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Gomez, M., Johnson, S., Gennaro, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+secreted+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis+by+a+bioinformatic+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Identification of secreted proteins of Mycobacterium tuberculosis by a bioinformatic approach.</a> Infect Immun. 68 (4), 2323-2327 (2000).</li>
<li>de Souza, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-accuracy+mass+spectrometry+analysis+as+a+tool+to+verify+and+improve+gene+annotation+using+Mycobacterium+tuberculosis+as+an+example%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">High-accuracy mass spectrometry analysis as a tool to verify and improve gene annotation using Mycobacterium tuberculosis as an example.</a> BMC Genomics. 9, 316(2008).</li>
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<li>Målen, H., Søfteland, T., Wiker, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+analysis+of+Mycobacterium+tuberculosis+H37Rv+culture+filtrate+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antigen analysis of Mycobacterium tuberculosis H37Rv culture filtrate proteins.</a> Scand J Immunol. 67 (3), 245-252 (2008).</li>
<li>Bekmurzayeva, A., Sypabekova, M., Kanayeva, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuberculosis+diagnosis+using+immunodominant%2C+secreted+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Tuberculosis diagnosis using immunodominant, secreted antigens of Mycobacterium tuberculosis.</a> Tuberculosis (Edinb). 93 (4), 381-388 (2013).</li>
<li>Rodríguez-Hernández, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+antigenic+biomarkers+for+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Zhejiang+Univ+Sci+B%22%5BJournal%5D)">Application of antigenic biomarkers for Mycobacterium tuberculosis.</a> J Zhejiang Univ Sci B. 21 (11), 856-870 (2020).</li>
<li>Mustafa, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+biological+characterization+of+Mycobacterium+tuberculosis-specific+ESAT6-like+proteins+and+their+potentials+in+the+prevention+of+tuberculosis+and+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Princ+Pract%22%5BJournal%5D)">Chemical and biological characterization of Mycobacterium tuberculosis-specific ESAT6-like proteins and their potentials in the prevention of tuberculosis and asthma.</a> Med Princ Pract. 32 (4-5), 217-224 (2023).</li>
<li>Rosenkrands, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+the+proteome+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Towards the proteome of Mycobacterium tuberculosis.</a> Electrophoresis. 21 (17), 3740-3756 (2000).</li>
<li>Jungblut, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+proteome+analysis+of+Mycobacterium+tuberculosis+and+Mycobacterium+bovis+BCG+strains%3A+Towards+functional+genomics+of+microbial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparative proteome analysis of Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium bovis BCG strains: Towards functional genomics of microbial pathogens.</a> Mol Microbiol. 33 (6), 1103-1117 (1999).</li>
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<li>Rodríguez-Hernández, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+antigenic+biomarkers+for+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Zhejiang+Univ+Sci+B%22%5BJournal%5D)">Application of antigenic biomarkers for Mycobacterium tuberculosis.</a> J Zhejiang Univ Sci B. 21 (11), 856-870 (2020).</li>
<li>Deenadayalan, A., Sundaramurthi, J. C., Raja, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+and+proteomic+analysis+of+preparative+isoelectric-focusing+separated+culture+filtrate+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological and proteomic analysis of preparative isoelectric-focusing separated culture filtrate antigens of Mycobacterium tuberculosis.</a> Exp Mol Pathol. 88 (1), 156-162 (2010).</li>
</ol>

Mycobacterium tuberculosis 的培养滤液蛋白（CFP）是多种不同蛋白质组分的复杂混合物，其浓度各不相同。蛋白质组学研究已在CFP中鉴定出多达1,314种蛋白质4,5。大量研究表明，CFP在调节免疫反应中发挥关键作用。具体而言，CFP在T细胞介导的细胞免疫应答4,5,6,7以及B细胞介导的抗体应答8,9,10,11中均具有不可或缺的作用。
<p class="jove...

大量研究强调了分泌蛋白在生长及免疫相互作用中的重要作用 结核分枝杆菌1. 上清液 M. tuberculosis 包含多种复杂的蛋白质和非蛋白质成分，是研究其生物学特性和免疫原性的重要资源。早期的蛋白质组学研究在培养滤液中鉴定出近450种蛋白质2，其中许多在引发针对结核病的免疫反应中发挥关键作用。鉴定这些具有免疫学意义的抗原对于开发创新的结核病诊断方法和疫苗至关重要。然而，由于结核病免疫反应的复杂性，该领域的研究进展面临挑战 M. tuberculosis 感染以及用于分离分枝杆菌蛋白的生化纯化方法的技术局限性。
已采用多种分离技术来解析结核分枝杆菌（M. tuberculosis）的蛋白质，这有助于检测含量较少但功能重要的蛋白质，并拓展了蛋白质组学研究的范围。理想的分离方法可将复杂的蛋白质混合物有效分离为数量有限的 distinct 组分。目前用于分离分枝杆菌蛋白质的两种广泛应用的方法是基于色谱和基于电泳的技术1,2。
色谱技术，包括亲和层析、离子交换层析和反相层析，十余年来一直是蛋白质分级分离的核心方法。这些方法已被广泛用于分离结核分枝杆菌（M. tuberculosis）的蛋白质3。然而，由于蛋白得率低以及非蛋白质组分的干扰等因素，可能影响后续的免疫学分析。这些局限性制约了色谱技术在鉴定具有免疫学意义的抗原中的应用。
为解决这些局限性，采用了一种基于二维电泳的分离方法。在第一维中，使用制备型等电聚焦（IEF）系统，根据蛋白质的等电点通过等电聚焦对其进行分离。在第二维中，利用制备型SDS-PAGE按分子量进一步分离蛋白质，随后使用全胶洗脱仪进行洗脱。
这种二维方法具有多项优势。它通过将培养滤液蛋白（CFP）分离成600个不同的组分，显著降低了其复杂性。此外，由于洗脱过程不会引入干扰细胞免疫学检测的成分，这些组分可直接用于免疫学分析4,5,6。
本方案详细介绍了用于免疫学分析的培养滤液蛋白的制备与分离方法6。

<table><tbody><tr><td>&amp;Auml;KTA flux 切向流过滤系统&amp;nbsp;</td><td>CYTIVA</td><td>29038437</td><td></td></tr><tr><td>两性电解质（pH 3.0 至 10.0）</td><td>BIO-RAD</td><td>1632094</td><td></td></tr><tr><td>两性电解质（pH 4.0 至 6.0）</td><td>BIO-RAD</td><td>1631143</td><td></td></tr><tr><td>BCA 蛋白检测试剂盒&amp;nbsp;</td><td>MERCK</td><td>71285-M</td><td></td></tr><tr><td>CAPS</td><td>MERCK</td><td>C2632</td><td></td></tr><tr><td>酪蛋白水解物</td><td>MERCK</td><td>65072-00-6</td><td></td></tr><tr><td>柠檬酸</td><td>MERCK</td><td>C0759</td><td></td></tr><tr><td>皂苷</td><td>MERCK</td><td>300410</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>MERCK</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>硫酸铁铵</td><td>HIMEDIA</td><td>GRM10944</td><td></td></tr><tr><td>甘油</td><td>MERCK</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>甘油&amp;nbsp;</td><td>MERCK</td><td>252859</td><td></td></tr><tr><td>罗氏斜面培养基（Lowenstein-Jensen 斜面）&amp;nbsp;</td><td>HIMEDIA</td><td>SL001</td><td></td></tr><tr><td>硫酸镁</td><td>MERCK</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>Millipore Stericup 快速释放真空过滤系统</td><td>MERCK</td><td>S2HVU11RE</td><td></td></tr><tr><td>磷酸&amp;nbsp;</td><td>MERCK</td><td>695017</td><td></td></tr><tr><td>磷酸二氢钾</td><td>MERCK</td><td>P0662</td><td></td></tr><tr><td>氢氧化钾&amp;nbsp;</td><td>MERCK</td><td>484016</td><td></td></tr><tr><td>制备型等电聚焦电泳装置（Rotofor）&amp;nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>170-2986&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>叠氮化钠&amp;nbsp;</td><td>MERCK</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>谷氨酸钠</td><td>MERCK</td><td>49621</td><td></td></tr><tr><td>氢氧化钠</td><td>HIMEDIA</td><td>MB095</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>MERCK</td><td>252859</td><td></td></tr><tr><td>尿素</td><td>MERCK</td><td>U5128</td><td></td></tr><tr><td>全胶洗脱装置（Whole Gel Eluter）&amp;nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>1651250</td><td></td></tr></tbody></table>

培养滤液蛋白（cfps）的分离与分级 结核分枝杆菌

Separation and Fractionation of Culture Filtrate Proteins (CFPs) from Mycobacterium tuberculosis

结核分枝杆菌（M. tuberculosis）分泌的蛋白质在结核病的致病机制、免疫调节及疾病进展中发挥着关键作用。了解这些蛋白质的组成与功能，对于发现可用于结核病诊断、疫苗研发和治疗干预的新生物标志物至关重要。本研究聚焦于培养滤液蛋白（CFPs）的系统性分离、分级和表征，以实现全面的免疫学和蛋白质组学分析。CFPs来源于在化学成分明确条件下培养的M. tuberculosis H37Rv菌株，以确保蛋白质表达的可控性。通过过滤纯化培养上清液，并利用中空纤维系统进行浓缩，保留分子量大于10 kDa的蛋白质。采用液相等电聚焦技术进行分级，根据蛋白质的等电点将其分离为20个不同的组分。进一步通过制备型十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离，并结合电洗脱技术，获得30个蛋白质组分。通过该方法获得的分级蛋白质为免疫学图谱分析和基于质谱的蛋白质组学分析提供了宝贵的资源。通过对分泌蛋白进行系统性分离与表征，本研究有助于识别结核病特异性蛋白质生物标志物，从而提高诊断准确性，并深化对M. tuberculosis致病机制的理解。

图1 展示了所制备的培养滤液蛋白（CFP）的复杂性。首先，将100 µg的CFP进行二维SDS-PAGE分析以评估其复杂程度。该分析显示CFP中存在近100个不同的蛋白质斑点（图1）。
每次运行收集的20个组分均通过SDS-PAGE进行分析。其中，三次不同运行的三个代表性组分如图2所示。
图3 显示了分离组分的pH分布，其范围从2.54到12.9。大多数组分（第5至第14组分）的pH值介于4到6之间，这是分枝杆菌蛋白主要集中所在的pH范围。各组分间pH值呈现逐渐升高的趋势（图3）。
首先使用SDS-PAGE对各组分进行分析。图4</st...

本方案描述了分泌蛋白的培养、收集与浓缩方法 结核分枝杆菌培养滤液蛋白（CFPs）经定量后，通过等电聚焦分离为20个组分，再利用制备型SDS-PAGE和电洗脱系统进一步分离为30个组分。

培养滤液蛋白（CFPs）的分离与分级 结核分枝杆菌

结核分枝杆菌（M. tuberculosis）分泌蛋白在结核病发病机制、免疫调节及疾病进展中发挥关键作用……

本研究旨在分离结核分枝杆菌的培养滤液蛋白，以鉴定参与免疫反应和疾病发生的关键蛋白组分，这可能有助于开发更有效的诊断方法或疫苗。我们试图确定哪些组分具有最强的免疫原性，以及它们如何促进细菌引发并维持感染的能力。近年来，电泳技术的进步使我们能够将高度复杂的蛋白质组分离为简单的组分，例如带正电荷的 pI 2 至 4 蛋白，从而实现精确的下游蛋白质组学和免疫学分析。蛋白质组学中的一个主要扩展性挑战是在电泳过程中样品上样量有限。上样过多的蛋白质，例如约350毫克或更多，可能导致蛋白质沉淀，从而影响分离效果。此外，电泳过程可能使蛋白质变性，导致其不适合后续需要天然构象蛋白质的功能研究或活性检测。利用我们的蛋白质抑制方法，我们成功鉴定了27种新的结核分枝杆菌特异性T细胞抗原。这些抗原在开发更精准的诊断工具和新一代结核病疫苗方面展现出巨大潜力。本实验方案通过将复杂蛋白质分离为定义明确且简化的蛋白质组分，解决了复杂蛋白质解析中的技术难题。这些组分可直接用于蛋白质组学和免疫学研究，有助于在无需进一步纯化的情况下更快地鉴定疾病特异性的生物标志物。首先，将指定试剂加入950毫升蒸馏水中，制备萨顿液体培养基。加水定容至1升，于15 PSI条件下高压灭菌20分钟。现在，将罗氏（Lowenstein-Jensen）斜面上培养的结核分枝杆菌菌落转移至2毫升萨顿（Sauton）液体培养基中。在无菌条件下，加入玻璃珠并剧烈振荡悬浮液，以打散分枝杆菌的菌团。为启动分枝杆菌的生长，将该菌悬液转移至含有10毫升萨顿液体培养基的麦氏（McCartney）瓶中。将瓶子在 37 摄氏度下孵育两周。将培养物转接到 1 升瓶中的 200 毫升 Sauton 培养基中，以扩大培养规模。将瓶子置于摇床中，并在 37 摄氏度下孵育四周。将对数期培养物转移至含有两升萨顿培养基的四升锥形瓶中。在37摄氏度静置条件下继续培养四周，直至形成表面菌膜。将培养物转移至离心管中，在室温下以1,000至1,500 ×g离心30分钟，收集菌体。使用0.45微米的真空过滤系统过滤上清液。然后，采用截留分子量为10千道尔顿的切向流过滤系统，浓缩含有培养滤液蛋白的滤液。使用市售的二辛可宁酸蛋白检测试剂盒测定蛋白含量。分装蛋白质，加入叠氮化钠至终浓度为0.2%，于-80摄氏度保存。将结核分枝杆菌培养滤液蛋白溶于60毫升等电聚焦（IEF）分离缓冲液中，缓冲液含8摩尔尿素、1毫摩尔二硫苏糖醇、5%甘油、2%皂苷和2%两性电解质。将阳极室加入0.1摩尔磷酸，阴极室加入0.1摩尔氢氧化钠。根据制造商的说明组装制备型等电聚焦电泳装置。将最多350毫克的蛋白质上样至等电聚焦系统中。使用循环冷却水系统，在4 °C条件下对蛋白质进行聚焦。施加12瓦的恒定功率，直至电压稳定在约1,400伏，随后继续维持30分钟。收集等电聚焦（IEF）组分并测定其pH值。通过SDS-PAGE分析每个等分试样。通过将IEF组分与市售的6X SDS-PAGE上样缓冲液混合，制备用于SDS-PAGE的样品。将混合物在95摄氏度加热5分钟。将最多10毫克蛋白质上样至一块16厘米×20厘米的聚丙烯酰胺凝胶中，该凝胶包含4%的浓缩胶和12.5%的分离胶。以50毫安的恒定电流进行电泳，直至染料前沿距离底部2厘米。然后将凝胶在洗脱缓冲液中平衡10分钟。将凝胶转移至全胶洗脱仪中。以250毫安的恒定电流电洗脱蛋白质，持续1小时。随后，收集约30份、每份2.5毫升的组分。按照制造商说明书，采用双辛可宁酸法测定蛋白质浓度。通过SDS-PAGE分析每个组分中的10微克蛋白质。该图像显示了二维SDS-PAGE分析结果，其中100微克培养滤液蛋白质产生了近100个不同的蛋白质点，表明蛋白质组成高度复杂。对不同分离实验中三个代表性组分进行的SDS-PAGE分析显示出不同的条带模式，证实了各样品间蛋白质组成的差异性。各分离组分的pH值从2.54逐渐升高至12.9，其中大部分蛋白质集中在pH值为4到6的组分中。对第12号等电聚焦全胶洗脱组分进行SDS-PAGE分析显示，每个组分含有1至3条蛋白质条带，证实蛋白质已成功分离并分辨为不同的条带。

separation-fractionation-culture-filtrate-proteins-cfps-from

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

从结核分枝杆菌中分离和分离培养滤液蛋白 （CFP）

来源：Gupta, S., Marcela Rodriguez, G. 铁限制条件下分枝杆菌产生细胞外囊泡的分离与表征。 J. Vis. Exp. (2019)本视频展示了从在模拟宿主环境的限铁条件下培养的结核分枝杆菌（Mycobacterium...

从Mycobacterium tuberculosis中分离含铁载体的细胞外囊泡

本视频演示了基于薄层色谱法分离分枝菌酸的技术。该技术根据分枝菌酸——存在于分枝杆菌细胞壁中的长链脂质——的极性差异实现不同类型分枝菌酸的分离。...

基于薄层色谱法分离分枝杆菌酸变体：一种根据极性分离分枝杆菌细胞壁脂质的方法

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使用超滤装置浓缩细菌培养滤液中的蛋白质

本视频演示了利用尺寸排阻色谱法（SEC）从结核分枝杆菌（Mycobacterium...

一种用于纯化分枝杆菌胞外囊泡的尺寸排阻色谱技术

本研究的目的是利用液相等电聚焦（IEF）方法，从复杂的植物提取物中分离和纯化具有生物活性的小分子化合物、多肽，以及从病原微生物中分离蛋白质。随后对分离得到的分子进行鉴定，并验证其生物活性。...

通过制备型等电聚焦（IEF）方法分离天然来源的生物活性小分子、多肽及微生物蛋白

快速高效地定量细胞内结核分枝杆菌（M.

用于结核病宿主导向疗法临床前测试的自动化培养系统

细菌会分泌携带生物活性分子的纳米级细胞外囊泡（EVs）。EV研究主要关注其生物发生机制、在微生物间及宿主-微生物相互作用和疾病中的作用，以及潜在的治疗应用。本文介绍了一种可放大的从多种细菌中分离EV的方法流程，以促进EV研究的标准化。...

可扩展的细胞外囊泡分离与纯化方法 大肠杆菌 及其他细菌

该方案描述了尺寸排阻色谱法，一种简便且可重复的富集技术 结核分枝杆菌 来自培养上清液的细胞外囊泡...

Mycobacterium tuberculosis 通过尺寸排阻色谱法富集细胞外囊泡

本方案详细描述了从无菌培养的分枝杆菌中富集天然的分枝杆菌胞外囊泡（mEVs）的方法 Mycobacterium smegmatis （耻垢分枝杆菌，Msm）以及如何设计并富集含有mCherry（一种红色荧光报告蛋白）的重组MsmEVs。最后，通过富集含有EsxA蛋白的MsmEVs验证了这一新方法。...

分枝杆菌天然及重组细胞外囊泡的富集

本文演示了结核分枝杆菌（Mtb）培养滤液（CF）的制备方法，该滤液是含有细菌分泌蛋白的培养基。Mtb通过分泌蛋白质来调控宿主的信号通路和免疫应答，这对致病过程至关重要。所制备的CF通过质谱分析，以鉴定所有分泌因子。...

制备 结核分枝杆菌 利用培养滤液研究结核病发病机制

本方案利用基于等电点的制备型等电聚焦电泳（IEF），将不溶性细胞壁和膜蛋白分离为简单的组分（每份含1-5个蛋白质），再按分子量进行分离。所得组分可直接用于免疫学和蛋白质组学分析，无需进一步纯化。...

细胞壁和细胞膜蛋白质的分离与分级 结核分枝杆菌 用于下游蛋白质分析

学习从结核分枝杆菌中分离培养滤液蛋白的方法，利用等电聚焦和SDS-PAGE技术获得高纯度蛋白组分。该方案有助于识别免疫原性蛋白，推动结核病诊断与疫苗研发。

培养滤液蛋白（CFPs）的分离与分级结核分枝杆菌

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培养滤液蛋白（CFPs）的分离与分级 结核分枝杆菌

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