Name: 通过缓慢逆行肾盂注射腺相关病毒载体 有效 且安全的基因递送至小鼠肾脏 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: 了解通过缓慢逆行肾盂注射AAV载体实现小鼠肾脏基因递送的高效安全方法。该技术可实现近端小管细胞的稳健转导，为肾脏疾病基因治疗研究提供可靠平台。

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我们感谢 Guangping Gao 和 James M. Wilson 提供 AAV9 辅助质粒，感谢 Katja Pekrun 和 Mark A. Kay 提供 AAV-KP3 辅助质粒。

H.N. 获得由 Takara Bio Inc. 和 Capsigen Inc. 授权的 AAV 相关技术的特许权使用费，担任生物技术公司的顾问，并是 Capsigen Inc. 的联合创始人，同时持有 Capsigen Inc. 和 Sphere Gene Therapeutics 的股份。

本报告详细阐述了腺相关病毒（AAV）载体经肾盂逆行缓慢注射作为基因递送至小鼠肾脏的局部给药方法。安全实施肾盂注射的关键步骤之一是调节AAV载体的注射速率，以避免对注射侧肾脏实质造成损伤。在先前关于水动力肾盂注射的报告中，100 µL质粒DNA溶液在仅3秒内被注入小鼠肾脏24快速注射对于提高细胞膜的瞬时通透性以实现有效的DNA转染至关重要，但可能导致组织损伤24为降低此风险，应缓慢注射载体 通过 使用注射泵以50 µL/min的受控速率进行RP注射。该操作可有效防止RP注射侧肾脏的组织损伤。
另一个关键步骤是在注射时完全阻断肾动脉和肾静脉，这可以增加肾脏对注射的腺相关病毒（AAV）载体的暴露，从而提高其转导效率。先前的研究表明，在小鼠中，若经肾实质注射（RP注射）时未阻断肾血流，会导致肾脏转导效率降低38。为确认肾动脉和肾静脉已正确夹闭，肾脏迅速变暗可作为有用的视觉提示。此外，已有研究证实，在注射AAV-KP1载体时，阻断肾...

在小型和大型实验动物中实现有效且安全的肾脏基因递送方法，为推进基础肾脏研究和探索创新治疗策略提供了关键机遇。建立此类方法对于多种肾脏疾病的基因治疗尤为重要。近期临床遗传检测技术的进步表明，单基因性肾脏疾病的患病率高于此前估计，影响约30%的慢性肾脏病（CKD）患者1。CKD以进行性肾损伤为特征，最终导致肾功能衰竭，目前尚无真正有效的疾病修饰疗法。血液透析和肾移植是当前可用的治疗手段，但这些方法存在局限性，显著影响CKD患者的生活质量2。因此，作为一种已在临床上证实可有效治疗遗传性疾病的强大策略，基因治疗近年来受到广泛关注，被视为治疗导致CKD的遗传性肾脏疾病的新途径3,4,5,6。该方法可直接针对疾病的根源，有望实现治愈。
尽管该领域不断取得进展，但将基因递送至肾脏在科研和治疗应用中仍然是一个重大挑战。由于肾脏结构复杂以及存在独特的生理屏障（包括由肾小球内皮细胞、肾小球基底膜和足细胞足突构成的肾小球滤过屏障），高效靶向肾脏细胞递送治疗性基因十分困难。目前已探索了多种靶向肾脏的基因递送策略，包括直接向肾皮质（RC）注射7,8、肾动脉（RA）注射9,10,11、肾静脉（RV）注射12,13,14、肾盂（RP）注射15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25，以及病毒或非病毒基因递送载体的静脉（IV）注射19,26,27,28,29,30，还有超声联合微泡介导的核酸递送技术31,32。这些方法展现出不同的转导效率或功能效果，结果往往不一致且难以解释（参见文献3,33,34,35综述）。目前肾脏基因递送技术仍不成熟，导致不同载体系统和方法之间难以进行直接比较。然而，局部递送方法能够将高浓度的递送剂直接送达肾脏，通常比全身性静脉注射获得更优的效果。此外，腺相关病毒（AAV）载体因其良好的安全性以及已被证实的临床转化潜力36,37，成为研究最广泛、最受认可的肾脏基因转移首选载体。
常见的AAV血清型及工程化衣壳在小鼠静脉注射后，已证明可有效转导肾脏中的系膜细胞和间充质细胞28,30,38。值得注意的是，近期研究表明，在肾病综合征和Alport综合征的小鼠模型中，静脉注射AAV9可有效转导足细胞，但在健康肾脏中未观察到该效应38,39；而静脉注射一种工程化的AAV2衣壳则可在健康和炎症状态下的小鼠肾脏中特异性靶向肾小球内皮细胞40。历史上，通过静脉途径转导肾小管一直具有挑战性。然而，最近研究发现，通过肾实质注射特定AAV衣壳（如AAV-KP1）41，可实现近端小管的转导效率，较基准AAV9衣壳提高一个数量级以上38。尽管仍需进一步优化，这些进展为肾脏基础研究和基因治疗开辟了新的途径，提供了以往无法实现的研究机会。
本文详细介绍了慢速逆行肾盂注射腺相关病毒载体作为向小鼠肾脏递送基因的有效且安全的方法38作为该技术的代表性示例，AAV-KP3被选为典型衣壳，因其被发现是六种衣壳之一（即AAV-KP1、AAV-KP2、AAV-KP3）41AAV-DJ42AAV2G943，以及 AAV2.7m844) 在小鼠经肾动脉注射后，与AAV9相比显示出增强的肾脏转导效果38值得注意的是，缓慢逆行RP注射的肾组织未表现出明显组织损伤，而此前报道的采用水动力法处理的组织则不同。23,24此外，AAV 小量制备载体45 通过快速简单的离心超滤法粗略纯化（即CU AAV载体）所获得的肾脏转导水平，在相同载体基因组滴度给药条件下，约为经标准氯化铯（CsCl）密度梯度超速离心法纯化的AAV载体（即CsCl AAV载体）所能达到水平的70%。因此，本文所提出的方法与观察结果为致力于增强小鼠乃至更大动物肾脏基因递送的研究人员提供了宝贵且实用的资源。

<table><tbody><tr><td>0.45 &amp;mu;m PVDF 注射器滤器</td><td>MilliporeSigma</td><td>SLHVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL 微量离心管&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 聚丙烯管</td><td>康宁</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>16% 甲醛</td><td>电子显微镜科学公司</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>250 mL 离心瓶</td><td>Fisher Scientific</td><td>055641S24</td><td></td></tr><tr><td>2F 硅胶管</td><td>Sai Infusion Technologies</td><td>SIL-2-50&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>25G 蝴蝶针</td><td>Medex Supply</td><td>26708</td><td></td></tr><tr><td>2-甲基丁烷</td><td>MilliporeSigma</td><td>MX0760</td><td></td></tr><tr><td>2x qPCR反应缓冲液</td><td>Fisher Scientific</td><td>43-676-59</td><td>Power SYBR Green PCR Master Mix</td></tr><tr><td>30G针头</td><td>Becton-Dickinson &amp;和公司</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 聚丙烯管</td><td>康宁</td><td>430291</td><td></td></tr><tr><td>5-0 单股缝合线</td><td>Ethicon</td><td>Y463G</td><td></td></tr><tr><td>5 M NaCl</td><td>Lonza</td><td>51202</td><td></td></tr><tr><td>6-0 可吸收缝合线</td><td>Ethicon</td><td>J489G</td><td></td></tr><tr><td>7.5% Mini-PROTEAN TGX 预制胶&lt;br/&gt; 蛋白凝胶，10孔，30 &amp;micro;L</td><td>伯乐（Bio-Rad）</td><td>4561023</td><td></td></tr><tr><td>Amersham ImageQuant 800 Western&lt;br/&gt; 印迹成像系统（Cytiva）</td><td>Cytiva</td><td>29459405</td><td></td></tr><tr><td>Amicon 100 kDa 截留分子量，15 mL 离心管</td><td>Millipore Sigma</td><td>UFC910024</td><td></td></tr><tr><td>抗水通道蛋白2（AQP2）抗体</td><td>Abcam</td><td>ab199975</td><td>一种集合管细胞的标记物</td></tr><tr><td>抗Na-K-2Cl共转运蛋白2&lt;br/&gt; (NKCC2) 抗体</td><td>StressMarq Biosciences</td><td>SPC-401</td><td>粗升支的标记物&lt;br/&gt; 细胞</td></tr><tr><td>抗兔 IgG Alexa Fluor 647&lt;br/&gt; 抗体</td><td>杰克逊免疫研究实验室</td><td>111-605-144</td><td></td></tr><tr><td>抗威尔姆斯瘤1（WT1）抗体</td><td>Abcam</td><td>ab89901</td><td>足细胞的标记物</td></tr><tr><td>Beckman Coulter OptiSeal 管&lt;br/&gt; 聚丙烯，29.9 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9691210</td><td></td></tr><tr><td>Beckman Coulter OPTISEAL 管</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9611575</td><td></td></tr><tr><td>苯佐那酶</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1016970001</td><td></td></tr><tr><td>牛血清白蛋白（BSA）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5470</td><td></td></tr><tr><td>离心超滤管</td><td>MilliporeSigma</td><td>UFC9100</td><td>Amicon 100 kDa MWCO，15 mL</td></tr><tr><td>陶瓷珠管</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-340-154</td><td></td></tr><tr><td>氯化铯</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3032-1KG</td><td></td></tr><tr><td>施加压力的钳子</td><td>Fine Science Tools</td><td>00071-14</td><td></td></tr><tr><td>闭环加热垫</td><td>Stryker Medical</td><td>8002-062-012</td><td></td></tr><tr><td>棉签</td><td>Puritan</td><td>806-WC</td><td></td></tr><tr><td>盖玻片</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-541B</td><td></td></tr><tr><td>冷冻切片机</td><td>Tanner Scientific</td><td>TN50</td><td></td></tr><tr><td>弯头镊子</td><td>精细科学工具</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>弯头型微血管夹</td><td>Kleinert-Kutz</td><td>65145</td><td>肾动脉和肾钳&lt;br/&gt; 静脉</td></tr><tr><td>透析盒</td><td>Fisher Scientific</td><td>PIA52976</td><td></td></tr><tr><td>DNA提取试剂盒</td><td>Qiagen</td><td>57704</td><td>QIAamp MinElute病毒离心柱试剂盒</td></tr><tr><td>D-山梨醇</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6021-1KG</td><td></td></tr><tr><td>杜尔贝科改良伊格尔培养基-&lt;br/&gt; 高葡萄糖</td><td>康宁</td><td>15-013-CV</td><td>DMEM-高糖（4.5 g/L）</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-575-020</td><td></td></tr><tr><td>乙醇</td><td>Decon Laboratories</td><td>2716GEA</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清（FBS）</td><td>VWR</td><td>89510-186</td><td></td></tr><tr><td>气密性玻璃注射器</td><td>Hamilton</td><td>1710 TLL</td><td></td></tr><tr><td>戊二醛溶液</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6257</td><td></td></tr><tr><td>热疗泵</td><td>Kent Scientific</td><td>HTP-1500</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H4034-100G</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>英吉诺</td><td>H3570</td><td></td></tr><tr><td>匀浆器</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-340-163</td><td></td></tr><tr><td>人胚肾（HEK）293&lt;br/&gt; 细胞</td><td>安捷伦</td><td>240073</td><td></td></tr><tr><td>冰桶</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-210-104</td><td></td></tr><tr><td>输注注射泵</td><td>哈佛仪器</td><td>70-4507</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>Piramal Critical Care</td><td>NDC 66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>L-谷氨酰胺</td><td>Fisher Scientific</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>液体阻隔笔</td><td>Ted Pella</td><td>22309</td><td></td></tr><tr><td>刀豆四棱豆凝集素（LTL）-&lt;br/&gt; 荧光素</td><td>Vector Laboratories</td><td>FL-1321-2</td><td>近端小管的标记物</td></tr><tr><td>氯化镁（MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;)</td><td>MilliporeSigma</td><td>M1028</td><td></td></tr><tr><td>美洛昔康</td><td>VetOne</td><td>NDC 86136-012-10</td><td>镇痛剂</td></tr><tr><td>显微镜玻片</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>封片剂</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>持针器</td><td>精细科学工具</td><td>12501-13</td><td></td></tr><tr><td>OCT 化合物</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>眼用软膏</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>NDC 24208-313-34</td><td></td></tr><tr><td>PE-10聚乙烯管</td><td>BD</td><td>427401</td><td>内径：0.28 mm</td></tr><tr><td>青霉素 &amp;& 链霉素混合液</td><td>Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS）</td><td>Fisher Scientific</td><td>10010-049</td><td></td></tr><tr><td>塑料冷冻模具</td><td>Sakura Finetek</td><td>4566</td><td></td></tr><tr><td>泊洛沙姆 188 非离子型表面活性剂&lt;br/&gt; (10%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>24-040-032</td><td></td></tr><tr><td>聚乙二醇 8000</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP233-1</td><td></td></tr><tr><td>聚乙烯亚胺（PEI）</td><td>Polysciences</td><td>23966</td><td></td></tr><tr><td>聚维酮碘</td><td>Ricca Chemical Company</td><td>395516</td><td></td></tr><tr><td>Power Blotter&amp;ndash;半干式转膜&lt;br/&gt; System</td><td>Fisher Scientific</td><td>PB0010</td><td></td></tr><tr><td>蛋白酶K溶液</td><td>Fisher Scientific</td><td>25530049</td><td></td></tr><tr><td>兔抗腺相关病毒&lt;br/&gt; 病毒（AAV），VP1，VP2，VP3</td><td>美国研究产品公司</td><td>03-61084</td><td></td></tr><tr><td>Sarkosyl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP234-500</td><td></td></tr><tr><td>带螺帽的2 mL离心管</td><td>康宁 Axygen</td><td>SCT-200-SS-O-S</td><td></td></tr><tr><td>银染试剂盒</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PROTSIL1-1KT</td><td></td></tr><tr><td>氯化钠（NaCl）</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271</td><td></td></tr><tr><td>磷酸氢二钠&lt;br/&gt; (Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;)</td><td>MilliporeSigma</td><td>S0876</td><td></td></tr><tr><td>磷酸二氢钠&lt;br/&gt; (NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;)</td><td>MilliporeSigma</td><td>S0751</td><td></td></tr><tr><td>山梨醇</td><td>MilliporeSigma</td><td>S6021</td><td></td></tr><tr><td>标准型持针钳</td><td>精细科学工具</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>无菌手术巾</td><td>SAI Infusion Technologies</td><td>PSS5-1519</td><td></td></tr><tr><td>直型微血管夹</td><td>精细科学工具</td><td>00396-01</td><td>输尿管夹</td></tr><tr><td>蔗糖</td><td>Fisher Scientific</td><td>S5</td><td></td></tr><tr><td>手术剪刀</td><td>精细科学工具</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>T225 培养瓶</td><td>康宁</td><td>431082</td><td></td></tr><tr><td>Technocut 手术刀 #11</td><td>Myco Medical Supplies Inc.</td><td>6008T-11</td><td></td></tr><tr><td>组织镊</td><td>罗博兹外科手术器械</td><td>RS-5155</td><td></td></tr></tbody></table>

高效且安全的小鼠肾脏基因递送 通过 腺相关病毒载体的缓慢逆行性肾盂注射

Effective and Safe Gene Delivery to the Mouse Kidney via Slow Retrograde Renal Pelvis Injection of Adeno-Associated Virus Vectors

有效方法的开发 体内 将基因递送至肾脏的工具与方法对于推动肾脏基础研究及肾脏疾病的基因治疗至关重要。此外，随着基因检测技术的进步，单基因肾脏疾病的检出率不断提高，这进一步凸显了基因治疗在治疗甚至治愈难治性遗传性肾脏疾病方面的潜力。在这一领域，腺相关病毒（AAV）载体因其作为高效基因递送平台的优异性能而受到越来越多关注 体内 基因递送；然而，针对肾脏中每一种具有治疗意义的细胞类型，腺相关病毒（AAV）载体介导的基因递送最有效且最安全的方法尚未完全确立。本文详细描述了AAV载体慢速逆行肾盂（RP）注射的方法，并展示了当选用合适的AAV衣壳时，该方法在小鼠肾脏中具有高效的转导潜力。此外，该方法不仅适用于标准的氯化铯超速离心纯化的AAV（CsCl AAV）载体，也适用于通过超滤离心制备的AAV（CU AAV）载体小量制备物，后者可利用无需专业AAV载体技术的简便方法快速制备。例如，本研究证明，通过慢速RP注射CsCl和CU AAV-KP3载体均可在小鼠肾脏近端小管中实现高效转导，且未见明显组织损伤，而此前报道的水动力学方法则不可避免地导致组织损伤。因此，本研究强调，选择特定AAV衣壳衍生的载体进行慢速逆行RP注射是一种有效且安全的肾脏基因递送方法。该方法可广泛应用于包括基因治疗研究在内的多种肾脏研究领域。使用CU AAV载体小量制备物将显著提高实验通量，并提升获取初步数据和关键研究见解所需的时间与成本效率。

最近一项研究发现，与尾静脉注射AAV9相比，有一小部分AAV衣壳在经肾动脉注射后表现出显著增强的肾脏转导能力38。该小部分包括AAV-KP3，这是一种通过DNA改组技术生成的嵌合型AAV衣壳41。因此，本研究选择AAV-KP3进行肾动脉注射，并以AAV9作为对照基准。AAV9-CAG-tdTomato载体（AAV9）和AAV-KP3-CAG-tdTomato载体（KP3）均在HEK293细胞中通过无腺病毒的质粒转染法生产，并采用CsCl密度梯度超速离心法（CsCl AAV）或使用100 kDa截留分子量滤膜的离心超滤法（CU AAV）进行纯化。CsCl AAV的制备流程已有文献报道47。
简而言之，含有细胞沉淀的5天培养基在-80 °C冷冻（步骤1.3.11）后被解冻，并进行聚乙二醇（PEG）沉淀、Sarkosyl重悬、粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）核酸酶处理以及两轮氯化铯（CsCl）密度梯度超速离心。通过折射率和D...

本报告详细介绍了腺相关病毒载体的局部注射方法 通过 小鼠肾脏中肾盂的有效且安全的基因转导

开发有效的体内工具和方法以实现肾脏基因递送，对于推动肾脏基础研究及肾脏相关疾病的基因治疗至关重要。

我们的目标是利用腺相关病毒载体开发出将基因有效递送至肾细胞的方法。这将推动肾脏基础研究的发展，并有助于开发针对肾脏疾病的新型基因疗法。目前面临的主要挑战是缺乏向关键肾细胞类型（如肾小管和足细胞）有效递送基因的方法，这是由于肾脏结构复杂，限制了靶向肾脏的腺相关病毒基因治疗的进展。我们已证明，通过根据疾病背景选择合适的腺相关病毒衣壳和给药途径，可实现向肾细胞（包括肾小管和足细胞）的有效基因递送。使用5%山梨醇PBS稀释腺相关病毒载体溶液。将稀释后的溶液置于冰上。使用持针器弯曲并折断30号针头的针尖部分。在体视显微镜下，将30号针头的针尖、一段已预先连接15厘米硅胶管的4厘米长PE10管、另一根30号针头以及一支无泄漏玻璃注射器依次连接。将连接好的无泄漏玻璃注射器安装至推注式注射泵上。使用输注注射泵，将 90 微升的载体溶液吸入气密式玻璃注射器中。将注射泵的输注模式设置为目标体积 50 微升、流速 50 微升/分钟。接着，将麻醉后的小鼠置于与维持在 37 摄氏度的热疗泵相连的闭环加热垫上，呈侧卧位。用无菌手术巾覆盖小鼠。使用无菌手术刀，在靠近左肾的肋脊角水平处做一厘米长的皮肤切口。沿与皮肤切口相同长度切开下方的肌肉层。然后用手指轻轻按压腹部，避免直接接触肾脏，以通过切口暴露肾脏。仔细去除少量周围脂肪组织，直至肾盂显现为一小片白色区域。先用直型微血管夹夹闭输尿管。然后使用弯型微血管夹将肾动脉和肾静脉一起夹闭。用弯头镊子将30号针头插入盆腔约3毫米处。使用输注注射泵以每分钟50微升的流速，在一分钟内开始注射50微升的载体溶液。保持针头和夹钳位置不动5分钟，以增强肾脏对载体的暴露。然后移除输尿管和血管夹钳。在撤出针头的同时，用棉签按压注射部位以施加压力。轻轻地将肾脏重新放回腹腔内。然后用6-0可吸收缝线缝合肌肉层，再用5-0单丝缝线缝合皮肤。最后，于小鼠背部皮下注射1毫升生理盐水以提供液体支持。粗裂解液中载体基因组的浓度相对较低，AAV9 和 KP3 制剂的载体基因组浓度均约为每毫升 10 的 10 次方个载体基因组；而经过最终离心超滤纯化的 AAV9 和 KP3 制剂则显示出较高的载体基因组滴度，分别为每毫升 3.2 乘以 10 的 13 次方和每毫升 8.8 乘以 10 的 12 次方个载体基因组。采用氯化铯纯化的 AAV9 和 KP3 进行银染 SDS-PAGE 分析，结果显示 VP1、VP2 和 VP3 三条明显条带，背景杂带极少，表明纯度较高。虽然在上样量较高时，离心超滤纯化的样品出现蛋白拖尾现象，但在较低上样量下，VP 条带变得清晰可辨。肾盂注射两周后，经离心超滤的KP3载体可有效转导肾近端小管，而经离心超滤的AAV9载体对肾小管的转导作用有限，主要局限于肾小球系膜细胞。定量PCR显示，注射经离心超滤KP3载体的肾脏中载体基因组拷贝数高出73倍。KP3载体还可转导集合管细胞，表现为与水通道蛋白-2（Aquaporin-2）染色共定位，而AAV9主要靶向与NKCC2共染色的髓袢升支粗段细胞。与AAV9相比，KP3显著降低了脱靶肝脏转导。注射KP3载体的肾脏未观察到明显的组织学损伤。我们采用的缓慢肾盂注射方法可提高局部腺相关病毒载体浓度，从而实现对多种难以通过全身给药靶向的肾脏细胞类型的高效转导。通过利用全身性和肾盂注射途径，我们旨在鉴定出能够有效且选择性地转导靶向肾脏细胞类型的腺相关病毒衣壳及其最佳给药途径。

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生物学

通过缓慢逆行肾盂注射腺相关病毒载体 有效 且安全的基因递送至小鼠肾脏

在本视频中，我们展示了基于重组腺相关病毒的基因递送技术在小鼠幼崽中的应用。该方法有助于研究靶向细胞中的基因表达。...

基于重组腺相关病毒的基因递送：一种用于转基因递送及在啮齿类动物模型中实现心脏特异性表达的技术

来源：Pourshafie, N., 等. 利用重组腺相关病毒9型系统性递送microRNA治疗啮齿类动物神经肌肉疾病. J. Vis. Exp.

在脊髓延髓肌萎缩症小鼠模型中注射重组腺相关病毒载体

将肿瘤细胞植入其起源器官可作为评估新型疗法的一种有效临床前模型。MB49...

用于基因递送研究的原位膀胱癌模型

所述的耳后手术入路可实现快速、直接地将药物递送至小鼠耳蜗的鼓阶，同时最大限度减少出血量和动物死亡率。该方法可通过圆窗膜向新生后小鼠递送分子、药物及病毒，用于耳蜗治疗。...

通过圆窗膜进行病毒介导的基因递送至小鼠内耳的手术方法

本文描述了一种制备重组腺相关病毒9型（rAAV9）载体的方法，用于在小鼠心脏中调控基因表达。...

制备rAAV9以在小鼠心脏中过表达或敲低基因

本文描述了在神经肌肉疾病的小鼠模型中，使用重组腺相关病毒9型递送microRNA的方法。在小鼠中单次外周给药即可在肌肉和运动神经元中实现miRNA的持续过表达，为在活体（in...

利用重组腺相关病毒9型系统性递送微小RNA治疗啮齿类动物神经肌肉疾病

本研究的目的是在成年小鼠中利用一种新型的软膜下基因递送技术，开发并验证脊髓腺相关病毒9型（AAV9）介导的基因递送的有效性和安全性。...

成年小鼠脑膜下腺相关病毒9（AAV9）载体递送

本方案描述了一种通过肾盂将质粒DNA注射到小鼠肾脏中，以在肾脏内特异性表达外源基因的方法。...

水动力肾盂注射法实现肾脏内非病毒蛋白表达

我们介绍一种将DNA质粒递送至小鼠膀胱尿路上皮细胞的新方法 体内...

通过电穿孔法将质粒DNA递送至小鼠膀胱尿路上皮的新方法

本文详细介绍了一种优化的小鼠侧尾静脉注射方案，用于在成年小鼠中系统性给予腺相关病毒（AAV）。此外，我们还描述了常用的检测方法，以评估AAV的转导效率。...

通过侧尾静脉注射在成年小鼠中稳定递送腺相关病毒

本方案描述了通过脾内注射AAV8递送的短发夹RNA，可实现与门静脉注射相同的肝脏基因敲低效率，且操作更为简便，并显著降低围手术期和术后死亡率及并发症发生率。...

通过脾内注射腺相关病毒8型（AAV8）递送的短发夹RNA实现肝脏高效基因沉默

了解通过缓慢逆行肾盂注射AAV载体实现小鼠肾脏基因递送的高效安全方法。该技术可实现近端小管细胞的稳健转导，为肾脏疾病基因治疗研究提供可靠平台。

高效且安全的小鼠肾脏基因递送通过腺相关病毒载体的缓慢逆行性肾盂注射

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