Use of <em>In Vivo</em> Assembly for High-efficiency Plasmid Construction

Hannah G. Braun; Jenny-Lee Thomassin

doi:10.3791/67870

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Bioengineering

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JoVE Journal Bioengineering

Use of In Vivo Assembly for High-efficiency Plasmid Construction

体内组装用于高效质粒构建

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06:25 min

February 7, 2025

DOI: 10.3791/67870-v

Hannah G. Braun¹, Jenny-Lee Thomassin¹

¹College of Medicine, Department of Biochemistry, Microbiology, and Immunology,University of Saskatchewan

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

体内组装是一种不依赖连接的克隆方法，它依赖于细菌中内在的 DNA 修复酶通过同源重组组装 DNA 片段。该方案既省时又省钱，因为需要的试剂很少，克隆效率可高达 99%。

我的博士研究重点是研究细菌分泌的蛋白质。我特别想了解这些分泌的蛋白质中的一些是否对引起人类感染很重要。使用最近分离的临床细菌的一个主要挑战是它们的抗生素耐药性，这阻碍了依赖于抗生素选择的分子遗传技术，例如基因缺失和遗传互补。

这种克隆方案更快、更具成本效益，因为 IVA 在大肠杆菌转化之前无需使用专用酶和连续酶促反应进行质粒组装。首先，在计算机系统上启动专门的 DNA 分析软件。人工组装所需的质粒。

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