朊病毒安全实验室滑动测试

我们的多学科小组正在努力了解传染性蛋白质朊病毒如何执行复杂的生物任务。我们还对朊病毒如何在环境中持续存在数年到数十年感兴趣。在朊病毒净化程序之后，没有确定朊病毒灭活功效的可靠方法。

我们正在努力通过我们的研究来解决这个问题。拭子方法与 RT-QuIC 相结合，允许对各种表面进行采样以检测朊病毒接种活动。这可用于在实验室、临床或环境中检测表面相关的朊病毒。

我对了解朊病毒如何与表面相互作用以及表面结合的朊病毒建立感染的要求感兴趣。首先，确定并标记适当的拭子监测区域。为每个确定的区域准备两个 1.5 毫升微量离心管，并向第一根管中加入 250 微升 DPBS，第二根留空。

从无朊病毒污染区域的储存中取出泡沫棉签。使用 DPBS 中的适当脑匀浆或 BH 准备阳性和阴性对照。戴上干净的手套，从包装中取出所需数量的泡沫棉签，并将其手柄面朝下放入试管架中。

确保尖端不接触其他表面。握住干净的泡沫棉签手柄，将 50 微升相应的阳性和阴性对照样品涂抹在拭子尖端上。使用剪刀将棉签的多余手柄剪掉大约其长度的一半，然后将棉签放入预装的微型离心管中，将泡沫尖端浸入 DPBS 中。

握住干净的泡沫尖端棉签的手柄，用分子级水预润湿泡沫尖端，然后抖掉多余的水。将湿润的泡沫尖端放在选择用于监测的区域上，来回擦拭该区域约 10 次，同时在表面上旋转拭子尖端。使用剪刀将棉签的多余手柄剪断至大约其长度的一半，然后将棉签放入预装的微型离心管中，将泡沫尖端浸入 DPBS 中，确保盖子可以完全关闭。

在前往下一个拭子采集地点之前，丢弃手套并更换新手套，以尽量减少交叉污染。对于拭子提取，将微量离心管放入圆形管架中，然后将架子浸入杯喇叭超声仪水浴中。确保管内 DPBS 中的泡沫棉签低于水面，使手柄部分未浸入水中。

对样品进行超声处理总共 15 秒，循环开启 5 秒，关闭 5 秒。超声处理后，将试管离心约 15 秒，以在转移前将 DPBS 收集在试管底部。使用设置为 250 微升的 P 1000 移液器，小心地将底部的所有液体拭子提取物收集到相应的预标记空管中。

丢弃装有棉签的用过的试管。在真空浓缩器中浓缩样品，确保管盖打开，循环完成后，确保样品完全浓缩，只剩下沉淀。将颗粒储存在零下 80 摄氏度，直到进一步使用。

对于 RT-QuIC 分析，准备阴性和阳性板对照，并在组织稀释溶液中稀释相应的脑匀浆。现在从零下 80 摄氏度的冰箱中解冻储存的拭子提取物沉淀，并通过移液用 50 微升分子级水重悬干燥的拭子提取物。短暂涡旋，让样品在室温下静置。

将 2 微升阴性和阳性板对照，然后将拭子提取物加载到相应的 RT-QuIC 板孔中。阴性对照拭子未超过阳性荧光阈值，确认手术过程中没有污染。阳性对照拭子提取物在所有重复孔中表现出一致的接种，显示出适当的检测灵敏度。

来自非污染区域的表面拭子样本未能显示种子超过阈值，证实了朊病毒的阴性性。与对照组相比，朊病毒污染的表面表现出高于阈值的接种，最大点比和荧光时间不同。经过漂白剂处理的朊病毒污染表面未能接种 RT-QuIC，证明消毒有效。

一些表面伪影表现出动力学曲线改变和更长的荧光时间，表明可能存在假阳性，这可能是由于表面上存在灰尘或残留化学物质。