Name: 手术子宫损伤小鼠模型及后续妊娠结局 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-27T12:55:00.000+00:00
Duration: 4 min 8 s
Description: 了解小鼠子宫损伤手术模型的建立方法及其对后续妊娠结局的影响。该模型用于研究子宫伤口愈合机制、瘢痕组织变化及胚胎发育缺陷，为评估干预策略提供实验平台。

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感谢加州大学戴维斯分校教学与研究动物护理服务部（TRACS）在动物饲养、实验操作和后勤方面提供的持续支持。感谢加州大学戴维斯分校心血管研究所（CVRI）动物模型核心实验室及其负责人陈奕杰（Jay）博士（D.V.M., Ph.D.）在技术指导、支持以及拍摄手术室使用方面提供的帮助。感谢张实验室全体成员对本工作的支持。图5A 使用 BioRender.com（https://BioRender.com/ig9sfon）制作。

本方案中演示的所有操作均已获得加州大学戴维斯分校机构动物护理和使用委员会（IACUC）的批准（IACUC方案编号#23985）。本方案所述操作通常在7至10周龄、体重19至25克的C3H品系雌性小鼠上进行，但根据研究者的具体研究问题，该方案也适用于其他品系、年龄和体重的雌性小鼠。手术前应监测动物状况，确保仅使用健康、无损伤或痛苦迹象的动物进行实验。所用试剂与设备的详细信息列于下文 材料表.
1. 手术区域的准备
<ol>
	<li>手术前一天，将所有手术器械（精细镊子（#5 或 #55）、持针器、弯角虹膜剪和已装入钉夹的皮肤缝合钉施加器）放入灭菌袋中，并进行高压灭菌。</li>
	<li>若使用注射用麻醉剂，需配制工作液，其中包含10 mg/mL氯胺酮和1 mg/mL赛拉嗪，溶于0.9%氯化钠生理盐水。 
	注意：也可使用异氟烷进行麻醉 通过 鼻罩给药是一种可接受的麻醉方式40.</li>
	<li>手术开始前，立即穿戴个人防护装备（PPE）：实验服、手术帽、外科口罩和手套。</li>
	<li>准备术前操作区域。 
	注意：可使用一个铺有纸巾的吸水性实验台垫，并准备一个动物笼具，用于动物在手术前麻醉后的休息。在动物笼具内铺上纸巾，并将其放置在术前准备台垫旁。</li>
	<li>将指定用于手术的动物置于已去皮的塑料烧杯或类似容器中，放在天平上称重图1A记录体重以计算麻醉剂、镇痛剂和生理盐水的适当用量。</li>
	<li>向动物注射麻醉剂 通过 以下步骤：
	<ol>
		<li>用胰岛素注射器吸取适量工作浓度的氯胺酮/甲苯噻嗪混合液（见步骤1.1），以达到氯胺酮100 mg/kg和甲苯噻嗪10 mg/kg的给药剂量（图1B). 
		注意：例如，一只体重为22 g的动物需要注射0.22 mL的10 mg/mL氯胺酮和1 mg/mL赛拉嗪麻醉剂溶液。</li>
		<li>将动物安全固定并翻转为仰卧位后，经腹腔注射（I.P.）适当剂量的氯胺酮/赛拉嗪41 (图1C). 
		注意：可根据需要使用防刮护具。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>观察动物约 3 分钟。注射&#160;额外的0.02 mL氯胺酮/赛拉嗪溶液&#160;I.P.41 如果在此时间段内观察到运动。</li>
	<li>麻醉给药约10分钟后，通过捏压前肢脚趾检查镇静是否充分40,42. 
	注意：动物通常在10至15分钟内达到手术麻醉水平。C3H小鼠所需的麻醉剂剂量通常比C57BL/6或BALB/c小鼠高约20%（例如，20 g动物需使用0.24 mL的氯胺酮/赛拉嗪溶液）。具体给药剂量可能需要根据各个品系个体情况进行经验性确定。</li>
	<li>运动停止后，进行皮下（S.C.）注射41 动物给予0.5 mg/kg缓释型布托啡诺（Buprenorphine）图1D). 
	注意：由于缓释布托啡诺体积较小且具有黏性，建议用一只手提起皮肤形成帐篷状，另一只手将其注射于肩胛骨附近。</li>
	<li>为保护动物的眼睛，使用无菌棉签涂抹眼用软膏（图2A).</li>
	<li>将麻醉后的动物置于铺有纸巾的术前吸水垫上。</li>
	<li>使用毛发修剪器小心剃除下背部至中背部切口部位的毛发图2B）。使用纸巾去除多余毛发，然后使用粘毛滚筒（图2C).1.12 
	注意：可使用无菌棉签涂抹脱毛膏以彻底去除毛发。</li>
	<li>使用酒精棉片和聚维酮碘棉签以以下方式对切口部位进行消毒：
	<ol>
		<li>从预定切口位置的中心开始，用酒精消毒片以环形动作向外擦拭图2D).</li>
		<li>接下来，以类似方式使用聚维酮碘棉签擦拭切口部位。图2E).</li>
		<li>在酒精棉片和聚维酮碘棉签之间交替使用，共进行3轮。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>按如下步骤准备手术区域（参见 图3A):
	<ol>
		<li>在照明灯下放置第二个吸水垫，然后在吸水垫上覆盖无菌手术巾。</li>
		<li>用70%乙醇对光源进行消毒。在接触已灭菌的器械和进行切口前，更换为无菌手套。</li>
		<li>将无菌手术器械置于手术巾边缘，并将动物放置于手术区域中央。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>通过将无菌手术巾（例如 Glad Press 'n Seal）覆盖在动物身上，仅暴露鼻部，以创建无菌区域。图3B). 
	注意：使用过程中，清洁的手术器械可放置在无菌表面，例如手术区域内的无菌巾上。</li>
	<li>在剃毛区域上方剪开一个小方口，为在该部位制造切口做准备（图3C，D）。有关切口位置的具体信息，请参见下文步骤 2.1 的注释。</li>
</ol>
2. 子宫损伤的手术诱导
注意：本节描述了对未妊娠雌性小鼠单侧子宫角造成损伤的手术与操作步骤。首先，进行背部剖腹手术以暴露子宫角顶端。随后，将一支带倒钩的25 G针头插入子宫腔，以损伤子宫内膜，必要时可穿透肌层。这会在受损的子宫角上形成一个纵向伤口，为进一步实验提供模型，用于研究子宫愈合机制以及损伤如何影响后续妊娠。手术前必须确保动物已得到适当麻醉。如步骤1所述，多个参数可用于判断动物是否达到充分麻醉状态，包括停止活动、呼吸频率降低以及前肢反射消失。此外，轻触时应无后肢反射，尽管在麻醉充分的情况下，若施加足够压力，该反射有时仍可能存在40,42。
<ol>
	<li>使用剪刀（直剪或弯虹膜剪）在小鼠背部皮肤上剪出一个2-3毫米的切口，同时用精细镊子（#5或#55）夹住皮肤。 
	注意：切开约&#8531; 尾部基部与颈部之间的距离，以及距中线约0.5 cm处。见 图4A.</li>
	<li>在卵巢脂肪垫正上方的筋膜处切开一个2-3毫米的切口图4B).</li>
	<li>用镊子轻轻夹住卵巢脂肪垫，并从筋膜和皮肤的切口处将其抽出。图4C). 
	注意：可能需要切除部分脂肪垫，以便将卵巢和子宫从体腔中取出。操作时应避免损伤雌性生殖道本身，以及脾脏和脂肪垫附近的大血管。</li>
	<li>暴露子宫上三分之一后，执行以下操作（图4D):
	<ol>
		<li>用镊子轻轻固定子宫输卵管结扎处图 5A，B).</li>
		<li>使用磨尖的针头尖端在子宫顶部刺一个小孔（图 5A，B).</li>
		<li>小心插入针头，开始刮擦子宫角的抗膜侧表面（图5C).</li>
		<li>继续刮擦，直至子宫内膜层和肌层均完全穿透图 5D). 
		注意：使用镊子或插入针头时压力过大可能导致子宫峡部撕裂，造成子宫角与输卵管及卵巢分离。若使用带刃针头在不损伤子宫峡部的情况下难以创建进入子宫的孔洞，可选用无刃的25 G或27 G针头作为替代方案；随后将带刃针头插入该孔洞，按上述方法制造切口。本方案中在子宫角上制造贯穿全层的切口。然而，若希望造成较轻的子宫损伤，可仅用带刃25 G针头刮擦子宫最内层组织，例如子宫内膜。此外，本操作不使用缝线关闭子宫，以避免引入异物反应这一额外变量；但子宫缝合仍是本操作可接受的替代方法。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用镊子将受损的子宫角轻柔地放回体腔内图6A，B).</li>
	<li>缝合43 用4-0缝线缝合筋膜并剪除多余缝线&#160;(图6C-). 
	注：通常单次缝合即足以闭合筋膜切口。</li>
	<li>使用皮肤缝合夹施加器以缝合夹闭合皮肤切口图6F). 
	注意：关闭切口需要一到两个夹子。</li>
	<li>皮下注射41 10 mg/kg 卡洛芬作为镇痛剂，以及 0.5 mL 生理盐水（0.9% NaCl）用于术后支持治疗。参见 图7A.</li>
	<li>使用耳孔钳或编号的金属耳标来识别动物44.</li>
	<li>将动物置于加热笼中进行术后恢复图7B). 
	注意：一旦动物能够抬起头部，立即将其送回配有垫料的常规饲养笼中。参见下文步骤 2.12。</li>
	<li>若使用相同的手术器械进行额外的手术操作，则执行以下步骤：
	<ol>
		<li>首先，用70%乙醇和纸巾进行清洁。</li>
		<li>然后，将工具放入干式玻璃珠灭菌器中重新灭菌&#160;30秒。</li>
		<li>待工具冷却至室温后再进行后续使用。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>动物恢复活动后，将其送回动物房饲养；若使用氯胺酮/甲苯噻嗪麻醉，则术后约1-2小时恢复活动后送回；若使用异氟烷麻醉，则约5分钟后恢复活动即送回。</li>
	<li>每天监测动物是否有疼痛和痛苦的迹象，并根据需要在术后3天内每天注射10 mg/kg的卡洛芬。 
	注意：面部表情评分法45 以及体况评分46 是动物福利的标准兽医评估指标。</li>
</ol>
3. 交配及解剖妊娠小鼠以评估子宫损伤的后果
注意：根据具体的研究问题，可在子宫损伤后进行多种终点分析。例如，可在损伤后的不同时间点解剖非妊娠动物，以检测伤口愈合的动力学过程27此外，受伤的动物可进行妊娠 通过 自然交配或胚胎移植以考察损伤对后续妊娠的影响27本步骤描述了在受损子宫环境中对胚胎及胎盘发育的评估方法。具体而言，本步骤详细说明了如何设置定时交配，以及在妊娠第12.5天（E12.5，以发现阴道栓的早晨定义为E0.5；有关阴道栓识别的更多信息见下文步骤3.2）对动物进行解剖。总体而言，步骤3提供了一个损伤后下游分析的示例，可用于探究特定的实验问题。
<ol>
	<li>术后恢复后，将受伤的雌性小鼠与11周龄或以上的种雄小鼠共同饲养，进行定时交配47。 
	注意：受伤后的恢复时间长度将由具体的研究问题决定。使用本方案的研究通常在开始定时交配前允许30天的恢复期（已测试范围为5至105天）。三鼠或一雄多雌交配方式可降低饲养成本并提高实验效率。但请注意，此类交配配置需获得机构批准，且仅适用于妊娠期间的解剖目的；三鼠或一雄多雌交配产生的活产会使动物承受较大压力，通常不建议也不被允许。</li>
	<li>每天早晨进行阴道栓检查，直至发现阴道栓（见图8），此时可将雌鼠与种雄小鼠分笼饲养。 
	注意：阴道栓表现为阴道口处的白色团块（图8A）或整个阴道区域的膨出。若体表未见明显迹象，可将探针缓慢插入阴道（图8C、D）。当探针尖端插入至弯曲处前遇到阻力时，即提示存在阴道栓。阴道栓检查应在早上约7点或尽可能早的时间进行，因为阴道栓会随着时间推移在当天脱落。有关阴道栓检查的更多细节，请参见Behringer等人的研究48。为更进一步且更可靠地确认妊娠，可使用高频超声成像49，50。若无法使用或不希望使用超声，已有研究表明体重增加可在E7.75时较为准确地预测妊娠51。</li>
	<li>在目标妊娠阶段按照机构批准的程序处死动物（遵循&#160;机构批准的方案）。有关动物安乐死操作及妊娠阶段选择的详细信息，请参见下方的注意事项。 
	注意：将发现阴道栓的当天记为E0.5。根据所研究的科学问题选择处死动物时的妊娠阶段。例如，E4.5至E5.5适用于研究着床前后生物学过程；E11.5至E14.5适用于研究中期妊娠胎盘缺陷，包括融合胎盘的存在情况。动物安乐死应遵循机构指南。一种可接受的方法是：先进行8分钟的CO2暴露，随后等待并观察2分钟，最后通过颈椎脱位法进行二次确认以确保安乐死完成via 颈椎脱位。</li>
	<li>安乐死后，按以下步骤准备解剖（见图9A）：
	<ol>
		<li>将动物仰卧位放置于解剖台面上。</li>
		<li>准备好所需解剖工具（镊子、剪刀），并准备盛有1× PBS的培养皿。</li>
		<li>为防止松散的毛发粘附于解剖区域，解剖前先用70%乙醇、水或1× PBS润湿腹部毛发。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>用镊子夹住腹部皮肤，用剪刀沿腹部纵向剪出一个V形切口，直至到达肋骨下缘（字母&#34;V&#34;的每一笔划约2 cm长）。见图9B-D。</li>
	<li>用镊子夹住腹壁肌肉层，沿V形方向剪开腹肌壁（字母&#34;V&#34;的每一笔划约2 cm长），直至可见腹腔。见图9E、F。</li>
	<li>轻轻移开肠管及其他腹腔内容物以暴露子宫。将含有胚胎的子宫从腹腔中拉出并暴露于视野中。见图9G。</li>
	<li>将子宫连同其内部胚胎一并从腹腔中取出，放入预先盛有1× PBS的培养皿中。见图9H。 
	注意：先用镊子夹住卵巢脂肪垫，然后用剪刀依次切断卵巢脂肪、子宫系膜动脉、阴道、另一侧子宫角的子宫系膜动脉，最后切断第二个卵巢脂肪垫，从而将子宫与腹腔其余部分分离。根据后续分析需求（如显微观察或组织学分析），可进一步进行解剖。示例数据见图10。</li>
</ol>

作者声明无利益冲突。

剖宫产占美国分娩总数的约33%，在巴西和埃及等国家则高达55%–65%12,52，然而目前对子宫在损伤后的愈合过程以及这些损伤如何影响后续妊娠仍知之甚少。尽管既往剖宫产是胎盘植入谱系障碍（placenta accreta spectrum, PAS）&#160;和前置胎盘等妊娠并发症的主要风险因素，但这些&#160;并发症的发生机制尚不明确3,6,14,17。随着剖宫产率持续上升，迫切需要深入了解相关疾病机制，并建立用于开发新型诊断方法和治疗手段的研究平台。然而，目前可用于子宫损伤研究的动物模型仍然有限25,31,<sup cla...

尽管在美国每3次分娩中就有1次是通过剖宫产进行的 通过 剖宫产（剖宫产术），关于子宫如何愈合以及受损子宫如何导致后续妊娠并发症，目前所知甚少1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13这些并发症包括子宫破裂、前置胎盘、胎盘植入综合征（PAS）和剖宫产瘢痕妊娠，总体影响约2.5%有1次或多次剖宫产史的患者。1,2,6,8,12,14,15,16,17胎盘前置的特征是胎盘异常地附着于子宫下段4,16这不仅会导致宫颈的物理性阻塞以及妊娠期间出血风险升高，也是更为严重的侵入性胎盘异常附着（PAS）的重要危险因素。8,12胎盘植入是指胎盘过度侵入母体组织，甚至可达膀胱或直肠，常需在剖宫产时行子宫切除术，以防止危及生命的母体出血。12,17剖宫产瘢痕妊娠虽然罕见，但相关并发症发生率较高，包括流产、胎儿死亡和早产18,19除了与既往剖宫产史相关的并发症外，其他子宫手术如子宫肌瘤切除术或扩张与刮宫术（D&amp;#38;C）也会导致患者出现多种并发症。例如，约30%接受D的患者&amp;流产后发生晚期自然流产以及接受第二次子宫肌瘤宫腔镜切除术的患者中，高达46%会出现具有阿什曼综合征（Asherman syndrome, AS）特征的宫腔粘连20,21AS 影响约 2% 的女性，导致闭经、痛经、胚胎着床失败、反复妊娠丢失、早产和/或胎盘粘连综合征21,22因此，鉴于既往子宫创伤与较高的严重并发症及死亡率相关，建立实验动物模型不仅对于阐明子宫伤口愈合的机制以及子宫损伤对后续妊娠结局的影响至关重要，而且可为新型诊断方法和治疗手段的开发提供重要平台。23,24.
因此，已有若干研究建立了子宫损伤的小鼠模型。然而，早期的研究要么未考察子宫损伤对后续妊娠的影响25 或通过限制子宫腔表面的损伤，在卵巢切除小鼠中研究子宫内膜容受性时间窗外的胚胎着床26为弥补这些知识空白，本方案所述模型结合其他近期研究，提出了一种将子宫损伤引入小鼠体内的新型外科手术方法27,28本方案采用常见的实验小鼠作为模式生物，因其具有易获得性、遗传可操作性强、妊娠期短、从出生到性成熟的时间快、每胎产仔数多以及成本效益高等优点。此外，小鼠具有两个子宫角的解剖学特征，可在每只实验动物中利用未损伤的子宫角作为内部对照，并能够直接在瘢痕局部分离出局部缺陷进行分析 与整个子宫环境中的全局性缺陷。本方案所述方法包括进行简单的背部剖腹手术，随后使用带钻头的针在单个子宫角的子宫内膜层和肌层穿透形成切口。该方法最接近剖宫产和子宫肌瘤切除术中所见的损伤，但也可轻松修改以研究非切口性损伤，例如 D&amp;#38;Cs，位于AS之前29,30损伤后，让动物恢复，随后与种公鼠交配以获得定时妊娠，从而检测损伤对后续宫内结局的影响27,28.
尽管在整体策略上与其他近期研究相似，本方案的某些方面具有独特优势。例如，Li 等人和 Burke 等人采用腹部入路进入子宫，而本方案所述为背侧入路31,32背侧入路操作更为简便，且更有利于动物术后快速恢复。在Burke等的研究中，对于非妊娠小鼠，采用弯针或刮匙刮除子宫内膜，从而更接近于人工流产（D）的模拟&amp;#38;Cs，而本方案中的全层切口损伤则更接近剖宫产和子宫肌瘤切除术的模型32在围产期小鼠中，Burke 等人按照本文所述方法，在胚胎着床的对侧——即子宫系膜侧而非对系膜侧引入切口。与 Li 等人使用剪刀的方法不同，本实验采用带刃口的针进行操作。31，该方法可更便捷地从全层损伤调整为局限于子宫内膜的损伤，以模拟两种类型的子宫内膜损伤&amp;#38;Cs 以及剖宫产和子宫肌瘤切除术。Li 等人和 Burke 等人均使用缝线闭合子宫伤口，这种方法虽然更贴近剖宫产术中的实际情况，但会为愈合过程引入额外的变异性，并可能导致异物效应31,32,33,34,35,36. 在大鼠中进行的类似研究已&#160;采用腹部入路制作全层切口37,38 或切除性39 使用缝线闭合的子宫伤口37,38,39 在非妊娠状态下38,39 且怀孕37 动物。因此，本文所述方案特别适合希望采用一种简便且可重复的方法、所需外科手术经验较少、可研究全层子宫损伤后胚胎着床和胎盘形成相关事件的研究人员，并且该方法可轻松适用于多种研究问题，包括 D&amp;子宫内膜类C型损伤27,28.
本方案的第1步概述了术前准备步骤。第2步描述了对一侧子宫角造成损伤的手术操作。最后，第3步详细说明了为研究子宫手术对后续妊娠影响而进行的妊娠母鼠解剖过程。总体而言，本研究提出了一种独特的小型啮齿类动物子宫伤口愈合及其相关妊娠结局的手术模型，该模型操作快速且易于采用。

<table><tbody><tr><td>注射用0.9%氯化钠，无菌</td><td>Fresenius Kabi</td><td>63323-186-10</td><td></td></tr><tr><td>25G × 5/8英寸 BD PrecisionGlide&amp;trade; 针头</td><td>BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>70%乙醇</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP82031GAL</td><td></td></tr><tr><td>可吸收4-0薇乔缝线</td><td>Ethicon</td><td>J214</td><td></td></tr><tr><td>动物笼具</td><td>VWR</td><td>10712-110 和 10715-323</td><td>研究人员所在动物设施提供的笼具亦可接受</td></tr><tr><td>动物耳标打孔器</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-812-201</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip伤口闭合系统</td><td>Fine Science Tools</td><td>12020-00</td><td></td></tr><tr><td>U-100胰岛素注射器</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-79</td><td>BD品牌</td></tr><tr><td>碘伏消毒棉签</td><td>Medline</td><td>MDS093901</td><td></td></tr><tr><td>缓释布托啡诺，1.3 mg/mL（Ethiqa XR）</td><td>Fidelis Pharmaceuticals</td><td>099114</td><td>其他缓释型布托啡诺或盐酸布托啡诺亦可接受</td></tr><tr><td>卡洛芬（RIMADYL）50 mg/mL&amp;nbsp;</td><td>Zoetis</td><td>RIM-00284R1</td><td></td></tr><tr><td>弯头虹膜剪</td><td>World Precision Instruments</td><td>501759G</td><td></td></tr><tr><td>干式玻璃珠手术器械灭菌器</td><td>VWR INTERNATIONAL</td><td>75999-324</td><td></td></tr><tr><td>干式玻璃珠补充料</td><td>VWR INTERNATIONAL</td><td>75999-332</td><td></td></tr><tr><td>雌性小鼠，通常为8至12周龄，例如C3H品系</td><td>Charles River</td><td>025</td><td></td></tr><tr><td>精细剪刀——弯头，10.5 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>14370-23</td><td></td></tr><tr><td>毛发修剪器</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-195-4544</td><td></td></tr><tr><td>Glad Press &amp;lsquo;n Seal 密封袋</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1089054</td><td></td></tr><tr><td>丁腈手套</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-130-1597C</td><td></td></tr><tr><td>无菌蒸馏水（H2O）</td><td>Fine Science Tools</td><td>15230170</td><td></td></tr><tr><td>手术用照明灯</td><td>AmScope</td><td>HL150-AY</td><td></td></tr><tr><td>氯胺酮，100 mg/mL（Zetamine）</td><td>Dechra</td><td>501072</td><td></td></tr><tr><td>实验服</td><td>Uline</td><td>S-15376W-50</td><td></td></tr><tr><td>光学显微镜</td><td>Fisher Scientific</td><td>S13039</td><td></td></tr><tr><td>粘毛滚筒</td><td>Fisher Scientific</td><td>17-018-329</td><td></td></tr><tr><td>Nair脱毛膏</td><td>Target</td><td>049-06-3304</td><td></td></tr><tr><td>持针器</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>纸巾</td><td>Scott</td><td>1804</td><td></td></tr><tr><td>培养皿</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-100</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS）</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>塑料烧杯</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12010250</td><td></td></tr><tr><td>带弯头探针探测器</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-995</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand&amp;trade; 即封式灭菌袋，9 cm（宽）× 13.3 cm（高）</td><td>Fisher Scientific</td><td>181250</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand&amp;trade; 即封式灭菌袋，9 cm（宽）× 23 cm（高）</td><td>Fisher Scientific</td><td>181251</td><td></td></tr><tr><td>精细镊子，#5</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>精细镊子，#55&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>电子天平</td><td>Fisher Scientific</td><td>S93805</td><td></td></tr><tr><td>手术剪</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>喷雾瓶</td><td>Fisher Scientific</td><td>S413505P</td><td></td></tr><tr><td>无菌酒精消毒棉片</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>无菌眼科兽用软膏</td><td>Puralube</td><td>PH-PURALUBE-VET</td><td></td></tr><tr><td>用于涂抹眼膏的无菌棉签</td><td>Fisher Scientific</td><td>18-366-472</td><td></td></tr><tr><td>灭菌袋</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-910-673</td><td></td></tr><tr><td>手术单</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-209-1792</td><td></td></tr><tr><td>手术帽</td><td>Uline</td><td>S-10480BLU</td><td></td></tr><tr><td>外科口罩</td><td>Fisher Scientific</td><td>18-048-010</td><td></td></tr><tr><td>Thomas Scientific吸水实验台垫，尺寸16.5 × 23英寸/42 × 58厘米</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1588452</td><td></td></tr><tr><td>带全地板加热功能的加热/麻醉诱导舱</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-370-302</td><td></td></tr><tr><td>伤口夹补充装</td><td>Fine Science Tools</td><td>12022-09</td><td></td></tr><tr><td>100 mg/mL赛拉嗪</td><td>Dechra</td><td>Rompun 100 mg/mL Xylazine</td><td></td></tr></tbody></table>

小鼠手术性子宫损伤模型及其后续妊娠结局

Mouse Model of Surgical Uterine Injury and Subsequent Pregnancy Outcomes

剖宫产及其他手术（如扩张和刮宫术、子宫肌瘤切除术等）引起的子宫损伤可导致后续妊娠出现多种并发症，包括前置胎盘、胎盘植入谱系障碍（PAS）、剖宫产瘢痕妊娠以及子宫破裂。在美国，剖宫产约占分娩总数的30%，且其发生率预计将继续上升。因此，深入理解与损伤相关的妊娠疾病的发生机制，并建立可用于测试潜在干预措施的实验平台至关重要。为实现上述目标，迫切需要建立子宫损伤的动物模型，特别是能够反映损伤对后续宫内妊娠结局影响的模型。本实验方案介绍了一种在实验小鼠（Mus musculus）中建立机械性诱导子宫损伤的新颖外科手术方法。文中详细演示了术前准备、子宫损伤的诱导操作以及术后恢复流程，并提供了对非妊娠和妊娠小鼠进行后续解剖的附加信息。总体而言，通过系统描述在活体（in vivo）模型中诱导子宫损伤的一系列操作步骤，本方案为研究子宫伤口愈合过程中的分子与细胞事件及其对后续妊娠的影响提供了一种可行且可操作的技术方法。

使用氯胺酮/赛拉嗪作为麻醉剂进行手术后，动物通常在约1小时内部分恢复活动能力，并在约4-6小时内完全恢复活动能力。异氟烷麻醉的恢复通常在数分钟内发生。任何可能出现的并发症，如伤口裂开或疼痛，通常在手术后1-3天内显现。在皮肤切口愈合且皮肤夹即将拆除之前，应每天进行动物福利检查，以监测疼痛或并发症情况。
可在手术后的不同时间点处死动物，以评估子宫伤口愈合情况。例如，图10A展示了损伤后3天的子宫损伤情况，而图10B展示了损伤后1个月的子宫损伤情况，此时宏观瘢痕迹象极轻微。可根据需要检测其他参数，包括在手术期间或术后给予药物处理、额外的损伤循环，或在动物不同年龄阶段进行手术。为研究子宫损伤对胚胎着床和发育的影响，可对动物进行交配或胚胎移植。图中展示了子宫损伤导致的不良发育后果示例，如宫内出血和胚胎吸收（图10C），以及胚胎间距异常（图10D<stro...

本方案描述了一种在小鼠模型中诱导子宫损伤的方法，并在随后的妊娠过程中进行下游分析。

剖宫产及其他手术（如扩张刮宫术、子宫肌瘤切除术等）所致的子宫损伤可导致多种并发症……

我们正在研究剖宫产或其他手术导致的子宫瘢痕如何在后续妊娠中引发多种并发症，包括前置胎盘、胎盘植入谱系疾病以及不孕症。在缺乏动物模型的情况下，阐明子宫损伤导致后续妊娠缺陷的机制一直具有挑战性。因此，我们建立了一种新的小鼠模型，以填补这一研究空白。该子宫损伤动物模型使研究人员能够研究子宫伤口的反应过程，以及愈合受损如何引发妊娠期间的发育缺陷。该模型还为干预策略的测试提供了平台。通过本模型，研究人员可以探究子宫的修复机制、损伤子宫中缺陷的发生方式、瘢痕部位存在的具体改变，以及为何即使在未受损的子宫角中也会出现某些胚胎缺陷。我们将研究损伤如何导致胚胎着床失败，胚胎如何在瘢痕处被吸收，以及为何只有在动情周期的后期阶段发生的损伤才会引起胚胎间距异常等缺陷。[讲师] 首先，准备术前操作区域。将麻醉后的动物用无菌手术巾覆盖，仅暴露鼻部。使用直剪或弯剪，在背部皮肤上剪开一个2至3毫米的切口，同时用精细镊子夹住皮肤。在覆盖卵巢脂肪垫的筋膜上剪开一个2至3毫米的切口。用镊子轻轻夹住卵巢脂肪垫，并将其从筋膜和皮肤切口中取出。暴露子宫上1/3部分后，用镊子轻轻固定子宫输卵管连接处。然后使用鸟针在子宫顶部刺出一个小孔。接着插入针头，仔细刮擦子宫角的对系膜面。持续刮擦，直至子宫内膜层和肌层完全穿孔。现在，用镊子将受损的子宫角轻柔地放回体腔内。使用4-0缝线缝合筋膜，并剪除多余的缝线。使用皮肤缝合钉施加器中的钉夹闭合皮肤切口。损伤后第3天的子宫伤口显示为开放性病灶，子宫腔明显暴露。损伤后1个月，子宫伤口已闭合，原损伤部位仅有轻微可见瘢痕。受损的子宫角可见胚胎被吸收及宫内出血，表现为暗色区域和出血灶。正常的着床结果表现为单个胎盘和胚胎在子宫角内清晰分离。子宫损伤导致胚胎成对紧密排列且胎盘融合，显示胚胎着床间距异常。间距异常的胚胎对中，可见一个发育不良的胚胎和一个正常的羊膜囊，反映出不良的发育结局。

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