Name: 成年大鼠的眼部治疗递送和高级组织检索 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T13:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: 了解成年大鼠眼球后注射的标准化方法，用于视网膜和视神经的药物递送。该技术结合整体组织取样，可最大限度减少死后损伤，为眼部病理治疗研究提供可靠平台。

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本研究部分由美国国防部视觉研究计划资助，资助编号为 W81XWH-15-1-0074 和 W81XWH-22-1-0989。本文所包含的观点或主张仅为作者的个人观点，不应被解释为官方立场，也不代表美国陆军或国防部的观点。本研究资助项目还部分得到了预防失明组织俄亥俄分会“视觉研究女性学者青年研究者学生奖学金”的支持。我们衷心感谢罗斯基金会提供的支持。相关服务在俄亥俄州立大学视觉科学研究中心项目（P30EY032857）下完成。我们感谢俄亥俄州立大学实验室与动物资源中心（ULAR）的支持。此外，我们感谢瑞利实验室的本科生成员米歇尔·莫斯科（Michelle Mosko）、艾玛·拉利（Emma Lally）、山姆·达克沃思（Sam Duckworth）和伊芙·霍华德（Eve Howard）。我们还要感谢金邦洙（Bongsu Kim）对 SALOOT 设计的贡献，以及伊丽莎白·乌尔班斯基（Elizabeth Urbanski）和瑞安·韦伯（Ryan Webb）的支持。图1、图2A 和 图3 使用 BioRender.com 制作。

所有实验均遵循眼科与视觉研究中动物使用ARVO声明的规定，并经俄亥俄州立大学机构动物护理与使用委员会批准。本研究采用体重约200 g、年龄约2个月的雄性Sprague Dawley大鼠。25. 所用试剂与设备的详细信息列于下文 材料表.
1. 玻璃体内注射（IVI）
<ol>
	<li>将异氟烷和废气导管连接至SALOOT连接端口。按照《ARVO眼科与视觉研究中动物使用声明》以及经批准的IACUC方案，使用标准异氟烷程序对动物进行麻醉。 
	注意：或者，如果动物已在其他眼科检测过程中处于麻醉状态（例如，使用氯胺酮/甲苯噻嗪混合物；氯胺酮90 mg/kg，甲苯噻嗪10 mg/kg），则将动物转移至眼科手术平台，并通过异氟烷（1–4%）在氧气（流速0.5–1 L/min）中滴定麻醉，以维持适当的麻醉深度。</li>
	<li>将带有麻醉动物的眼科手术平台置于活体手术显微镜下。通过足底回缩反射评估麻醉深度 via。</li>
	<li>在将要手术的眼或双眼内滴入两滴0.5%盐酸四环卡因眼科溶液（表面麻醉剂）。若对侧眼无需操作，则涂抹润滑性眼用软膏（如0.3%羟丙甲纤维素）以保护角膜。 
	注意：为确保术中视野清晰以及四环卡因溶液的充分分布，操作前不应在手术眼内使用润滑性眼用软膏。手术完成后可酌情涂抹。
	<ol>
		<li>随后，在眼球表面滴加1至2滴5%聚维酮碘溶液，并使用棉签将聚维酮碘涂抹于眼部周围皮肤。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用一支10 µL注射器，配备长度为10 mm、角度为15度、4型针尖的33 G针头，抽取0.9%抑菌氯化钠溶液。在将针头浸入热珠灭菌器前，先用生理盐水冲洗注射器和针头。
	<ol>
		<li>待其冷却后再继续操作。针头冷却后，吸取所需剂量的目标治疗药物（4 µL）。 
		注意：在概念验证研究中，曾使用未稀释的纹身墨水和磷酸盐缓冲液（PBS）中的伊文思蓝染料。伊文思蓝粉末与PBS混合至浑浊状态。在治疗性概念验证研究中，使用以下浓度：伊布地司他1 mg/mL，牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）5 mg/mL，环孢素注射液250 mg/mL，以及阿那白滞素100 mg/0.67 mL。治疗用粉末均用0.9%抑菌生理盐水稀释。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用带齿精细眼科镊，轻柔夹住角膜缘处的巩膜组织以固定眼球。此时可见虹膜周围出现轻微的红色环状结构。以此环为解剖标志，将针头斜面朝下刺入，进入眼球后段。 
	注意：确保针头朝向视网膜方向进针，且插入深度不超过针头长度的2/3（图1）。注意避免针头划伤晶状体，以防诱发白内障形成。</li>
	<li>注射治疗药物后，缓慢拔出针头。闭合眼睑并施加压力至少10–15秒，随后用生理盐水冲洗。</li>
	<li>停止向动物供给异氟烷，并将其从眼科手术平台移出。每只眼睛滴入一滴0.3%羟丙甲纤维素，然后将动物置于加热垫上恢复。</li>
</ol>
2. 球后注射（RBI）
<ol>
	<li>将异氟烷和废气管路连接至SALOOT连接端口。使用标准异氟烷程序对动物进行麻醉。 
	注意：或者，若动物此前已因其他眼科检测程序处于麻醉状态（即使用氯胺酮/赛拉嗪混合物；氯胺酮90 mg/kg，赛拉嗪10 mg/kg），则将动物转移至眼科手术平台，并通过吸入异氟烷（1–4%）并以氧气（0.5–1 L/min流速）维持麻醉，以确保维持适当的麻醉深度。</li>
	<li>将带有麻醉动物的眼科手术平台置于手术显微镜下。通过足底回缩反射评估麻醉深度 via。</li>
	<li>向拟进行手术的眼或双眼中滴入两滴0.5%盐酸丁卡因眼科溶液（表面麻醉剂）。若对侧眼无需操作，则涂抹润滑性眼科软膏（如0.3%羟丙甲纤维素）以保护角膜。 
	注意：为确保术中视野清晰及丁卡因溶液充分分布，操作前不应在拟处理的眼中添加润滑性软膏；可在手术结束后使用。
	<ol>
		<li>随后，在眼球表面滴加1至2滴5%聚维酮碘溶液，并使用眼科棉签将聚维酮碘涂抹于眼周皮肤。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>取一支0.5 mL胰岛素注射器，配28 G针头。抽取所需剂量的治疗药物（100 µL）。 
	注意：在概念验证研究中，曾使用未稀释的纹身墨水及磷酸盐缓冲液（PBS）中的伊文思蓝染料。伊文思蓝粉末溶于PBS直至呈不透明状。在治疗性概念验证研究中，所用浓度如下：伊布地拉斯特10 mg/mL，牛磺熊去氧胆酸50 mg/mL，环孢素注射液250 mg/mL，阿那白滞素100 mg/0.67 mL。治疗用粉末均以0.9%抑菌生理盐水稀释。</li>
	<li>使用带齿精细眼科镊子轻柔夹持下眼睑以固定。将针头斜面朝下，于6至7点钟方向中间角度刺入下眶缘，直至触及眼窝后壁。稍将针头回撤，然后缓慢注射药物（图2）。</li>
	<li>缓慢轻柔地拔出针头。随后闭合眼睑，施加压力至少10–15秒，再以生理盐水冲洗。</li>
	<li>停止向动物供给异氟烷，并将其从眼科手术平台移出。双眼各滴一滴0.3%羟丙甲纤维素，随后将动物置于加热垫上恢复清醒。</li>
</ol>
3. 眼部组织分离解剖
<ol>
	<li>动物安乐死后 通过 CO2 窒息处死或根据批准的IACUC方案中的其他规定，将动物置于胸卧位。在背部颈部做一横向皮肤切口，延伸至耳廓水平。</li>
	<li>解剖背侧肌肉组织以暴露寰枕关节。使用梅奥剪刀切开寰枕关节，将头部与身体分离。图3）。使用钝性分离法，从鼻部水平至背部颈部，轻柔地剥离背侧颅骨上的皮肤，保留双眼周围的皮肤完整。</li>
	<li>在颅底枕骨大孔处插入一对中等大小的直止血钳或持针器。使用止血钳轻轻从枕骨大孔向两侧颞区方向凿穿侧颅骨图3).
	<ol>
		<li>去除颅骨顶部时，应保持止血钳与脑背侧平行。这将确保脑组织在去骨过程中保持完整，避免受到损伤。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用扁平刮铲轻轻将脑组织向前推移，以暴露视神经。操作时需小心，避免脑组织重量对视神经产生牵拉张力。</li>
	<li>暴露视神经后，使用中号显微剪刀在视交叉处横向剪开，切断两侧神经与脑组织的连接。此时，脑组织可丢弃，或置于含4%多聚甲醛的磷酸盐缓冲液（4% PFA）中，4 °C固定24小时，用于组织学评估。</li>
	<li>使用一对小型虹膜剪和一对带齿眼科显微镊，仔细去除眼球周围多余的组织（如眼睑、结缔组织等）。操作完成后，眼球应仍位于眼窝内，仅保留眼外肌和腺体。</li>
	<li>使用止血钳配合小型虹膜剪，剪开眼眶，操作时需格外小心，避免剪到穿过视神经管的视神经。用止血钳小心折断眼窝后部的骨骼，如需更精确的控制，可使用小型解剖剪。</li>
	<li>去除骨骼后，使用显微剪刀和精细镊子小心地在眼眶周围剪切，以清除脂肪垫、腺体和眼外肌。在此过程中应注意观察视神经。</li>
	<li>眼睛应能轻柔地向颅腔内侧后方牵拉。此时，使用小型显微剪刀和精细镊子去除神经周围位于颅底骨嵴处的结缔组织。</li>
	<li>一旦该组织被移除，眼球及完整的视神经应能整块从颅骨中取出。对侧眼球和视神经重复上述步骤。</li>
	<li>此外，清除视神经和眼球上多余的组织，如硬脑膜鞘。如果无需将组织用于组织学分析，则使用干冰或液氮速冻，随后在 -80 °C 下保存。</li>
	<li>进行质谱分析时，需将视网膜从眼球内部区域分离，并分离视神经。在最靠近眼球外侧的位置将视神经与眼球分离。将视神经置于预冷的冻存管中，置于冰上，随后转移至 -80 °C 保存。
	<ol>
		<li>将眼球置于培养皿中，并在手术显微镜下用一对弯镊固定眼球，然后用小型显微剪在角膜缘处做一切口。</li>
		<li>将切口延伸至眼球全周，使眼球完全被切成两半，前半部分可弃去。</li>
		<li>将后部组织段内侧朝上放置，使用精细的眼科镊子去除薄层乳白色组织。该组织可能看起来与视盘粘连。若发生此情况，可使用显微剪刀将视网膜从视盘处剪开。 
		注意：视网膜组织可先置于冰上的冻存管中，随后转移至 -80 °C 保存。之后可将组织转移至质谱分析平台进行检测。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>对于采用部分灌注法的免疫组织化学染色，将完整的眼球置于培养皿中。使用一对弯头镊子固定眼球，然后取一支带有28 G针头的胰岛素注射器，从角膜缘处进针，针头方向朝向视网膜。在角膜缘的另外两个位置重复此操作。穿刺眼球有助于确保充分灌注，并促进适当的固定效果。 
	注意：眼球应在4% PFA中固定至少40分钟，然后转移至摇床，低速振荡额外20分钟，以促进液体流动。</li>
	<li>固定步骤完成后，移除PFA并替换为PBS。将离心管置于摇床上轻柔振荡15分钟，随后重复此步骤，再进行一次15分钟的PBS漂洗。</li>
	<li>最后一次 PBS 洗涤后，吸除 PBS，加入含 30% 蔗糖的 PBS 溶液，4 °C 冰箱中孵育 24 小时。蔗糖孵育完成后，将组织置于 OCT 包埋剂中，用于组织学评估26.</li>
</ol>

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</ol>

作者声明，本研究是在不存在任何可能被解释为潜在利益冲突的商业或财务关系的情况下进行的。

将治疗药物递送至视网膜和视神经所面临的复杂挑战，主要源于血-视网膜屏障（BRB）形成的不可渗透屏障，这凸显了本研究的重要性3,4。对玻璃体内注射（IVI）和视网膜下注射（RBI）技术的探索，不仅突显了克服这些障碍的创新策略，也强调了其在眼科护理和治疗开发中的广泛意义。这些研究结果表明，IVI 和 RBI 均可实现治疗药物向受累眼组织的靶向递送。这种靶向递送策略对于达到系统性或局部给药途径通常无法实现的治疗浓度至关重要2,11，从而提高多种眼病治疗的疗效。
这些注射技术的比较分析揭示了各自独特的优势：玻璃体内注射（IVI）可直接进入玻璃体和视网膜内层27，而视网膜下注射（RBI）则可在不破坏血-视网膜屏障（BRB）完整性的情况下将药物扩散至视神经28。这些发...

由于眼部复杂的解剖结构，将治疗药物递送至视网膜和视神经极为困难1,2，尤其是存在血-视网膜屏障（BRB）3,4,5。BRB的作用是保护视网膜免受全身循环中有害物质的侵入，但同时也给治疗药物的递送带来挑战，因为全身性循环中的治疗药物通常会被BRB阻隔6,7。小分子脂溶性药物可轻易穿过BRB，但大分子或亲水性药物则难以进入视网膜6。玻璃体内注射（IVI）和球后注射（RBI）可将药物递送至眼部组织，从而克服BRB带来的限制。IVI通过将治疗药物直接注入眼内环境，是一种颇具前景的给药方式8,9。该方法要求药物穿过玻璃体，从而绕过BRB，并进一步扩散至视网膜和脉络膜，最终到达视神经7。RBI则是将药物注射至眼球后方的球后间隙10。治疗药物可通过球后间隙内的组织和腺体扩散，影响视神经及其周围结构，而无需直接进入视网膜，从而保持BRB的完整性。通过直接或间接将药物递送至眼部，玻璃体内注射和球后注射均可在局部实现较高的药物浓度，相较于局部或全身给药（口服或静脉注射），显著提高药物疗效2。这对于需要快速起效或高药效的治疗尤为重要，常见于多种眼病的治疗中。靶向递送还可限制药物在全身的暴露，降低脱靶效应的风险，有助于减少局部、口服或静脉给药时可能出现的潜在不良反应11。
其他眼周注射方式，如结膜下注射、后Tenon囊下注射和视网膜下注射，各有其优势与局限性2,5。后Tenon囊下注射已被证实可向眼部组织输送较高浓度的药物；然而，Tenon囊下注射部位较接近巩膜而非眼眶血管系统5,12。相比之下，RBI（眶后注射）可将治疗药物递送至更靠近视神经的位置，优于后Tenon囊下注射或结膜下注射13。这意味着视神经相关病变可能更适用于RBI给药，而非其他类型的眼周注射。后Tenon囊下注射存在一定的风险，包括斜视、前房积血以及眼内压升高5。眼内压升高也是玻璃体内注射（IVI）、结膜下注射和视网膜下注射中报道的风险因素之一2。这些注射方式通常需要重复给药才能达到理想的治疗效果2。与视网膜下注射、结膜下注射及IVI相关的其他风险因素还包括白内障形成、视网膜出血、视网膜脱离和炎症反应2。这些IVI、视网膜下注射和结膜下注射比RBI更具侵入性，因其属于眼内注射2。RBI可能被视为侵入性较小的方法，因其将药物注入眼球后的眶后间隙，而无需将针头直接穿入眼球内部。其他侵入性较低的药物递送策略，例如局部滴眼给药，往往难以实现充分的药物递送，仅有不到5%的药物可保留在眼表2,5。
玻璃体内注射（IVI）是一种在临床前模型中广泛应用的技术，因其能够将治疗剂直接递送至眼球后段。IVI可将药物直接输送到玻璃体腔，因此成为局部治疗的首选给药方式14。该技术使治疗药物能够绕过血-视网膜屏障，而这一屏障通常是药物进入视网膜的主要障碍14。然而，IVI可能引发眼部结构的炎症和损伤，因此必须严格遵循操作规程14。为减少视网膜脱离和白内障形成的风险，Chiu等人描述了一种IVI方法，强调以45度斜面角度穿刺，并在平坦部水平进行注射，避免损伤晶状体、视网膜、眼外肌及血管15。该技术采用30 G针头插入鼻侧巩膜以实现药物递送15。尽管如此，由于其侵入性本质，IVI仍存在相关风险。潜在风险包括视网膜脱离、白内障形成、眼内炎或出血16。IVI技术的侵入性还会导致眼内压升高，Ikjong Park等人在猪眼实验中已证实了这一点16。该研究记录了针头插入和液体注射不同阶段眼内压的变化，报告指出在操作过程中眼内压存在显著波动16。
RBIs 已在先前的研究中成功用作向啮齿类动物递送治疗药物的手段。其中一项研究比较了给予不同前列腺素类似物的效果 通过 RBI17白化大鼠通过下穹窿外侧区域以45度角插入26 G针头注入0.1 mL注射液进行结膜下注射17本研究所采用的方案改编自先前描述的方法，其中大鼠被麻醉 通过 腹腔（IP）注射水合氯醛18另一项在大鼠中开展的研究比较了局部滴注与球后注射的效果19大鼠被麻醉 通过 腹膜内注射氯胺酮/赛拉嗪，同时给予RBI 通过 30 G 针头19与之前讨论的镇静方法不同，一项观察RBI对眶周脂肪影响的研究在实施RBI前使用吸入式异氟烷对大鼠进行镇静20尽管这些研究揭示了哪些麻醉剂和针头规格可能有效，但并未讨论操作过程中动物的体位固定与处理方法。
在小鼠中进行的多项研究也采用眶后静脉注射（RBI）作为治疗性递送方法。一项研究比较了RBI与尾侧尾静脉注射在成功诱导肾病综合征方面的效果21。另一项研究则在心脏成像中对比剂给药过程中，比较了这两种相同的注射技术22。实验中使用吸入式异氟烷对小鼠进行麻醉，并在其眼部内侧进行注射22。这两项研究均基于先前已发表的实验方案调整了其RBI操作方法。需要特别指出的是，该原始方案虽将注射方式命名为“眶后注射”，但实际描述的注射位置为眼球后方的球后间隙。该方案作者采用吸入式异氟烷作为首选镇静方法，因其可使小鼠快速起效并迅速恢复23。进行RBI时，通过施加压力使眼球部分突出于眼眶之外23。随后，将针头以30度角从内眦处刺入，针尖斜面朝下，插入直至抵达眼球基部23。在对动物施加压力时必须格外小心，以防意外导致血流阻塞或气管塌陷23。此外，操作者在插入针头时无法直视针尖位置，因此存在损伤眼球的风险23。在治疗性给药过程中损伤眼球是本实验中的关键风险，因为造成额外损伤会直接影响研究结果的可靠性。还须注意的是，前述定位与操作技术均在小鼠中实施，未涉及对大鼠应用的可行性说明。
视神经和视网膜的摘除方法有多种。其中一种方法是整块切除视神经和眼球，以保留完整的视交叉。24该方法与本研究最为相似，因为同样保留单侧眼球和视神经以进行整块切除；然而，视交叉被分离。由于该操作步骤较为复杂，实施过程中需格外谨慎。在本方法中，我们开始解剖 通过 从尾侧颅骨开始并向头侧方向操作，以限制对视神经的损伤，并确保整条神经保持完整。此外，在包埋过程中，保持神经完整并附着于眼球至关重要，因为神经各部分的损伤可能对应不同的病理学观察结果。24视神经的方位至关重要，因其嵌入方式会导致不同的横切面，这可能对组织学分析具有重要意义。
一种定制设备，称为小型动物实验室眼科手术台（SALOOT，一种眼科手术平台），由一系列3D打印材料组成，用于提供麻醉并将动物固定在稳定位置，以便进行眼部治疗性注射。SALOOT的设计可稳定头部及眼部结构，从而提升手术操作的速度与可重复性，同时支持气体麻醉的输送以及呼出颗粒物的回收。SALOOT为一个三维打印的结构块，其表面设有凹陷区域用于固定大鼠身体，前端较窄部分用于将动物头部固定于带有异氟烷进气口的鼻罩中。鼻罩下方设有一个小型储液腔和排气出口。以下方法旨在实现治疗性眼部给药及精确的眼部组织获取；这些方法专为研究眼部创伤后的组织而设计，因此必须明确区分创伤、注射、治疗和解剖等各因素的影响，以避免对研究结果产生混淆性解读。
本文介绍了两种用于成年大鼠的眼科治疗注射方法，即玻璃体内注射和球后注射。此外，还介绍了一种组织获取方法，用于从成年大鼠完整地整体取出视神经和视网膜。这些技术可用于研究诱导性病理及治疗对眼部及眼周组织的影响。

<table><tbody><tr><td>Anakinra 100 mg/0.67 mL&amp;nbsp;</td><td>Sobi</td><td>NDC：66658-0234-07</td><td></td></tr><tr><td>盐酸阿替帕唑（Antisedan）5.0 mg/mL</td><td>硕腾</td><td>NADA #141-033 | 107204-8</td><td></td></tr><tr><td>抑菌性氯化钠（0.9%）</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC：0409-1966-02</td><td></td></tr><tr><td>冻存管</td><td>VWR</td><td>76417-258</td><td>&amp;nbsp;https://us.vwr.com/store/product?keyword=76417-258</td></tr><tr><td>弯头镊子&amp;nbsp;</td><td>Fischer Scientific&amp;nbsp;</td><td>08-953F</td><td></td></tr><tr><td>环孢素注射液 250 mg/mL&amp;nbsp;</td><td>Perrigo</td><td>NDC：00574-0866-10</td><td></td></tr><tr><td>0.05% 环孢素局部用（Restasis）&amp;nbsp;</td><td>艾伯维（Vizient）</td><td>NDC：00023-9163-30</td><td></td></tr><tr><td>细胞管帽</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>3471BLK</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/screw-cap-microcentrifuge-tube-caps/14755237?searchHijack=true&amp;amp;searchTerm=&lt;br/&gt; 螺旋盖微量离心管管盖&amp;amp;搜索类型=快速搜索&amp;amp;&lt;br/&gt; 货号=14755237</td></tr><tr><td>伊文思蓝&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E2129-10G</td><td></td></tr><tr><td>眼刺</td><td>Fischer Scientific&amp;nbsp;</td><td>NC0972725</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/ultracell-pva-eye-spears-100-p/NC0972725</td></tr><tr><td>精细镊子&amp;nbsp;</td><td>Fischer Scientific&amp;nbsp;</td><td>08-953E</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-dissecting-jewelers-microforceps-2/08953E?gclid=Cj0KCQiAkJO8BhCGARIsAM&lt;br/&gt; kswyiER9Kanmi3ZMgoXTr82Zg3&lt;br/&gt; g44m1Q6WLftkYfb36hC7pbkwR&lt;br/&gt; hVAy3MaAqkLEALw_wcB&amp;amp;ef_id&lt;br/&gt; =Cj0KCQiAkJO8BhCGARIsAMks&lt;br/&gt; wyiER9Kanmi3ZMgoXTr82Zg3g4&lt;br/&gt; 4m1Q6WLftkYfb36hC7pbkwRhV&lt;br/&gt; Ay3MaAqkLEALw_wcB:G:s&amp;amp;ppc&lt;br/&gt; _id=PLA_goog_2086145680_81&lt;br/&gt; 843405274_08953E__38624700&lt;br/&gt; 1354_6556597232892883360&amp;amp;&lt;br/&gt; ev_chn=shop&amp;amp;s_kwcid=AL!4428&lt;br/&gt; !3!386247001354!!!g!827721591&lt;br/&gt; 040!&amp;amp;gad_source=1</td></tr><tr><td>带齿精细眼科镊&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-253-8287</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/bonn-suturing-forceps-7-5-cm/502538287</td></tr><tr><td>扁头刮刀&amp;nbsp;</td><td>Fischer Scientific&amp;nbsp;</td><td>14-375-100</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-spoonula-lab-spoon/1437510#?keyword=</td></tr><tr><td>热珠灭菌器&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td>https://www.finescience.com/zh-CN/Products/Instrument-Care-Accessories/Sterilization/Hot-Bead-Sterilizers</td></tr><tr><td>0.3%羟丙甲纤维素（GenTeal Tears 重度干眼凝胶）&amp;nbsp;</td><td>Alcon Laboratories Inc.</td><td></td><td>https://www.amazon.com/GenTeal-Tears-Lubricant-Ointment-Night-Time/dp/B01IN5G1L0/ref=sr_1_4?dib=eyJ2IjoiMSJ9.DxYpqjIIBNO&lt;br/&gt; TVuPo7jln5xeGazA_YFg0cbt3&lt;br/&gt; kCyC-0ouZARw5qIHYvCM7vB&lt;br/&gt; R_vO30OWUEXDZhQmQfLQ9&lt;br/&gt; ySld4mujpzrWjxbsEXLBs5JPhjZ&lt;br/&gt; eUPgPY0sHoJA46f9EYULdxiTu&lt;br/&gt; BQy5fVA2OB20RV09mbdW8hX&lt;br/&gt; 6j8-bXIYTZljPGMo5_GMq9jnJo8&lt;br/&gt; 3iR35c1THxEiEH2FsvSx7VXup-&lt;br/&gt; QK9uCkWwAYrw2v3tyLUCq2JT&lt;br/&gt; APPF34nsYqGnSASMgOARU_&lt;br/&gt; 2lVz-kIy-QUEYHGOoIimIWwBY&lt;br/&gt; htz33RkFrq7YjtnC2uDbImNiudG&lt;br/&gt; zWJv-uUhmJngYjbBGbeWE0VX&lt;br/&gt; 7CGPkEokUZrCQ8AI2HeXjSMph&lt;br/&gt; gPhMbK88RcHJ63AyH0TiBtS2k1&lt;br/&gt; Xceh-CD26_prJSNxF6Mv5-jgGf9&lt;br/&gt; iLmXvVtKkkSwc-5uYLk7gZHaFC&lt;br/&gt; Yj73F_imbmeHYr.4vfu7h4m4Jlfy-&lt;br/&gt; qiqmgeAnDHlJTGYV22HJ2w_xD&lt;br/&gt; ir0k&amp;amp;dib_标签=se&amp;amp;关键词=庆大霉素&lt;br/&gt; eal+gel&amp;amp;qid=1736793609&amp;amp;sr=8-4</td></tr><tr><td>伊布地兰&amp;nbsp;</td><td>Millipore Sigma</td><td>I0157-10MG</td><td></td></tr><tr><td>0.5 mL 胰岛素注射器，配 28 号 Micro-Fine IV 针头</td><td>Becton, Dickinson and Company (BD)</td><td>14-826-79</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷&amp;nbsp;</td><td>Covetrus</td><td>NDC：11695-6777-2</td><td></td></tr><tr><td>氯胺酮&amp;nbsp;</td><td>Covetrus</td><td>NDC：11695-0703-1</td><td></td></tr><tr><td>Long Evans大鼠</td><td>查尔斯河实验室国际公司</td><td></td><td>https://www.criver.com/products-services/find-model/long-evans-rat?region=3611</td></tr><tr><td>梅奥剪刀&amp;nbsp;</td><td>电子显微镜科学公司</td><td>72968-03</td><td></td></tr><tr><td>中号显微剪刀&amp;nbsp;</td><td>亚马逊</td><td></td><td>https://www.sigmaaldrich.com/中国台湾/zh/product/aldrich/z168866#product-documentation</td></tr><tr><td>中等直型止血钳或持针器&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z168866-1EA</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/z168866#product-documentation</td></tr><tr><td>33G针头，4型针尖，长度10 mm，角度15度&amp;nbsp;</td><td>Hamilton</td><td>7803-05</td><td></td></tr><tr><td>4% 多聚甲醛磷酸盐缓冲液（PBS）（4% PFA）&amp;nbsp;</td><td>赛默飞世尔科技&amp;nbsp;</td><td>J61899.AK</td><td></td></tr><tr><td>培养皿&amp;nbsp;</td><td>Millipore Sigma</td><td>P5606-400EA</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/US/zh/product/sigma/p5606?utm_source=google&amp;amp;utm_medium=&lt;br/&gt; cpc&amp;amp;utm_campaign=8674694095&lt;br/&gt; &amp;amp;utm_content=105162454052&amp;amp;&lt;br/&gt; gad_source=1&amp;amp;gclid=Cj0KCQiA&lt;br/&gt; kJO8BhCGARIsAMkswygXXfgY&lt;br/&gt; ABr7EfLtf4tvuLS0E8A4SxX4XM&lt;br/&gt; NJQDaI80Yi4FO-iahCsPcaAp9E&lt;br/&gt; EALw_wcB</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3813-10PAK</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/p3813</td></tr><tr><td>聚维酮碘（贝塔碘）5%&amp;nbsp;</td><td>Alcon Laboratories Inc.</td><td>NDC：0065-0411-30</td><td></td></tr><tr><td>Shaker Model 3500&amp;nbsp;</td><td>VWR</td><td>89032-092</td><td></td></tr><tr><td>小型虹膜剪&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z265977-1EA</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/z265977&amp;amp;</td></tr><tr><td>小型显微剪刀&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>17-456-004</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/self-opening-scissors-2/17456004?keyword=true</td></tr><tr><td>斯普拉格-道利大鼠</td><td>查尔斯河实验室国际公司</td><td>SAS 400</td><td>https://emodels.criver.com/product/400</td></tr><tr><td>蔗糖&amp;nbsp;</td><td>Millipore Sigma</td><td>57-50-1</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/US/en/substance/sucrose3423057501</td></tr><tr><td>注射器 10 &amp;micro;L （Model 701 RN）</td><td>Hamilton</td><td>80330</td><td></td></tr><tr><td>纹身墨水（Intenze 纹身墨水 True Black 1 oz）</td><td>亚马逊</td><td></td><td>https://www.amazon.com/Intenze-Tattoo-Ink-True-Black/dp/B01GW747L2</td></tr><tr><td>牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）&amp;nbsp;</td><td>默克密理博</td><td>580549-1GM</td><td></td></tr><tr><td>0.5% 盐酸四环卡因滴眼液</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb Inc.</td><td>NDC：68682-920-64</td><td></td></tr><tr><td>赛拉嗪（Rompun）100 mg/mL</td><td>Dechra</td><td>NADA #047-956 |</td><td></td></tr></tbody></table>

成人鼠眼部药物递送与先进组织获取

Ocular Therapeutic Delivery and Advanced Tissue Retrieval in Adult Rats

将治疗药物递送至眼后段（包括视网膜和视神经）受到血-脑屏障和血-视网膜屏障存在的限制。小型动物模型（如大鼠）被广泛用于研究多种眼部病理。尽管向眼后段递送治疗药物具有挑战性，但实现有效递送对于治疗多种眼部疾病至关重要，其中许多疾病需要在小型动物模型中进行验证以确保其转化应用价值。因此，本文介绍了两种适用于成年大鼠的眼后段治疗递送技术：玻璃体内注射（IVI）和球后注射（RBI）。此外，还介绍了一种整块摘除眼球和视神经的方法，可用于多种组织学和分子分析技术。该解剖方案可在最大限度减少死后对视网膜和视神经组织损伤的同时，实现对神经视觉系统的完整观察。通过玻璃体内注射和球后注射两种方法，成功将治疗药物环孢素递送至视网膜和视神经，并在注射后24小时仍可检测到药物浓度。此外，成功提取了整块的视网膜和神经组织样本，用于全眼球组织学分析，从而实现了对视网膜及更广泛的神经视觉系统的全面观察。

初步的预实验在尸体动物上进行，使用了注射染料（伊文思蓝染料）和纹身墨水图2B) 以优化RBI和IVI的针头位置与尺寸。纹身墨水未作稀释，随后将伊文思蓝粉末加入PBS中，直至液体呈不透明状。我们得出理想的RBI操作应采用28 G针头，沿眶下缘6至7点钟方向的中间角度进针，直至触及眼窝后壁。此位置可将染料输送至眶后部、靠近神经处，同时避免刺穿视神经。类似地，在完成该初步尸体染料试验后，进行了IVI注射，但由于纹身墨水与33 G针头合用时黏度过高，故仅使用伊文思蓝染料。确定注射方案后，开展概念验证实验。 体内 治疗研究采用体重为200 g的雄性色素性Long-Evans大鼠（n = 18）进行。此外，为评估RBI的安全性，另采用雄性Long-Evans大鼠（n = 2）进行光适应闪光视觉诱发电位（fVEP）检测。记录基线fVEP数值后，于生理盐水注射后7天100 µL) 注入右眼（OD）后，再次进行闪光视觉诱发电位（fVEPs）检测。左眼（OS）未接受注射。fVEPs 检测依照既定方案进行，信号采集时背景光照强度为 30 cd/m²。2 利用白...

本研究介绍了一种将治疗剂递送至成年大鼠视网膜和视神经的方法。此外，还提出了一种独特的组织获取方法，可自上而下整体切取成年大鼠的视神经和视网膜。

治疗递送至眼后段（包括视网膜和视神经）因血-脑屏障和……的存在而变得复杂

本研究的目的是开发用于将药物递送至眼后部以治疗多种眼部疾病的注射技术。我们还希望开发一种能够整体可视化整个视路的技术。目前的文献中缺乏针对成年大鼠眶后注射的标准化方法。本方案旨在建立这一方法，同时提供一种自上而下的操作流程，以获取整个神经视觉通路的整块组织样本。与其他技术相比，该损伤方案可最大限度地减少潜在的死后损伤，并获得完整的球体和神经组织块。另一方面，我们的注射方案详细说明了有效的针头尺寸，以确保未来实验的可重复性。这些发现将拓展关于成年大鼠球后注射的文献资料，并能够实现对小型动物模型眼后段组织的治疗干预及整块组织分析。未来的研究将致力于利用这些技术在小型动物模型中治疗后部眼损伤。我们还希望利用这种解剖技术完整地提取组织，同时避免对其造成损伤。首先，将麻醉后的动物置于眼科手术平台上，并放置在活体手术显微镜下。使用装有33号针头的10微升注射器吸取0.9%抑菌氯化钠溶液。用生理盐水冲洗注射器和针头，然后将针头浸入热珠灭菌器中进行消毒。待针头冷却后，用其吸取所需剂量的治疗药物。使用带齿的精细眼科镊子轻轻夹住角膜缘处的巩膜组织以固定眼球。识别虹膜周围隐约可见的红色环状结构，并将其作为解剖标志。将针头斜面朝下刺入，将药物注射至眼球后部。缓慢拔出针头。闭合眼睑并施加压力10至15秒。用生理盐水冲洗注射区域。再次将麻醉后的动物置于眼科手术平台上，并放置在活体手术显微镜下。使用带有28号针头的0.5毫升胰岛素注射器，吸取所需体积的治疗药物。使用带齿的精细眼科镊子轻轻夹住下眼睑以固定眼球。将针头斜面朝下，在六点至七点方向沿下眶缘以一定角度进针，直至触及眼窝后部。稍向后退针，然后缓慢注入治疗药物。轻柔且缓慢地拔出针头。闭合眼睑并施加压力10至15秒，随后用生理盐水冲洗眼部。在两侧从枕骨大孔至颞区轻轻击穿侧颅骨后，使用扁平刮匙轻柔地将脑组织向前翻起，以暴露视神经。当视神经清晰可见时，使用一对中型显微剪刀在视交叉处做一小切口，切断两侧视神经与脑组织的连接。使用小型虹膜剪刀和带齿的眼科显微镊子，仔细清除眼球周围多余的组织，如眼睑和结缔组织。使用止血钳和小型虹膜剪刀小心剪开眼眶结构，注意避免损伤视神经。使用止血钳折断眼窝后部的骨骼，必要时可使用小型解剖剪以提高精度。去除骨骼后，使用显微剪刀和精细镊子精细地围绕眼眶剪除脂肪垫、腺体和眼外肌。接下来，清除下颅骨嵴周围包裹神经的结缔组织。进一步清理视神经和眼球上残留的多余组织，例如硬脑膜鞘。该图展示了闪光视觉诱发电位（FVEP）检测结果，用于评估球后注射随时间推移对视觉功能的安全性。在基线和第7天，注射生理盐水的右眼与未处理的左眼之间的FVEP波幅无显著差异，证实了球后注射方案的安全性。生理盐水处理的右眼FVEP波形在基线与第7天之间保持一致，表明视觉通路功能未受干扰。完整的视神经和眼球被成功分离并处理，免疫荧光染色显示视神经头结构完整，神经元、胶质细胞及核成分标记清晰。该表格总结了不同神经保护性治疗药物在给药24小时后于视网膜和视神经组织中的检测情况。环孢素通过两种注射途径均能在两种组织中检测到，而牛磺熊去氧胆酸和伊布地兰几乎未被检测到，阿那白滞素仅在玻璃体内注射后于视网膜中被检测到。

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成年大鼠的眼部治疗递送和高级组织检索

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通过Elvax 40W对大鼠视网膜进行缓释药物递送：对慢性疾病治疗的意义

关键词：缓释给药，Elvax 40W，大鼠视网膜，慢性疾病，眼内给药，药物递送系统

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视网膜神经节细胞（RGCs）的继发性变性在青光眼中较为常见。本研究描述了一种部分视神经横断的创新手术方法。该节省空间的手术方法拓展了模型的应用范围，使得以一种新的方式探索RGCs中的继发性损伤机制成为可能。...

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我们介绍一种制备澄清的人类大脑皮层匀浆物的技术，通过SDS-PAGE进行蛋白质分离，抗原修复，并使用针对Aβ肽的抗体进行免疫印迹。采用该方案，我们能够持续在患有阿尔茨海默病病理的人类皮层组织中检测到单体及多聚体形式的Aβ。...

利用抗原表位修复法通过SDS-PAGE/免疫印迹检测人脑皮层组织匀浆中的Aβ多聚体

了解成年大鼠眼球后注射的标准化方法，用于视网膜和视神经的药物递送。该技术结合整体组织取样，可最大限度减少死后损伤，为眼部病理治疗研究提供可靠平台。

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