小鼠类风湿关节炎的过继转移模型

在这里，我们报道了一种通过过继转移 SKG 小鼠的 CD4 ⁺ T 细胞建立类风湿性关节炎 （RA） 小鼠模型的方案，为研究 RA 的免疫机制、病理进展和新疗法的开发提供了一种快速可靠的实验工具。

本研究的范围是建立快速稳定的类风湿性关节炎动物模型，用于研究其发病机制和分子机制。目前的类风湿性关节炎动物模型在实验实用性方面存在局限性，包括诱导时间延长、成本效益不理想以及疾病表型重现性不一致。在这里，我们通过将SKG小鼠CD4+ T细胞过继转移到野生型C57BL/6小鼠中，开发了一种新型类风湿性关节炎模型，在14天内实现了100%的高发病率，这比传统方法快得多。这种经济高效、高度可重复的系统独特地能够实现精确的免疫机制分析和治疗测试。

[旁白]首先，将安乐死的SKG小鼠浸入75%酒精中五分钟进行消毒。定位腹腔内的脾脏和腹股沟和腘窝区域的淋巴结。使用无菌镊子和剪刀仔细解剖脾脏和淋巴结，并立即将其转移到预冷的 PBS 中。将脾脏和淋巴结放入单独的培养皿中。然后使用无菌注射器的柱塞将组织压入 70 微米的细胞过滤器，同时逐渐加入 10 至 12 毫升预冷的 PBS 以形成均匀的细胞悬液。将细胞悬液转移到 15 毫升离心管中。然后将试管以 300 G 在 4 摄氏度下离心 7 分钟。弃去上清液并保留细胞沉淀。使用 CD4+ T 细胞分离试剂盒中提供的适量缓冲液将细胞浓度调整为 10 倍，每毫升 8 个细胞的幂。然后将 10 微升细胞悬液与台盼蓝混合以评估细胞活力。现在，将 100 微升细胞悬液转移到新管中。将 10 微升生物素抗体混合物移液到试管中。充分混合并在冰上孵育 15 分钟。通过以最大速度涡旋重新悬浮珠子。将 10 微升链霉亲和素珠悬浮液加入试管中，充分混合，并在冰上孵育 15 分钟。接下来，将 2.5 毫升试剂盒缓冲液加入试管中，并将其放在磁分离架上 5 分钟。小心地将含有靶细胞的液体倒入新的无菌管中。将试管以 300 G 在 4 摄氏度下离心 5 分钟。然后弃去上清液并保留细胞沉淀。现在，加入足够的无菌PBS将细胞浓度调整为每毫升200万个细胞，并将悬浮液保持在冰上以备后用。对于CD4 + T细胞的过继转移，首先，用无菌棉签轻轻清洁麻醉的C57BL / 6小鼠的内眦。用手固定鼠标。然后将 200 微升 CD4+ T 细胞悬液吸入一毫升注射器中。将针头以 10 至 15 度角插入眶后窦，确保准确放置。在 10 到 15 秒内缓慢而均匀地注入悬浮液。拔针后，用无菌棉签轻轻按压眶后窦区域三到五秒，以防止出血。现在将鼠标放在安静、干燥、干净的笼子里进行监测，直到它完全恢复意识，呼吸稳定，没有异常行为。记录输液细节并标记模型组和对照组小鼠，确保每组四只动物，以避免混淆。将CD4 + T细胞注射到模型小鼠，同时不处理对照小鼠。在第四天，称量甘露聚糖粉并将其溶解在无菌PBS中，浓度为每毫升100毫克。牢牢握住鼠标以露出其腹部，然后使用碘伏对皮肤进行消毒。将注射部位定位在腹部中线一侧约一厘米处。将甘露聚糖溶液充分混合。将 20 至 30 毫克溶液吸入一毫升注射器中。将针头以45度角插入腹膜腔，缓慢注射，确保分布均匀。慢慢拔出针头，用无菌棉签轻轻按压注射部位几秒钟。将鼠标转移到安静干净的笼子中，观察5至10分钟，确保没有渗漏、腹胀或呼吸异常。彻底记录每只小鼠的注射细节。模型组的发生率达到 100%，关节肿胀的临床评分在六周内显着增加，并在第二周观察到暂时缓解。观察到模型组小鼠的前肢和后肢关节明显增厚和肿胀。 与对照组相比，模型组小鼠的踝关节病变显示明显的滑膜增厚、骨不连续和明显的炎症细胞聚集。血清分析显示，与对照组相比，模型组的IL-6、IL-10、TNF、IL-17和IFN-γ水平显著升高。在脾脏中，与对照组相比，模型组的TBX21和IL-17 mRNA水平显着升高，表明Th1和Th17细胞活性增加。