Name: 前列腺癌相关成纤维细胞的分离、培养和表征 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: 了解从前列腺癌根治术标本中分离、扩增和永生化癌症相关成纤维细胞（CAFs）的方法，并评估其与肿瘤细胞的相互作用。该方案为研究CAFs在肿瘤微环境中的作用提供了可靠工具。

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本工作由意大利癌症研究协会（AIRC）、&#160;IG16930&#160;和 IG24851（资助对象：V.P.）；意大利大学与研究部（MIUR PRIN 2017 和 2022，资助对象：V.P.）；列支敦士登 Truus 和 Gerrit van Riemsdijk 基金会向 V.P. 提供的捐赠；皮埃蒙特大区（Deflect 项目）资助。A.S. 获得意大利癌症研究基金会（FIRC）博士后奖学金支持，L.A. 由 Umberto Veronesi 基金会资助。图 2&#160;使用&#160;BioRender.com 制作。

作者声明无竞争利益。

从前列腺癌（PCa）组织中分离和分析细胞提供了一个相关的实验模型，特别是考虑到现有的动物模型无法完全复制人类前列腺的解剖结构和疾病进展过程37。黑猩猩的前列腺在解剖结构上与人类相似，但其疾病进展缓慢且具有随机性，同时还存在伦理限制。犬类在前列腺结构和病理生物学方面与人类差异显著，并仅发生零星的、与年龄相关的前列腺疾病。常用实验动物如大鼠和小鼠在前列腺解剖结构、上皮-间质比例以及干细胞标志物表达方面均存在差异。此外，小鼠难以诱导前列腺恶性肿瘤，而大鼠则需要激素类致癌物，因此这些模型在研究人类前列腺疾病时并不理想37。体内人源-小鼠异种移植模型是一个有价值的工具，尤其适用于临床前治疗试验。然而，其主要局限在于缺乏功能性的人类免疫细胞以及肿瘤微环境（TME）中的其他关键组分，如癌症相关成纤维细胞（CAFs），后者在肿瘤进展中发挥着关键作用（详见Sasaki等人的综述13）。
一种用于研究前列腺癌细胞与癌症相关成纤维细胞（CAFs...

前列腺癌（PCa）是全球近三分之二国家中男性最常被诊断出的癌症。2022年，全球约报告了150万例新发病例，导致39.7万人死亡。这些数据使前列腺癌成为男性中第二常见的癌症，以及男性癌症相关死亡的第五大主要原因1。
前列腺癌是一种多灶性且生物学上复杂的疾病，其特征是显著的肿瘤间异质性2,3,4、多种分子亚型以及不同的临床结局5,6，这些因素均显著影响预后和治疗反应7。
尽管肿瘤微环境（TME）在前列腺肿瘤的发生和进展中的关键作用已得到充分证实8,9，肿瘤细胞与周围间质成分之间的分子相互作用仍尚未完全阐明。虽然已明确前列腺肿瘤微环境（TME）在肿瘤起始和进展中发挥关键作用，但肿瘤细胞与周围间质之间的分子相互作用仍缺乏充分定义。TME包含多种间质细胞，包括间充质来源和免疫来源的细胞，这些细胞在接收到肿瘤分泌的信号后被激活，并继而获得促进肿瘤的功能10,11。其中，癌症相关成纤维细胞（CAFs）通常是间质中最丰富的细胞群体。CAFs参与细胞外基质（ECM）的重塑，促进肿瘤生长，并推动癌细胞的侵袭和迁移4,11,12,13。通过分泌因子和直接的细胞间相互作用，CAFs还影响癌细胞的增殖、侵袭以及对治疗的耐药性。值得注意的是，CAFs是一类异质性细胞群体。尽管通常被认为具有促肿瘤功能，但某些亚型可能发挥抑制肿瘤的作用14,15。重要的是，目前缺乏CAFs特异性的标志物，这为其精确识别及其多种功能的解析带来了挑战12,16。
研究癌症相关成纤维细胞（CAFs）与肿瘤细胞之间功能相互作用的一种可靠方法是分离原代CAFs及其配对的正常成纤维细胞（NFs），并评估它们各自对肿瘤细胞行为的影响，例如增殖、迁移、克隆形成以及非贴壁依赖性生长17,18,19。本文介绍了一种优化的、高度可重复的从高危前列腺癌（PCa）患者根治性前列腺切除标本中分离CAFs和NFs的实验方案。该方案的关键步骤是由经验丰富的泌尿病理学家准确识别并分离肿瘤组织及无肿瘤区域，从而能够从同一患者来源获取CAFs和NFs。这种配对样本策略有助于控制肿瘤间异质性以及可能影响成纤维细胞表型的个体特异性变量20,21,22。为确保有足够的肿瘤组织可用，我们聚焦于Gleason评分≥7患者的标本。
对分离的成纤维细胞进行可靠的表型表征需要使用多种标志物，以将其与其他细胞类型（尤其是上皮细胞）区分开来，因为这些细胞可能存在标志物表达的重叠16由于原发性前列腺癌成纤维细胞通常在传代10–15次后进入衰老状态，从而影响长期分析，我们还提供了一种细胞永生化方案。 通过 人端粒酶逆转录酶（hTERT）的稳定表达23.
为了探究癌症相关成纤维细胞（CAFs）和正常成纤维细胞（NFs）对肿瘤细胞的功能影响，我们测试并优化了多种实验策略。鉴于CAFs通过分泌因子和直接的细胞间接触发挥作用24，我们建立了两种互补的检测体系：（1）用成纤维细胞条件培养基（CM）处理癌细胞；（2）将成纤维细胞与肿瘤细胞直接共培养。这些检测方法用于评估癌细胞的关键特性，包括增殖能力、非贴壁依赖性生长能力和迁移能力。为了标准化分泌因子的影响，我们根据总蛋白含量对来自CAFs和NFs的条件培养基进行浓缩和定量（conCM）。
通过这些检测方法证明显著的功能性效应，可支持鉴定CAF驱动的肿瘤发生中的关键介质，从而为治疗干预提供潜在靶点。

<table><tbody><tr><td>12 孔板</td><td>Sarstedt</td><td>833921</td><td></td></tr><tr><td>24 孔板</td><td>Sarstedt</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>6 孔板</td><td>Sarstedt</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>96 孔板</td><td>Sarstedt</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>抗 GAPDH 小鼠单克隆抗体（6C5）</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CB1001</td><td>来源：小鼠；WB 稀释比例：1:1000</td></tr><tr><td>aSMA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5228&amp;nbsp;</td><td>来源：小鼠；WB 稀释比例：1:3000</td></tr><tr><td>Caveolin</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>CST3267</td><td>来源：兔；WB 稀释比例：1:1000</td></tr><tr><td>CD31-VioBlue</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-119-980</td><td>流式细胞术抗体，内皮细胞标志物</td></tr><tr><td>CD326-PE（EpCAM）</td><td>Milteny Biotec</td><td>130113-826</td><td>流式细胞术抗体，上皮细胞标志物</td></tr><tr><td>CD45-FITC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-110769</td><td>流式细胞术抗体，泛白细胞标志物</td></tr><tr><td>CD90-APC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-114-903</td><td>流式细胞术抗体，成纤维细胞标志物</td></tr><tr><td>胶原蛋白 VI（COL6A1）</td><td>Abcam</td><td>ab182744</td><td>来源：兔；WB 稀释比例：1:1000</td></tr><tr><td>15 mL 锥形管</td><td>Sarstedt</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 锥形管</td><td>Sarstedt</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>2 mL Cryopure 微量离心管</td><td>Sarstedt</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>100 mm 直径培养皿&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>100 mm 直径培养皿&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>353025</td><td></td></tr><tr><td>60 mm 直径培养皿&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>二甲基亚砜（DMSO）</td><td>Sigma Aldirch</td><td>D8418</td><td>在生物安全柜中使用</td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s 改良 Eagle&amp;rsquo;s 培养基（DMEM）</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>4 &amp;deg;C 保存，在生物安全柜中使用</td></tr><tr><td>FAP</td><td>Abcam</td><td>ab53066</td><td>来源：兔；WB 稀释比例：1:500</td></tr><tr><td>人源 FcR 封闭试剂</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-059-901</td><td>Fc 封闭剂</td></tr><tr><td>胎牛血清（FBS）</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>4 &amp;deg;C 保存，在生物安全柜中使用</td></tr><tr><td>10 &amp;micro;L 滤芯吸头</td><td>Sarstedt</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>100 &amp;micro;L 滤芯吸头</td><td>Sarstedt</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>1000 &amp;micro;L 滤芯吸头</td><td>Sarstedt</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>20 &amp;micro;L 滤芯吸头</td><td>Sarstedt</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>200 &amp;micro;L 滤芯吸头</td><td>Sarstedt</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0.20 &amp;micro;m&amp;nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>镊子</td><td>2Biol</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>FSP1/S100A4</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>D9F9D (13018)</td><td>来源：兔；WB 稀释比例：1:2000</td></tr><tr><td>IL6</td><td>Abclonal technology</td><td>A0286</td><td>来源：兔；WB 稀释比例：1:1000</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>美国国立卫生研究院</td><td>version 1.53c</td><td>图像分析软件</td></tr><tr><td>incucyte imagelock 96 孔板</td><td>Sartorious</td><td>BA-04857</td><td></td></tr><tr><td>Incucyte&amp;reg; SX5</td><td>Sartorious</td><td>SX5</td><td>活细胞分析仪&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000 转染试剂</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11668019</td><td>阳离子脂质介导的转染试剂</td></tr><tr><td>MACS&amp;reg; 组织保存液</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>酶标仪（600 nm 吸光度）</td><td>Promega</td><td>GM3500</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL 微量离心管&amp;nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>Ncad</td><td>Abcam</td><td>ab18203</td><td>来源：兔；WB 稀释比例：1:1000</td></tr><tr><td>硝基蓝四氮唑&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>n5514</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>HS234526B</td><td></td></tr><tr><td>pBABE-puro-hTERT</td><td>Addgene</td><td>1771</td><td>-20 &amp;deg;C 保存，在生物安全柜中使用</td></tr><tr><td>pCL-Ampho</td><td>Novus Biological&amp;nbsp;</td><td>NBP2-29541</td><td>-20 &amp;deg;C 保存，在生物安全柜中使用</td></tr><tr><td>PDGFRB</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-432</td><td>来源：兔；WB 稀释比例：1:1000</td></tr><tr><td>青霉素-链霉素（PS，10,000 &amp;mu;g/mL）&amp;nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>4 &amp;deg;C 保存，在生物安全柜中使用</td></tr><tr><td>相差显微镜&amp;nbsp;</td><td>Olympus&amp;nbsp;</td><td>BX42</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液&amp;nbsp;（PBS）</td><td>自制</td><td></td><td>NaCl，137 mM；KCl，2.7 mM；Na2HPO4，10 mM；KH2PO4，1.8 mM。高压灭菌后室温保存</td></tr><tr><td>多聚-L-赖氨酸溶液</td><td>Sigma Aldirch</td><td>P8920</td><td>4 &amp;deg;C 保存，在生物安全柜中使用</td></tr><tr><td>嘌呤霉素二盐酸盐</td><td>Sigma Aldirch</td><td>P8833</td><td></td></tr><tr><td>Secura 半微量电子天平</td><td>Sartorius</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 血清移液管&amp;nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>2 mL 血清移液管&amp;nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>25 mL 血清移液管&amp;nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 血清移液管&amp;nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>STAT3</td><td>CST</td><td>9139</td><td>来源：小鼠；WB 稀释比例：1:1000</td></tr><tr><td>STAT3 Y705</td><td>CST</td><td>9131</td><td>来源：兔；WB 稀释比例：1:1000</td></tr><tr><td>体视显微镜</td><td>Leica</td><td>MZ125</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 注射器</td><td>Pentaferte</td><td>00202260D12</td><td></td></tr><tr><td>TermoMixer</td><td>Eppendorph</td><td>22331</td><td></td></tr><tr><td>胰蛋白酶-EDTA（0.5%），无酚红</td><td>Gibco</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Vim</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-6260</td><td>来源：小鼠；WB 稀释比例：1:2000</td></tr><tr><td>Vivaspin 20 离心浓缩器&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z614602</td><td>截留分子量 10,000 Da&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>瓦格纳剪刀</td><td>2Biol</td><td>14070-12</td><td></td></tr></tbody></table>

前列腺癌相关成纤维细胞的分离、培养与表征

Isolation, Culture, and Characterization of Prostate Cancer-Associated Fibroblasts

肿瘤间质可被肿瘤细胞主动重塑，从而获得促肿瘤特性，因此成为癌症研究的关键焦点。在间质成分中，癌症相关成纤维细胞（CAFs）通常是肿瘤微环境（TME）中最丰富的细胞类型，通过与肿瘤细胞及其他间质成分的相互作用，在促进癌症进展中发挥关键作用。阐明这些相互作用背后的机制，需要可靠的分离方法&#160;并进行表征&#160;CAFs，这也有助于为开发靶向CAFs的新型癌症疗法奠定基础。本研究介绍了一种从前列腺癌（PCa）患者根治性前列腺切除术标本的肿瘤组织及其邻近正常区域中分离成纤维细胞的方法。该方法能够从同一供体中同步分离肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）及其对应的正常成纤维细胞（NFs），从而构建配对的实验体系。本文提供了详细的实验方案，用于原代CAFs和NFs的培养，以支持后续的体外分析，并介绍了其永生化方法，以便于长期研究。我们还描述了多种功能学检测方法，用于比较CAFs与NFs对癌细胞行为的影响，包括细胞增殖、迁移能力以及非贴壁依赖性生长。文中详述了两种互补的实验策略：一是使用成纤维细胞来源的条件培养基（CM）处理癌细胞，二是将成纤维细胞与肿瘤细胞进行直接共培养。上述方法共同构成了&#160;一种用于研究癌相关成纤维细胞（CAFs）与肿瘤细胞之间动态相互作用的综合工具包，不仅适用于前列腺癌（PCa），还可能广泛适用于多种人类癌症。此外，对这些相互作用的分子表征可能揭示CAFs驱动肿瘤发生的關鍵介质，为治疗干预提供有前景的靶点。

采用本方案成功分离了来自7名高级别前列腺癌（PCa）患者的CAF和NF配对样本。患者手术时的年龄和Gleason评分汇总于表3中。为评估所获得成纤维细胞群体的纯度，将第二代原代CAF和NF消化脱离，并使用指定的荧光标记抗体或碘化丙啶染色以评估细胞凋亡情况。后续FACS分析的代表性结果如图2A所示，展示了设门策略及各标志物阳性细胞所占百分比。分析中包含上皮细胞标志物（EpCAM）、内皮细胞标志物（CD31）、免疫细胞标志物（CD45）以及活化成纤维细胞标志物（CD90）。结果显示，所分离的细胞几乎不表达上皮、内皮或免疫细胞标志物，而对CD90呈不同程度的阳性表达，表明已成功获得高纯度的成纤维细胞；CD90被认为是CAF活化的标志物35,36。在多数情况下，尤其是在早期传代时，CAF相较于NF呈现更明显的梭形形态，如图2B所示。然而，随着传代次数增加，这种形态学差异趋于减弱...

本方案提供了从根治性前列腺切除术标本中分离、扩增和永生化成纤维细胞的完整操作流程。此外，还介绍了利用条件培养基处理和共培养技术评估成纤维细胞与肿瘤细胞之间相互作用功能效应的实验方法。

肿瘤间质可被肿瘤细胞主动重塑，从而获得促肿瘤特性，这使其成为癌症研究的焦点。在间质成分中……

我们的目标是阐明癌症相关成纤维细胞（CAF）在前列腺癌中促进肿瘤进展的作用机制，并致力于通过阻断这种细胞间串扰来开发治疗策略。通过使用肿瘤细胞和间质细胞在不同干预条件下构建的三维类器官，可以评估具有不同特性的CAF亚群。本方案可稳定地生成适用于上述研究的CAF细胞。主要挑战在于从同一患者的微环境中可靠地分离肿瘤细胞和正常细胞、肿瘤异质性、缺乏特异性的癌相关成纤维细胞（CAF）标志物、CAF的可塑性，以及现有体外模型难以充分模拟肿瘤微环境（TME）的复杂性。通过类似的方法，我们阐明了转录因子STAT3及其靶基因在小鼠乳腺癌CAF中的关键促肿瘤作用，并证实其作为治疗靶点的有效性。本研究采用少量组织，从前列腺癌患者根治性前列腺切除标本的肿瘤组织及邻近正常区域中，实现了成纤维细胞的高效分离。首先，在第一天使用天平称量组织样本，以进行成纤维细胞的分离。用无菌镊子将组织转移至6厘米培养皿中。先后用4毫升冰浴PBS和4毫升冰浴完全DMEM各清洗组织两次。现在，将组织转移至一个置于冰上的六厘米培养皿中。向培养皿中加入一毫升添加了抗生素的DMEM培养基。然后使用剪刀或刀片将组织剪碎成小于一平方毫米的碎片。将切碎的组织转移至含有5毫升冰冻完全DMEM的15毫升锥形管中。然后在4°C下以754 ×g离心5分钟。使用10毫升移液管吸除上清液。将沉淀重悬于5毫升冰上预冷的完全DMEM培养基中，再次离心。去除上清液后，将沉淀重悬于II型胶原酶溶液中。将悬液转移至1.5毫升微量离心管中。用石蜡膜密封微量离心管，然后在37摄氏度下孵育过夜，持续振荡消化8至12小时。次日，将消化后的样品转移至15毫升锥形管中。用移液器加入5毫升冰上预冷的完全DMEM以灭活胶原酶。随后在4°C下以754 ×g离心5分钟。弃去上清液后，将沉淀物重悬于1毫升0.05%胰蛋白酶-EDTA溶液中。在37摄氏度下孵育五分钟，期间偶尔振荡。接着，向样品中加入一毫升新鲜配制的DNase I溶液，充分混匀。离心后弃去上清液，将沉淀物重悬于五毫升冷的完全DMEM中，再次离心。将所得细胞重悬于添加了20%胎牛血清的完全DMEM培养基中。接种细胞，并在37°C、5%二氧化碳和95%湿度条件下培养至少三天。三天后，观察细胞的形态和活力。待细胞达到汇合状态后，将其传代至含有添加20%胎牛血清的完全DMEM培养基的10厘米培养皿中。将肿瘤相关成纤维细胞或正常成纤维细胞以70%汇合度接种于12孔板中。次日，在无菌条件下，将0.45克低熔点琼脂加入含有12.5毫升磷酸盐缓冲液（PBS）的50毫升锥形管中。使用微波炉溶解该混合物。将琼脂溶液冷却至37摄氏度。然后与预热的完全DMEM培养基按1:4的比例稀释，以制备工作溶液。从12孔板中吸除培养基。用移液器将500微升工作浓度的琼脂溶液加入每个孔中。在4摄氏度下孵育20分钟，使琼脂凝固。同时，将剩余的琼脂溶液保持在 37 摄氏度。对肿瘤细胞进行胰蛋白酶消化，并制备浓度为每毫升 20,000 个细胞的细胞悬液。取等体积的肿瘤细胞悬液与琼脂溶液混合，得到最终体积为 7 毫升的混合液，以满足每种条件设置三个技术重复的要求。反复吹打数次以确保混合均匀。然后在每个孔中已凝固的基底层上方加入500 µL含有约5,000个细胞的混合液。在4 °C条件下静置20分钟使琼脂凝固后，向每孔加入1 mL完全DMEM培养基。每隔一天更换一次培养基，从孔的边缘轻轻吸出旧培养基，并向孔中央加入新鲜培养基。继续培养至克隆清晰可见。当克隆可见后，弃去培养液。然后用 200 微升氯化硝基蓝四唑溶液对菌落进行染色。在湿润的培养箱中 37 摄氏度孵育过夜。次日，弃去染色液。使用体视显微镜获取染色菌落的图像。成功分离出纯的成纤维细胞。在许多情况下，尤其是早期传代时，癌相关成纤维细胞相较于正常成纤维细胞表现出更明显的梭形形态。定量分析证实，经癌相关成纤维细胞条件培养基处理的DU145细胞在120小时内增殖水平显著高于经正常成纤维细胞条件培养基处理或未处理的细胞。与癌相关成纤维细胞和正常成纤维细胞直接共培养的DU145细胞在96小时内相较于对照组也显示出增殖增加。相应的生长曲线表明，与癌相关成纤维细胞及正常成纤维细胞共培养均随时间推移对DU145细胞增殖产生相似的促进作用。条件培养基对DU145细胞增殖的影响在不同癌相关成纤维细胞与正常成纤维细胞配对样本中存在差异，早期传代的成纤维细胞对DU145细胞的影响显著强于晚期传代样本。在软琼脂克隆形成实验中，与对照组相比，癌相关成纤维细胞和正常成纤维细胞均增加了DU145克隆的数量和大小，表明其锚定非依赖性生长能力增强。由于技术问题导致成纤维细胞层脱落，部分重复实验中克隆形成受到抑制。单独使用条件培养基不能促进DU145细胞的非贴壁依赖性集落形成。

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癌症研究

前列腺癌相关成纤维细胞的分离、培养和表征

癌症相关成纤维细胞（CAFs）通过促进细胞增殖、血管生成和炎症的信号通路，促进肿瘤的发生、生长和进展。本文介绍一种利用细胞分选技术，以PDGFRα作为表面标志物，从新鲜的小鼠和人类组织中分离出纯化的正常成纤维细胞和CAFs群体的方法。...

通过荧光激活细胞分选（FACS）从新鲜组织中分离正常成纤维细胞和癌相关成纤维细胞

直接从人体组织中分离癌症干细胞（CSCs）是对其进行生物学表征的必要步骤。本文描述了一种从人体组织中分离前列腺癌症干细胞的方法，同时提供了针对困难步骤的故障排除建议。...

从人前列腺癌样本中分离癌干细胞

本文介绍一种三维共培养方案，可用于研究多细胞相互作用以及细胞外基质对癌细胞行为的调控作用。在此实验模型中，将癌细胞培养在嵌有人大肠癌相关成纤维细胞的胶原凝胶上。...

三维共培养模型用于肿瘤-间质相互作用研究

成纤维细胞的行为涉及一系列临床疾病实体，但由于其内在的异质性，这些行为仍缺乏充分表征。传统的成纤维细胞研究依赖于体外（in vitro）操作，掩盖了其在体（in...

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在此，我们介绍一种快速建立的方法 体外...

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本文描述了一种基于流式细胞术（FACS）的方案，用于从人皮肤中分离乳头层和网状层成纤维细胞。该方法避免了传统通过组织块培养进行细胞分离时不可避免的体外培养过程。所获得的成纤维细胞亚群在功能上具有差异，并在真皮层内表现出不同的基因表达模式和空间定位。...

通过荧光激活细胞分选法从人皮肤中分离乳头层和网状层成纤维细胞

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超声增强的成年成人原代成纤维细胞分离

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获得成纤维细胞的纯种群体对于研究其在伤口修复和纤维化中的作用至关重要。本文详细描述了一种从正常和损伤的小鼠心脏中分离成纤维细胞和肌成纤维细胞的方法，并通过免疫荧光、逆转录PCR（RTPCR）、荧光辅助细胞分选以及胶原凝胶收缩实验对细胞的纯度和功能特性进行表征。...

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从小鼠同源性乳腺癌模型中分离原代癌症相关成纤维细胞用于靶向纳米颗粒研究

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评估从三维多细胞肺癌球体中分离出的肿瘤相关成纤维细胞的线粒体健康状况

了解从前列腺癌根治术标本中分离、扩增和永生化癌症相关成纤维细胞（CAFs）的方法，并评估其与肿瘤细胞的相互作用。该方案为研究CAFs在肿瘤微环境中的作用提供了可靠工具。

前列腺癌相关成纤维细胞的分离、培养与表征

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