Name: 适应寒冷的 Daurian 地松鼠肝脏冷藏与移植 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: 了解达乌尔黄鼠肝脏长期冷藏与移植模型的建立方法。该研究利用耐寒哺乳动物的自然适应机制，旨在改进人体器官保存技术，延长器官储存时间并提高移植成功率。

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本工作得到了非传染性慢性疾病-国家科技重大专项（2023ZD0507600）和国家自然科学基金（82371794 和 82170671）的支持。同时受到浙江大学教育基金会、院士兰娟人才基金的资助。我们还要感谢威斯康星大学奥什科什分校的 Dana K. Merriman 教授在繁育十三纹地松鼠方面所做的工作，以及她在实验室繁育冬眠啮齿类动物模型方面慷慨分享的宝贵见解与经验。

所有动物实验均经北京大学实验动物护理与使用机构委员会批准（编号：LSC-WangSQ-2）。本研究中使用的关键仪器列于材料表中，并在图1中展示。
注意：在实验室环境中对野生捕获的冬眠啮齿类动物（如十三条纹地松鼠）进行饲养和繁殖的方法已有描述15,16。本研究中使用的地松鼠（DGS）由在张家口市草原捕获的怀孕雌性地松鼠在实验室中繁殖产生。实验时动物年龄约为1-2岁。对于最初捕获的怀孕雌性地松鼠，已在抵达实验室前清除寄生虫。动物到达实验室后进行了隔离，并检测常见病毒，检测结果为阴性的个体被保种饲养。
1. 术前准备
<ol>
	<li>实验动物
	<ol>
		<li>使用成年地鼠（DGS），年龄1-2岁，雌雄不限，体重介于180 g至400 g之间，作为供体和受体。受体体重略大于供体，差异小于50 g。</li>
		<li>对照组使用成年SD大鼠，年龄8-10周，雌雄不限，体重200-300 g，作为供体和受体。在整个实验过程中，需佩戴外科口罩、实验服和丁腈手套；在处理和转移DGS动物时，还需额外佩戴加厚皮革手套。 
		注：大鼠的外科技术已在其他文献中充分记载。本文所述方案重点在于DGS的肝移植技术。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用6 F和8 F的导入鞘分别制作门静脉（PV）和肝下下腔静脉（IHIVC）的套管。每个套管包括一个主体部分和长度为2 mm的延伸部分。用蚊式钳轻轻夹持套管，在其圆周上制作多个环形凹槽（图2）。 
	注：PV和IHIVC的直径因DGS的体型和性别而有显著差异。因此，建议术前准备5-F、6-F、7-F和8-F的套管，以便术中适当选择。通常情况下，5-F或6-F套管适用于PV，而7-F或8-F套管适用于IHIVC。</li>
	<li>使用手术刀将22 G和24 G静脉导管分别切成双斜面管状结构，作为胆管（3 mm）和肝动脉（2 mm）的支架。 
	注：避免对支架施加过大压力，以免导致管腔狭窄或闭塞，影响受体存活。</li>
</ol>
2. 供体手术
<ol>
	<li>初始步骤
	<ol>
		<li>使用5%异氟烷浓度（气流速1 L/min）进行麻醉诱导，2%异氟烷浓度（气流速1 L/min）维持麻醉。</li>
		<li>将DGS置于仰卧位，固定于带有加热垫的板上，以维持术中体温。剃除腹部区域的毛发并进行消毒&#160;用聚维酮碘和70%乙醇交替涂抹皮肤3次。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>灌流前肝脏的分离
	<ol>
		<li>通过夹捏脚趾确认麻醉深度。从剑突延伸至耻骨联合，并横向至腋中线，做十字形切口。使用蚊式钳提起剑突，并在其后方放置一支5 mL注射器作为支撑。</li>
		<li>横断镰状韧带。从膈下腔静脉（SHIVC）分离出左膈静脉，并用7-0缝线结扎。电灼肝脾韧带。</li>
		<li>使用棉签仔细分离右肾静脉上方的下腔静脉（IHIVC）周围组织。用7-0缝线结扎近肝脏处汇入下腔静脉（IHIVC）的右肾上腺静脉和腰静脉。</li>
		<li>在胆总管（CBD）前壁做一小切口。插入胆道支架，并用7-0丝线缝合固定。缝线一端留约5 mm长度，以利于后续与受体胆总管进行吻合。</li>
		<li>分离肝固有动脉（PHA）、胃十二指肠动脉（GDA）和肝总动脉（CHA）周围的组织。</li>
		<li>向阴茎静脉（雄性供体）或髂内静脉丛（雌性供体）注入1.5 mL肝素化生理盐水（300 IU/mL）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>肝脏灌注
	<ol>
		<li>在左肾静脉下方分离腹主动脉。将7号静脉注射针插入主动脉，并用夹子固定。</li>
		<li>切开膈肌，并在胸主动脉上放置血管夹。</li>
		<li>通过主动脉插管，使用输液泵以180–210 mL/h的速度向肝脏灌注20–30 mL冷UW溶液。切开胸腔内静脉和右肾静脉上方的下腔静脉（IHIVC），以使灌注液流出。 
		注意：使用棉签调整肝叶位置，以确保灌注均匀，特别注意中叶和右叶。当整个肝脏呈现均匀的苍白色时，表明灌注完成。</li>
		<li>灌注期间，切除胆囊。 
		注意：与大鼠不同，豚鼠具有胆囊。为防止术后因胆汁凝固导致胆道阻塞，必须切除胆囊，并用UW溶液冲洗胆管。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>灌注后肝脏移植物获取
	<ol>
		<li>使用显微镊子将门静脉从周围结缔组织中分离。用7-0缝线结扎并横断幽门静脉。在脾静脉水平横断门静脉主干。</li>
		<li>远端结扎并切断胃十二指肠动脉（GDA）。在肝总动脉（CHA）前壁做一小切口。将肝动脉支架插入CHA，并用7-0丝线固定，留出一端约5 mm长，以利于后续与受体CHA的吻合。</li>
		<li>尽可能靠近膈肌处解剖SHIVC。</li>
		<li>分离尾状叶与胃之间的连接。切断背侧韧带后，充分游离肝脏。</li>
		<li>将肝脏放入盛有冷UW溶液的7厘米钢碗中，将钢碗转移至4 °C冰箱中保存。 
		注意：若肝脏冷保存时间超过24小时，需在UW溶液中添加抗生素以降低感染风险；建议每24小时更换一次UW溶液。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 离体 移植物制备
注意：准备一个敞开的冰容器。整个后桌操作均需在冰上进行。
<ol>
	<li>用血管夹固定门静脉（PV）套管的手柄，并使用蚊式钳将其稳定。轻柔地将门静脉穿过套管，确保无扭曲发生。将门静脉翻折覆盖在套管上，并用7-0缝线固定（图3）。</li>
	<li>对肝下腔静脉（IHIVC）套管重复上述操作（步骤3.1）。</li>
	<li>经胆囊管向胆管灌注2 mL UW溶液，随后结扎胆囊管。</li>
	<li>经门静脉套管向肝脏移植物冲洗8–10 mL冷生理盐水，以清除冷保存后的残留UW溶液。</li>
	<li>在肝下腔静脉套管与肝脏右下叶之间的IHIVC段上放置一根7-0丝线缝线。</li>
	<li>旋转肝脏以暴露其上表面。在短肝上腔静脉（SHIVC）两侧角处各放置一根8-0固定缝线，从外向内插入。</li>
</ol>
4. 受体操作
<ol>
	<li>初始步骤请参考供体手术方案，并重复步骤 2.1。</li>
	<li>受体肝脏游离
	<ol>
		<li>通过夹趾法确认麻醉深度。从剑突至耻骨联合行正中切口。使用蚊式钳将剑突向上牵拉，并在下方放置一支 5 mL 注射器以抬高下腔静脉（SHIVC）。将双侧肋弓向两侧牵开。</li>
		<li>按照步骤 2.2.2 中所述进行韧带和血管的处理。</li>
		<li>按照步骤 2.2.3 中所述游离肝下下腔静脉（IHIVC）。</li>
		<li>切断肝脏与后腹膜之间的韧带附着。小心地将钝头镊子置于 SHIVC 后方，并在其周围放置一根 7-0 丝线缝线。</li>
		<li>使用 7-0 丝线缝线在近端结扎胆总管（CBD），并在结扎线上方切断。用棉签轻轻分离胆管与门静脉（PV）。</li>
		<li>在结扎线之间切断胃十二指肠动脉（GDA）和肝固有动脉（PHA）。在肝总动脉（CHA）末端创建一个 Y 形分叉。在 PHA 的结扎线上保留一段 2 cm 长的缝线以备后续使用。</li>
		<li>游离门静脉（PV）的左右分支。在每一分支上各放置一根 5 cm 长的 7-0 固定缝线，以便后续操作。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>受体肝脏切除
	<ol>
		<li>将异氟烷浓度降低至 0.5%，气流速度设为 0.5 L/min。 
		注：通过调节异氟烷挥发罐维持约每秒一次的呼吸频率。在整个无肝期持续评估麻醉深度，以防止术中知晓或因麻醉过深导致呼吸抑制。</li>
		<li>在右肾静脉上方夹闭 IHIVC，随后在幽门静脉上方夹闭 PV。使用 2 mL 注射器在 10 秒内向右 PV 注入 1.5 mL 生理盐水，以冲洗肝脏内的血液。</li>
		<li>通过牵拉围绕 SHIVC 放置的 7-0 丝线缝线轻柔地向上牵拉膈肌，然后在 SHIVC 上应用血管夹，夹闭时包括部分膈肌组织。</li>
		<li>在肝脏上方不远处切断 SHIVC。固定两侧 PV 分支上的 7-0 固定缝线，并在其上方切断 PV。紧贴肝实质切断 IHIVC。迅速切断所有残留的韧带连接，完整移除肝脏。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>SHIVC 重建
	<ol>
		<li>将移植肝正位放入腹腔。利用供体自带的 8-0 缝线，在受体 SHIVC 的两个角部从内向外穿线，作为固定缝线并打结固定。</li>
		<li>使用血管夹轻轻向外牵拉右侧固定缝线的游离端，以对齐 SHIVC。</li>
		<li>从左侧角开始，使用同一根缝线以连续缝合法缝合后壁，共 8–10 针。随后缝合前壁，共 10–12 针，从右向左进行。在完成前壁缝合之前，冲洗 SHIVC 腔以排出空气，防止空气栓塞（图 4）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>PV 重建
	<ol>
		<li>利用置于 PV 两个分支上的 5 cm 固定缝线，通过血管夹轻柔向上牵拉，抬高 PV。在 PV 分支的中点处做一切口。</li>
		<li>用肝素化生理盐水（300 IU/mL）冲洗 PV 管腔，然后将套管插入 PV 并用 7-0 丝线缝线固定。</li>
		<li>依次松开 PV 和 SHIVC 上的血管夹，恢复移植物灌注，结束无肝期（图 5）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>IHIVC 吻合操作参照 PV 步骤进行。先松开供体侧的 7-0 缝线，再移除受体侧的血管夹。</li>
	<li>肝动脉重建
	<ol>
		<li>应用微血管夹阻断受体 CHA 的血流。</li>
		<li>在受体 CHA 末端 Y 形分叉处做一小切口。用肝素化生理盐水（300 IU/mL）冲洗 CHA 管腔，然后将支架插入 CHA 并用 7-0 丝线缝线固定。</li>
		<li>结扎供体和受体两侧的固定缝线，防止支架移位。松开微血管夹以恢复动脉血流（图 6）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>胆管重建：
	<ol>
		<li>在受体胆总管（CBD）前壁做一小切口。将胆管支架插入受体 CBD 管腔，并用 7-0 丝线缝线固定。</li>
		<li>结扎供体和受体两侧的固定缝线，防止支架移位（图 7）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>重建操作完成后，使用连续锁边 3-0 缝线分两层关闭腹部切口（图 8）。</li>
	<li>将受体动物置于清洁、加温的笼子中，在送回动物饲养设施前每 1–2 小时监测一次恢复情况。术后连续 3 天每日皮下注射布托啡诺（0.3 mg/kg）以提供镇痛。</li>
</ol>

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<li>Lehmann, T. G., Bunzendahl, H., Langrehr, J. M., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterial+reconstruction+in+rat+liver+transplantation-a+new+tubing+technique+of+the+common+hepatic+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Arterial reconstruction in rat liver transplantation-a new tubing technique of the common hepatic artery.</a> Transpl Int. 18 (1), 56-64 (2005).</li>
</ol>

作者声明无利益冲突。

在Kamada双袖套技术的基础上2，我们成功建立了首个用于DGS的原位肝移植模型。由于DGS与传统大鼠模型之间存在解剖学差异，因此在材料准备、手术操作及术后管理方面需采取特定的注意事项。
冬眠和脂肪储备等因素导致成年DGS个体体重存在显著差异，范围从150 g到400 g，且雄性和雌性之间有明显差别。因此，供体和受体的谨慎选择至关重要。理想情况下，受体体重应略高于供体，体重差异不应超过50 g。
DGS 中的血管直径也因大小和性别而存在显著差异。建议术前准备从 5-F 到 8-F 不同规格的套管，以便对 PV 和 IHIVC 吻合进行最佳选择。手工吻合也是 IHIVC 重建的一种可行方案。值得注意的是，DGS 的肝动脉相较于普通 SD 大鼠相对较粗，因此建议进行动脉吻合。我们已成功采用支架法进行动脉吻合14,17。然而，仍需进一步研究以评估动脉吻合的影响及其必要性...

冷-复温以及缺血-再灌注是导致肝脏移植物损伤的重要因素，会增加早期移植物功能障碍的风险。尽管在小鼠和大鼠等标准啮齿类动物中进行的肝移植已成功建立1,2，但由于这些对低温敏感的物种在研究冷适应机制方面提供的信息有限，器官保存和移植医学的发展受到了阻碍。
在合适的冷适应物种中建立移植研究模型可能填补这一空白。例如，哺乳动物冬眠者已进化出适应长时间低温环境和/或食物匮乏的能力3,4。在冬眠期间，其生理状态会周期性地在蛰眠状态和阵发性觉醒状态之间转换，从而能够很好地适应低核心体温，并耐受快速复温及血液再灌注。值得注意的是，能够冬眠的地松鼠即使在活跃的恒温状态下，对缺血-再灌注损伤的耐受性也强于大鼠5,6。近年来，受冬眠动物启发的研究揭示了一些冷适应机制和可药物干预的靶点，这些靶点可通过调控显著减轻冷保存引起的损伤，并改善非冬眠物种离体组织和器官的功能恢复7,8,9,10,11。
本文方案改编自大鼠肝移植的既定操作流程12,13,14，现介绍一种适用于达乌尔黄鼠（DGS；Spermophilus dauricus）的肝脏获取、静态冷保存及移植方案。达乌尔黄鼠是一种分布于中国北方的冬眠啮齿类动物。在本研究条件下，无论供体处于常温（活跃）状态还是低温（蛰眠）状态，其肝脏在4 ˚C的威斯康星大学（UW）溶液中保存24小时后进行移植，受体达乌尔黄鼠的术后存活率均达到100%。相比之下，采用相同操作流程的Sprague-Dawley（SD）大鼠受体存活率为0%，明确显示出达乌尔黄鼠肝移植模型的优势。我们预计，在达乌尔黄鼠或其他实验室培育的耐寒物种（如十三条纹地松鼠（Ictidomys tridecemlineatus）和叙利亚仓鼠（Mesocricetus auratus））中，其他器官的长期冷保存与移植同样可实现，从而为研究人员提供独特的机会，用于研究移植物的长期功能恢复、宿主与移植物相容性，并测试新型药物。

<table><tbody><tr><td>带针的3-0缝线</td><td>金环医疗产品有限公司</td><td>R315</td><td>用于皮肤缝合</td></tr><tr><td>7-0 丝线缝合线</td><td>布雷因特里，SCI公司</td><td>SUT-S103</td><td></td></tr><tr><td>7F 导引鞘&amp;nbsp;</td><td>北京德迈医疗科技有限公司</td><td>DQ07083818S</td><td>用于IHIVC的袖带</td></tr><tr><td>8-0 缝合线带针</td><td>金环医疗产品有限公司</td><td>H821</td><td>用于SHIVC吻合术</td></tr><tr><td>8F 导引鞘&amp;nbsp;</td><td>北京德迈医疗科技有限公司</td><td>DQ08083818S</td><td>用于IHIVC的袖带</td></tr><tr><td>麻醉机</td><td>RWD life Science Co.</td><td>R500</td><td></td></tr><tr><td>止血电凝</td><td>宁波舜业医疗科技有限公司</td><td>BDD-YE-DT-1</td><td></td></tr><tr><td>布氏钳（微弯）</td><td>金钟医疗器械有限公司</td><td>XEC120</td><td>SHIVC</td></tr><tr><td>布托啡诺</td><td>天津药物研究院 pharmaceutical Co., Ltd</td><td>H12020275</td><td>止痛药</td></tr><tr><td>头孢呋辛钠</td><td>Esseti Farmaceutici S.r.l</td><td>H20160013</td><td>抗生素</td></tr><tr><td>棉签</td><td>福清健康 &amp;和整体医学</td><td>20230R</td><td></td></tr><tr><td>弯曲显微镊</td><td>RWD生命科学有限公司</td><td>F11031-11</td><td>外科手术器械</td></tr><tr><td>弯曲显微剪刀</td><td>66 Vision Tech Co., Ltd.</td><td>54108B</td><td>手术器械</td></tr><tr><td>纱布拭子</td><td>优贝医用材料有限公司</td><td>21080274</td><td></td></tr><tr><td>肝素钠注射液</td><td>华北制药股份有限公司</td><td>2101131-2</td><td></td></tr><tr><td>输液泵</td><td>Howkmed有限公司</td><td>HK-400</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>RWD生命科学有限公司</td><td>21070201</td><td></td></tr><tr><td>微针持针器</td><td>World Precision Instruments Co., Ltd.</td><td>555408NT</td><td>手术器械</td></tr><tr><td>微型血管夹</td><td>RWD life Science Co.</td><td>R31005-06</td><td>PV 和 IHIVC</td></tr><tr><td>微型血管夹施夹器</td><td>RWD生命科学有限公司</td><td>R34001-14</td><td>手术器械</td></tr><tr><td>持针器</td><td>RWD life Science Co.</td><td>F31025-13</td><td>腹部闭合</td></tr><tr><td>生理盐水</td><td>浙江天瑞药业有限公司</td><td>716092103</td><td></td></tr><tr><td>直头微型镊子</td><td>RWD生命科学有限公司</td><td>F11029-11</td><td>手术器械</td></tr><tr><td>手术显微镜</td><td>Leica</td><td>M650</td><td></td></tr><tr><td>手术平台</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>定制，磁性</td></tr><tr><td>组织镊</td><td>RWD生命科学有限公司</td><td>F12002-12</td><td>手术器械</td></tr><tr><td>组织剪</td><td>RWD生命科学有限公司</td><td>S12003-09</td><td>手术器械</td></tr><tr><td>UW 溶液</td><td>器官回收系统</td><td>SPS-1</td><td>器官灌注与保存&amp;nbsp;</td></tr></tbody></table>

达乌尔黄鼠肝脏低温保存及移植研究

Liver Cold Storage and Transplantation in the Cold-Adaptive Daurian Ground Squirrels

在肝移植中，供体移植物在长时间冷保存后实现功能恢复是一个重大挑战。尽管标准啮齿类动物模型（如小鼠和大鼠）已有成熟的手术方案，但同样面临这一难题，从而限制了对移植后功能恢复及宿主-移植物免疫相容性等关键问题的研究。本文中，我们成功建立了一种新型肝移植模型，采用 obligate 休眠动物——达乌尔黄鼠（DGS；Spermophilus dauricus），该动物具有对极深度低温-复温以及缺血-再灌注转换过程的内在适应能力。在我们的实验条件下，达乌尔黄鼠受体在接受24小时冷保存后的肝脏移植后，在为期7天的观察期内存活率达到100%；而采用相同操作的Sprague-Dawley（SD）大鼠受体在术后24小时存活率为0%。因此，达乌尔黄鼠及其他耐寒哺乳动物模型为研究器官冷适应机制和移植耐受性提供了独特且可靠的平台，有助于推动移植医学领域新疗法或手术策略的发展。

手术操作的平均持续时间为：供体手术平均 24.8 ± 2.3 分钟，修肝操作 15.4 ± 1.3 分钟，受体手术 52.7 ± 5.1 分钟，无肝期 14.2 ± 1.5 分钟。
接受在低温 UW 溶液中保存 24 小时的肝脏移植物的大鼠，无论移植前是否处于冬眠状态（n = 8）或非冬眠状态（n = 4），术后 7 天的存活率均为 100%（图 9）。术后第 7 天未观察到血管闭塞现象。所有肝动脉均通过支架技术保持灌注。相比之下，所有接受其他 SD 大鼠提供的肝脏移植物、且同样在低温 UW 溶液中保存 24 小时的 SD 大鼠（n = 9），均在移植后 12 小时内死亡。
<img alt="手术器械布局；包括镊子、剪刀、钳子，适用于解剖操作。" class="xfigi...

本文介绍了一种在达乌尔黄鼠（Daurian ground squirrel, DGS）中建立长期肝脏低温保存与移植模型的方案，该技术在标准啮齿类动物模型中一直具有较大挑战性。

在肝移植中，供体移植物在长时间冷保存后功能恢复是一个主要挑战。同样的障碍也适用于……

我们研究像DGS这样的冷适应哺乳动物，以开发更优的器官保存方法。我们的目标是了解它们天然的低温储存机制，并以此改进人类器官的保存技术。未来的研究将探索冬眠程度、极端低温和应激反应的影响，并利用这些知识来优化器官保存、延长储存时间，并提高移植手术的成功率。首先，在麻醉后的动物身上，从剑突延伸至耻骨联合处做必要的切口。使用棉签仔细分离肝下腔静脉（位于右肾静脉上方）与其周围组织。然后，使用7-0缝线结扎汇入肝下方腔静脉的右肾上腺静脉和腰静脉。使用显微镊子从周围组织中分离肝固有动脉、胃十二指肠动脉和肝总动脉。将七号静脉穿刺针插入主动脉，并用夹子固定。然后切开膈肌以暴露胸主动脉，并在胸主动脉上放置血管夹。肝脏灌注后，切开胸腔段下腔静脉以及右肾静脉上方的肝下下腔静脉，以使灌注液流出。灌注过程中，使用手术剪切除胆囊。在胆总管前壁做一小切口，将胆管支架插入胆管，并用7-0丝线缝合固定。现在，使用显微镊子将门静脉从周围结缔组织中分离出来。用7-0缝线结扎并横断幽门静脉，并在脾静脉水平横断门静脉主干。远端结扎并横断胃十二指肠动脉，并在肝总动脉前壁上做一个小切口。将肝动脉支架插入肝总动脉，并用7-0丝线缝合固定。从膈上腔静脉分离左膈静脉，并用7-0缝线结扎。使用精细外科器械尽可能贴近膈肌解剖膈上腔静脉。使用7-0缝线结扎肝脾韧带。用血管夹固定门静脉套管的柄部，并用蚊式钳将其稳定。小心地将门静脉穿过套管，确保无扭曲，然后将门静脉翻折覆盖在套管上，并用7-0缝线固定。牢固结扎胆囊管。在肝下腔静脉的套管与肝右下叶之间，环绕放置一根7-0丝线缝线。从肝上腔静脉外侧至内侧，在其两侧角各插入一根8-0固定缝线。用钝头镊子小心地从肝上腔静脉后方穿过，并在其周围放置一根7-0丝线。用7-0丝线在近端结扎胆总管，并在结扎线远端将其切断。分离胆管后，在结扎线之间切断胃十二指肠动脉和肝总动脉。在肝总动脉末端形成Y形分叉，并在肝固有动脉结扎线上留出两厘米长的缝线以备后续使用。游离门静脉的左右分支，然后在每一分支上各放置一根五厘米长的7-0固定缝线，以便后续操作。现在，夹闭肝下腔静脉位于右肾静脉上方的部位，随后夹闭位于幽门静脉上方的门静脉。使用2毫升注射器在10秒内向右门静脉注入1.5毫升生理盐水，以冲洗肝脏中的血液。为牵开膈肌，轻轻牵拉预先在肝上腔静脉周围放置的7-0丝线缝合线。然后，将血管钳夹闭肝上段下腔静脉，确保将膈肌部分也一并夹入钳内。接着，在肝脏上方紧邻处横断肝上段下腔静脉。在门静脉的两个分支上分别固定7-0固定缝线，并在这些结扎线的上方横断门静脉。然后，在靠近肝实质处横断肝下腔静脉，并通过切断任何残留的韧带附着物迅速移除肝脏。从左侧角开始，用8到10针连续缝合缝合后壁。使用相同的缝线，从右向左继续缝合前壁，共缝合10到12针。进行门静脉重建时，利用先前放置的5厘米固定缝线，用血管钳轻轻向上牵引，将两侧门静脉分叉适度提起。用浓度为每毫升300国际单位的肝素化生理盐水冲洗门静脉管腔。将套管插入门静脉，并用7-0丝线固定。依次松开门静脉和肝上腔静脉的血管夹，以恢复移植物灌注，结束无肝期。随后，在受体肝总动脉Y形吻合口末端的分叉处做一个小切口，用每毫升含300国际单位肝素的生理盐水冲洗肝总动脉管腔。将动脉支架插入肝总动脉，并用7-0丝线缝合固定。结扎供体侧和受体侧的固定缝线，以稳定支架并防止其移位。松开微血管夹，恢复动脉血流。然后，在受体胆总管前壁做一小切口。将胆道支架插入管腔，并用7-0丝线固定。最后，结扎供体和受体胆管上的固定缝线，以牢固固定支架并防止其移位。接受在低温UW溶液中保存24小时的肝脏移植物的受体，在移植后7天的存活率达到100%，无论其在移植前是否处于冬眠状态。相比之下，所有接受来自其他SD大鼠、同样在低温UW溶液中保存24小时的肝脏移植物的SD大鼠，均在移植后12小时内死亡。

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科研

JoVE Journal

Medicine

医学

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