Name: 无血液污染的小鼠洗鼻液采集 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T15:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: 了解小鼠鼻腔灌洗液采集技术，通过咽部途径获取大体积样本，并使用棉球和鲁米诺反应有效避免血液污染。该方法可提高呼吸道病原体检测和免疫学分析的准确性。

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我们感谢近畿大学医学院微生物学系的Seiichi Omura博士、Cong Thanh Nguyen医学博士、哲学博士、Kota Moriguchi医学博士、哲学博士、Reona Shiro医学博士以及Sandesh Rimal理学硕士，以及大阪大学微生物病研究前沿中心BIKEN创新疫苗研究联盟实验室病毒疫苗组的Hirotaka Ebina博士、Shinya Okamura博士和Yasuo Yoshioka博士提供的有益讨论。我们还向近畿大学生命科学研究所以及其成员致以诚挚谢意，感谢他们提供的出色技术协助。本研究工作得到了日本文部科学省通过文部科学省奖学金（MEXT，2021–2025）（I.A.）、日本学术振兴会（JSPS）科学研究费补助金KAKENHI项目JP23K06493（F.S.）、JP21K07287/JP24K10500（A.-M. P.）和JP22K18378/JP24K10163（I.T.），以及近畿大学研究推进资助项目KD2406（F.S.）和KD2506（I.T.）的资助支持。

所有实验操作均经近畿大学医学院机构动物护理和使用委员会（IACUC）批准，并依照美国国立卫生研究院（NIH）提出的标准进行20。本研究使用8周龄雄性C57BL/6小鼠。本研究中所用试剂和设备的信息列于材料表中。
1. 鼻腔灌洗液采集
<ol>
	<li>根据机构批准的方案，使用 5% 异氟烷处死小鼠21。</li>
	<li>将小鼠仰卧于手术板上，并通过固定四肢将其固定。</li>
	<li>使用 1 mL 注射器从心脏采血。</li>
	<li>使用剪刀切开腹腔，暴露内脏器官和膈肌。</li>
	<li>用剪刀切开膈肌和肋骨，使右心房可见。</li>
	<li>用剪刀穿刺右心房以进一步清除血液。</li>
	<li>在牵拉舌头的同时，将三个棉球塞入动物口腔内。</li>
	<li>在抬高头部（鼻部朝上位置）的同时，用剪刀分离下颌，以防止鼻腔灌洗液（NLF）被血液污染。</li>
	<li>更换新的棉球，以避免血液污染。</li>
	<li>待出血停止后，向后鼻孔注入 200 µL 无菌 PBS，并将从鼻孔排出的鼻腔灌洗液（NLF）收集至 1.5 mL 离心管中。</li>
	<li>重复步骤 1.10 一次。</li>
</ol>
2. 使用鲁米诺化学发光法检测血液污染
<ol>
	<li>使用1.5 mL离心管，将1 mg鲁米诺和5 mg过氧化钠（Na2O2）溶于1 mL无菌水中，配制储备液。 
	注：终浓度为1 mg/mL鲁米诺和5 mg/mL Na2O2。</li>
	<li>用铝箔包裹离心管，4 °C保存备用。</li>
	<li>用去离子水将储备液稀释10倍，得到工作液。 
	注：终浓度为0.1 mg/mL鲁米诺和0.5 mg/mL Na2O2。</li>
	<li>将2 µL NLF样本加入96孔板的孔中。</li>
	<li>向每孔加入100 µL稀释后的鲁米诺溶液。</li>
	<li>短暂振荡96孔板，使样本与鲁米诺溶液充分混匀。</li>
	<li>在暗处直接观察鲁米诺的化学发光现象。</li>
	<li>如有需要，可使用发光仪对血红蛋白浓度进行半定量分析。</li>
</ol>
3. 通过ELISA定量测定IgA和IgG
<ol>
	<li>在96孔板的各孔中加入100 µL/孔的总抗小鼠IgA（20 ng/孔；200 ng/mL）或IgG（10 ng/孔；100 ng/mL）抗体进行包被&#160;（参见 材料表).</li>
	<li>密封培养板，于4 °C过夜孵育。</li>
	<li>用 300 μL/孔的溶液洗涤平板三次&#160;含0.05% Tween 20的洗涤缓冲液&#160;每次用 PBS 洗涤后，将平板在纸巾上拍干。</li>
	<li>每孔加入 200 µL 含 10% 胎牛血清（FBS）和 0.2% Tween 20 的 PBS 稀释液。</li>
	<li>将培养板在室温（RT）下孵育60分钟。</li>
	<li>吸去检测稀释液，然后将酶标板在纸巾上拍干。</li>
	<li>使用检测稀释液配制100 ng/mL的小鼠IgA或IgG标准品，并进行2倍系列稀释：50 ng/mL、25 ng/mL、12.5 ng/mL、6.25 ng/mL、3.13 ng/mL、1.56 ng/mL和0.78 ng/mL。 
	注意：每孔所需各标准品体积为 100 µL。</li>
	<li>用适当的稀释液将样本稀释：血清（104 至 106），NLF（10、50、200 和 500），以及 BALF（101 至 104). 
	注意：每个样本每孔所需体积为 100 µL。</li>
	<li>向相应的孔中加入 100 µL 的 IgA 或 IgG 标准品及样品。</li>
	<li>室温孵育平板75分钟。</li>
	<li>用洗涤缓冲液每孔300 µL洗涤平板三次，每次洗涤后将平板在纸巾上拍干。</li>
	<li>稀释辣根过氧化物酶标记的抗小鼠F(ab')₂片段抗体2 抗体（参见 材料表) 用适当的稀释倍数的检测稀释液：104倍比稀释 
	注意：每孔所需体积为 100 µL。</li>
	<li>加入100 µL稀释后的辣根过氧化物酶标记的抗小鼠F(ab')2 每孔加入抗体。</li>
	<li>室温孵育平板75分钟。</li>
	<li>用洗涤缓冲液每孔300 µL洗涤5次，每次洗涤后将酶标板在吸水纸上拍干。</li>
	<li>每孔加入 100 µL 含四甲基联苯胺（TMB）和过氧化氢的底物溶液。</li>
	<li>将培养板在室温下孵育5分钟。</li>
	<li>加入 50 µL 终止液，2 N 硫酸（2N H2SO4)，加入每个孔中。</li>
	<li>使用酶标仪在450 nm处测定吸光度。</li>
	<li>利用标准曲线测定每个样本中IgA和IgG的浓度。</li>
</ol>

<ol><li>Cortegano, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+nasal+immune+responses+in+non-hospitalized+bronchiolitis+children%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Age-dependent nasal immune responses in non-hospitalized bronchiolitis children.</a> Front Immunol. 13, 1011607(2022).</li>
<li>Yao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+pathogenic+effector+T-cell+activities+in+situ+by+PD-L1+expression+on+respiratory+inflammatory+dendritic+cells+during+respiratory+syncytial+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Control of pathogenic effector T-cell activities in situ by PD-L1 expression on respiratory inflammatory dendritic cells during respiratory syncytial virus infection.</a> Mucosal Immunol. 8 (4), 746-759 (2015).</li>
<li>Gould, V. M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+IgA+provides+protection+against+human+influenza+challenge+in+volunteers+with+low+serum+influenza+antibody+titre%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Nasal IgA provides protection against human influenza challenge in volunteers with low serum influenza antibody titre.</a> Front Microbiol. 8, 900(2017).</li>
<li>Casado, B., Pannell, L. K., Viglio, S., Iadarola, P., Baraniuk, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+sinusitis+nasal+lavage+fluid+proteome+using+capillary+liquid+chromatography+interfaced+to+electrospray+ionization-quadrupole+time+of+flight-tandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Analysis of the sinusitis nasal lavage fluid proteome using capillary liquid chromatography interfaced to electrospray ionization-quadrupole time of flight-tandem mass spectrometry.</a> Electrophoresis. 25 (8), 1386-1393 (2004).</li>
<li>Hull, J., Skinner, W., Robertson, C., Phelan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elemental+content+of+airway+surface+liquid+from+infants+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Elemental content of airway surface liquid from infants with cystic fibrosis.</a> Am J Respir Crit Care Med. 157 (1), 10-14 (1998).</li>
<li>Roponen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+mediators+in+nasal+lavage%2C+induced+sputum+and+serum+of+employees+with+rheumatic+and+respiratory+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Inflammatory mediators in nasal lavage, induced sputum and serum of employees with rheumatic and respiratory disorders.</a> Eur Respir J. 18 (3), 542-548 (2001).</li>
<li>Santos Galvão, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+mediators+in+nasal+lavage+among+school-age+children+from+urban+and+rural+areas+in+S%C3%A3o+Paulo%2C+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22S%C3%A3o+Paulo+Med+J%22%5BJournal%5D)">Inflammatory mediators in nasal lavage among school-age children from urban and rural areas in São Paulo, Brazil.</a> São Paulo Med J. 122 (5), 204(2004).</li>
<li>Winkler, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+causes+lung+infection+without+severe+disease+in+human+ACE2+knock-in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 causes lung infection without severe disease in human ACE2 knock-in mice.</a> J Virol. 96 (1), e01511-e01521 (2022).</li>
<li>Kieran, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+associations+between+viral+titer+measurements+and+disease+outcomes+in+ferrets+inoculated+with+125+contemporary+influenza+A+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Exploring associations between viral titer measurements and disease outcomes in ferrets inoculated with 125 contemporary influenza A viruses.</a> J Virol. 98 (2), e01661-e01723 (2024).</li>
<li>Peden, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+nasal+lavage+for+objective+measurement+of+irritant-induced+nasal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Regul+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The use of nasal lavage for objective measurement of irritant-induced nasal inflammation.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 24 (1 II), 68-75 (1996).</li>
<li>Rusznak, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+pollution-induced+allergy+and+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Fr+Allergol+Immunol+Clin%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of pollution-induced allergy and asthma.</a> Rev Fr Allergol Immunol Clin. 38 (7 Suppl. 1), 397-402 (1998).</li>
<li>Laumbach, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+effects+of+a+mixture+of+volatile+organic+compounds+and+their+ozone+oxidation+products%5BTitle%5D)+AND+%22J+Occup+Environ+Med%22%5BJournal%5D)">Nasal effects of a mixture of volatile organic compounds and their ozone oxidation products.</a> J Occup Environ Med. 47 (11), 1182-1189 (2005).</li>
<li>Kawai, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+neuraminidase+as+an+antigen+for+nasal+vaccines+to+increase+cross-protection+against+influenza+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">The potential of neuraminidase as an antigen for nasal vaccines to increase cross-protection against influenza viruses.</a> J Virol. 95 (20), 1180-1201 (2021).</li>
<li>Cho, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+eosinophilic+nasal+inflammation+in+a+genetically-mutant+mouse%3A+Comparative+study+with+an+allergic+inflammation+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Spontaneous eosinophilic nasal inflammation in a genetically-mutant mouse: Comparative study with an allergic inflammation model.</a> PLoS One. 7 (4), e35114(2012).</li>
<li>Puchta, A., Verschoor, C. P., Thurn, T., Bowdish, D. M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+inflammatory+responses+during+intranasal+colonization+with+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Characterization of inflammatory responses during intranasal colonization with Streptococcus pneumoniae.</a> J Vis Exp. (83), e50490(2014).</li>
<li>Ghafouri, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+proteomics+of+nasal+fluid+in+seasonal+allergic+rhinitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Comparative proteomics of nasal fluid in seasonal allergic rhinitis.</a> J Proteome Res. 5 (2), 330-338 (2006).</li>
<li>Lindahl, M., Ståhlbom, B., Svartz, J., Tagesson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+patterns+of+human+nasal+and+bronchoalveolar+lavage+fluids+analyzed+with+two-dimensional+gel+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Protein patterns of human nasal and bronchoalveolar lavage fluids analyzed with two-dimensional gel electrophoresis.</a> Electrophoresis. 19 (18), 3222-3229 (1998).</li>
<li>Lindahl, M., Ståhlbom, B., Tagesson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+new+potential+airway+irritation+marker%2C+palate+lung+nasal+epithelial+clone+protein%2C+in+human+nasal+lavage+fluid+with+two-dimensional+electrophoresis+and+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization-time+of+flight%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Identification of a new potential airway irritation marker, palate lung nasal epithelial clone protein, in human nasal lavage fluid with two-dimensional electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight.</a> Electrophoresis. 22 (9), 1795-1800 (2001).</li>
<li>Schoenebeck, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+preparation+of+nasal+lavage+fluid+%28NLF%29+as+a+noninvasive+sample+for+proteomic+biomarker+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Proteins+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Improved preparation of nasal lavage fluid (NLF) as a noninvasive sample for proteomic biomarker discovery.</a> Biochim Biophys Acta Proteins Proteomics. 1854 (7), 741-745 (2015).</li>
<li>National Research Council (US) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+care+and+use+of+laboratory+animals%22">Guide for the care and use of laboratory animals</a>. , (2011).</li>
<li>Roustan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+methods+of+mouse+euthanasia+on+the+oocyte+quality%3A+Cervical+dislocation+versus+isoflurane+inhalation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Evaluating methods of mouse euthanasia on the oocyte quality: Cervical dislocation versus isoflurane inhalation.</a> Lab Anim. 46 (2), 167-169 (2012).</li>
<li>Park, A. M., Tsunoda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forensic+luminol+reaction+for+detecting+fecal+occult+blood+in+experimental+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Forensic luminol reaction for detecting fecal occult blood in experimental mice.</a> Biotechniques. 65 (4), 227-230 (2018).</li>
<li>Gao, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+nasal+wash+RNA-Seq+reveals+distinct+cell-specific+innate+immune+responses+in+influenza+versus+SARS-CoV-2%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Human nasal wash RNA-Seq reveals distinct cell-specific innate immune responses in influenza versus SARS-CoV-2.</a> JCI Insight. 6 (22), e152288(2021).</li>
<li>Kirkeby, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoglobulins+in+nasal+secretions+of+healthy+humans%3A+Structural+integrity+of+secretory+immunoglobulin+A1+%28IgA1%29+and+occurrence+of+neutralizing+antibodies+to+IgA1+proteases+of+nasal+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Diagn+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunoglobulins in nasal secretions of healthy humans: Structural integrity of secretory immunoglobulin A1 (IgA1) and occurrence of neutralizing antibodies to IgA1 proteases of nasal bacteria.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 7 (1), 31-39 (2000).</li>
<li>Webb, J. L., Creamer, J. I., Quickenden, T. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+the+presumptive+luminol+test+for+blood+with+four+non-chemiluminescent+forensic+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Luminescence%22%5BJournal%5D)">A comparison of the presumptive luminol test for blood with four non-chemiluminescent forensic techniques.</a> Luminescence. 21 (4), 214-220 (2006).</li>
<li>Ahmad, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+the+role+of+platelets+in+virus-induced+inflammatory+demyelinating+disease+and+myocarditis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Exploring the role of platelets in virus-induced inflammatory demyelinating disease and myocarditis.</a> Int J Mol Sci. 25 (6), 3460(2024).</li>
<li>Olsson, T., Bergström, K., Thore, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+method+for+determination+of+serum+hemoglobin+based+on+iso-luminol+chemiluminescence%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chim+Acta%22%5BJournal%5D)">A sensitive method for determination of serum hemoglobin based on iso-luminol chemiluminescence.</a> Clin Chim Acta. 122 (2), 125-133 (1982).</li>
<li>Van der Meer, W., Dinnissen, J. M. B., de Keijzer, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+Sysmex+XT-2000i%2C+a+new+automated+haematology+analyser%5BTitle%5D)+AND+%22Sysmex%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the Sysmex XT-2000i, a new automated haematology analyser.</a> Sysmex. (2002), Available at: https://www.sysmex.co.jp/en/products_solutions/library/journal/vol12_no2/summary03.html (2002).</li>
<li>Oshiro, I., Takenaka, T., Maeda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+method+for+hemoglobin+determination+by+using+sodium+lauryl+sulfate+%28SLS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Biochem%22%5BJournal%5D)">New method for hemoglobin determination by using sodium lauryl sulfate (SLS).</a> Clin Biochem. 15 (2), 83-88 (1982).</li>
<li>Hamaguchi, Y., Oshiro, I., Maeda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+on+reaction+mechanism+of+sodium+lauryl+sulfate-hemoglobin+%28SLS-Hb%29%2C+Part+1%5BTitle%5D)+AND+%22Rinsho+Byori%22%5BJournal%5D)">A study on reaction mechanism of sodium lauryl sulfate-hemoglobin (SLS-Hb), Part 1.</a> Rinsho Byori. 40 (6), 649-654 (1992).</li>
<li>McGee, D. W., McMurray, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+protein+malnutrition+on+the+IgA+immune+response+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">The effect of protein malnutrition on the IgA immune response in mice.</a> Immunology. 63 (1), 25(1988).</li>
<li>Castigli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+IgA+class+switching+in+APRIL-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Impaired IgA class switching in APRIL-deficient mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (11), 3903-3908 (2004).</li>
<li>Matsuo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCL28-deficient+mice+have+reduced+IgA+antibody-secreting+cells+and+an+altered+microbiota+in+the+colon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">CCL28-deficient mice have reduced IgA antibody-secreting cells and an altered microbiota in the colon.</a> J Immunol. 200 (2), 800-809 (2018).</li>
<li>McDonald, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+impacts+isolated+lymphoid+follicle+development+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Immun+Ageing%22%5BJournal%5D)">Aging impacts isolated lymphoid follicle development and function.</a> Immun Ageing. 8 (1), 1-12 (2011).</li>
<li>Abolins, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comparative+immunology+of+wild+and+laboratory+mice%2C+Mus+musculus+domesticus%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The comparative immunology of wild and laboratory mice, Mus musculus domesticus.</a> Nat Commun. 8 (1), 1-13 (2017).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

鼻腔灌洗是一种获取呼吸系统疾病（如流感和 COVID-19）生化、细胞学及生物学信息的重要技术23。除了可鉴定多种浸润性细胞外，还可通过 ELISA、免疫印迹和定量聚合酶链式反应等多种方法，分析鼻腔灌洗液（NLF）样本中呼吸道的非细胞成分1,19,24。本研究采用两种不同的 NLF 采集方法——传统方法与新方法——进行了比较。研究结果表明，血液污染会影响 NLF 中 IgA 和 IgG 的浓度。由于血液污染最可能发生在下颌分离过程中，因此建立了一种简单的新方法：在小鼠口腔内放置三个棉球，以吸收血液并阻止样本流向口腔，从而避免了 NLF 中的血液污染。因此，这种采集 NLF 的新方法比传统方法更为准确。
鲁米诺化学发光已用于刑事侦查中检测犯罪现场的血液；其原理基于血红蛋白（Hb）类似过氧化物酶的活性对底物的氧化作用，在暗场条件下鲁米诺试剂会发出可见的蓝...

在临床和基础研究中，适当的样本采集方法对于评估结果至关重要。鼻腔灌洗是一种用于分析呼吸道中细胞和体液成分的灌洗技术1,2,3。临床上，鼻腔灌洗液（NLF）已被用作生物标志物发现的有效非侵入性样本，多项研究支持其在多种呼吸系统疾病中的应用，包括鼻窦炎、囊性纤维化和一般性呼吸系统疾病4,5,6,7。在实验动物中，NLF也被用于研究呼吸系统疾病模型，包括流感、2019冠状病毒病（COVID-19）和过敏性疾病3,8,9。该方法广泛用于测定关键炎症生物标志物，如多形核细胞和细胞因子，这些指标常被用于评估对过敏原、哮喘和呼吸道感染的反应10,11,12。最近，为了评估潜在鼻内疫苗候选物的有效性和安全性，常从实验动物采集NLF样本，并定量检测NLF样本中病原体和免疫球蛋白（Ig）的水平作为评价指标13。
在实验小鼠中，鼻腔灌洗液（NLF）可通过经咽部或经气管方法采集。在经咽部方法中，将包括腭咽区域的小鼠头部与喉部分离，然后通过咽部开口将导管插入至后鼻孔，注入磷酸盐缓冲液（PBS），并从鼻孔收集NLF14。经气管方法则通过气管进入呼吸道，无需切断头部，从而从鼻孔收集NLF，以最大限度降低血液污染的风险。尽管这两种主要方法已被用于实验小鼠的NLF采集，但两种传统方法均存在各自的局限性。研究表明，由于经气管灌洗液可能泄漏至口腔，经气管方法所获得的NLF量低于经咽部方法。先前的研究显示，在注入PBS后，经气管法和经咽部法回收的NLF液体积分别为70%–80%和90%–100%14。尽管经咽部方法可获得较经气管方法更多的NLF，但在操作过程中不可避免地会出现一定程度的血液污染14,15。类似地，多项研究报道，NLF样本常被高水平的血清蛋白污染16,17,18。这可能会干扰呼吸道疾病特异性生物标志物在NLF中的检测与定量分析19。此外，由于血液中的IgA和IgG含量远高于NLF，这种污染也可能影响NLF样本中免疫球蛋白（Ig），特别是IgA和IgG的浓度。
为应对这些挑战，本研究旨在建立一种独特、简单且可靠的经咽部方法，用于从实验小鼠采集鼻腔灌洗液（NLF）样本，以最大化样本产量并最小化血液污染。在实验过程中，将棉球置入小鼠口腔内以抑制血液污染，随后注入磷酸盐缓冲液（PBS），从鼻孔收集NLF样本。采用法医学技术——基于鲁米诺的化学发光法测定NLF中的血液污染水平，该方法可对NLF样本中的血红蛋白（Hb）水平进行半定量分析；采用新方法收集的NLF样本中鲁米诺反应呈阴性。因此，当前这一新方法可提高NLF样本质量，适用于多种生物学实验，如抗体酶联免疫吸附测定（ELISAs）、细胞因子谱分析、免疫学和医学生物标志物检测，以及小鼠呼吸系统疾病模型研究。

<table><tbody><tr><td>动物固定针</td><td>日本东京市，Natsume Seisakusho有限公司</td><td>KN-358-A</td><td>我们使用动物固定针固定小鼠。该固定针为不锈钢材质；总长度23 mm；针尖长度15 mm。</td></tr><tr><td>BD OptEIA&lt;sup&gt;TM&lt;/sup&gt;&amp;nbsp;TMB 底物试剂盒</td><td>BD 生物科学公司，美国加利福尼亚州圣地亚哥</td><td>555214</td><td>我们加入了100 &amp;mu;每孔加入 TMB 底物溶液 L。</td></tr><tr><td>钟罩</td><td>NA</td><td>NA</td><td>我们使用钟形罩进行麻醉。</td></tr><tr><td>透明平底免疫非无菌96孔板&amp;nbsp;</td><td>赛默飞世尔科技，美国纽约州罗切斯特</td><td>442404</td><td>我们采用带有MaxiSorp表面处理的透明平底非无菌96孔免疫板进行酶联免疫吸附测定。</td></tr><tr><td>棉球</td><td>日本东京Sansho有限公司</td><td>94-1951</td><td>我们使用棉球以避免血液污染。棉球的直径为7 mm。</td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>Sigma-Aldrich 公司，美国密苏里州圣路易斯市</td><td>172012-500 ML</td><td>在检测稀释液中加入10%胎牛血清。</td></tr><tr><td>镊子（用于科研实验的微型镊子，弯头）</td><td>日本东京，山椒有限公司</td><td>91-1506</td><td>我们使用解剖镊进行解剖。型号：HSC 551-10；总长度：105 mm。</td></tr><tr><td>镊子（精密镊）</td><td>日本东京，山椒有限公司</td><td>91-2772</td><td>我们使用解剖镊进行解剖。型号：HSC 607-12；总长度：120 mm；尖端直径：0.3 mm。</td></tr><tr><td>山羊抗小鼠IgA-UNLB</td><td>SouthernBiotech，美国阿拉巴马州伯明翰</td><td>1040-01</td><td>我们使用100 μL的溶液对96孔透明平底免疫非无菌板进行了包被 &amp;mu;每孔 L（每孔 20 ng）总免疫球蛋白 A。</td></tr><tr><td>异氟烷&amp;nbsp;</td><td>Viatris Inc.，美国宾夕法尼亚州卡农斯堡</td><td>NA</td><td>我们使用异氟烷进行麻醉。</td></tr><tr><td>鲁米诺反应试剂盒</td><td>日本大阪市，富士胶片和光纯药株式会社</td><td>124-06511</td><td>我们使用鲁米诺反应试剂盒检测NLF样本中的血红蛋白。</td></tr><tr><td>微量离心管</td><td>日本东京沃森有限公司</td><td>131-7155C</td><td>我们使用了&amp;nbsp; 用于收集NLF和BALF的微量离心管（1.5 mL带锁盖、圆底、软触盖的微量离心管）</td></tr><tr><td>Milli-Q 水</td><td>德国达姆施塔特默克公司</td><td>Milli-Q Direct 8</td><td>我们使用MilliQ水配制鲁米诺反应溶液。</td></tr><tr><td>Mini-Shaker PSU-2T</td><td>Biosan有限公司，拉脱维亚里加</td><td>PSU-2T</td><td>我们使用 Mini-Shaker PSU-2T 振荡 96 孔板。</td></tr><tr><td>小鼠品系</td><td>CLEA Japan, Inc.，日本东京</td><td>NA</td><td>我们使用了4个月大的C57BL/6雄性小鼠。</td></tr><tr><td>Nunc MicroWell 96孔，Nunclon Delta处理，平底微孔板</td><td>赛默飞世尔科技 Nunc A/S，Kamstrupvej，罗斯基勒，丹麦</td><td>136101</td><td>我们使用了 Nunc&lt;sup&gt;TM&lt;/sup&gt; 微孔板&lt;sup&gt;TM&lt;/sup&gt; 用于鲁米诺试验的96孔Nunclon Delta处理平底微孔板</td></tr><tr><td>辣根过氧化物酶标记的AffiniPure F(ab')&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 片段化山羊抗小鼠IgG，F(ab')&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 片段特异性（对人、牛和马血清蛋白的交叉反应最小）</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.，美国宾夕法尼亚州西格罗夫</td><td>115-036-072</td><td>我们加入了100 &amp;mu;辣根过氧化物酶标记的AffiniPure F(ab')2片段山羊抗小鼠IgG，F(ab')&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 片段特异性检测抗体（10,000倍稀释）加入各孔。</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液</td><td>Sigma-Aldrich 公司，美国密苏里州圣路易斯市</td><td>D8537-500ML</td><td>我们使用杜氏磷酸盐缓冲液（无氯化钙和氯化镁的改良型，液体，经无菌过滤，适用于细胞培养）进行NLF和BALF的收集。</td></tr><tr><td>移液器&amp;nbsp;</td><td>日本东京沃森有限公司</td><td>NA</td><td>我们使用了200-&amp;mu;用于鼻腔灌洗的L型移液管。</td></tr><tr><td>移液器吸头</td><td>日本东京沃森有限公司</td><td>NA</td><td>我们使用了200-&amp;mu;用于鼻腔灌洗的L型多适配移液器吸头</td></tr><tr><td>聚氧乙烯（20）失水山梨醇单月桂酸酯（Tween 20）</td><td>日本大阪市，富士胶片和光纯药株式会社</td><td>167-11515</td><td>在洗涤缓冲液中加入0.05%的Tween 20，在检测稀释液中加入0.2%的Tween 20。</td></tr><tr><td>纯化的山羊抗小鼠IgG（最小交叉反应性）抗体</td><td>BioLegend，美国加利福尼亚州圣地亚哥</td><td>405301</td><td>我们使用100 μL的溶液包被了96孔透明平底免疫非无菌板 &amp;mu;每孔总免疫球蛋白 G 10 纳克（10 ng/孔）。</td></tr><tr><td>小剪刀，双头</td><td>日本东京，山椒有限公司</td><td>91-7005</td><td>我们使用解剖剪进行解剖。型号：S-4A；总长度：115 mm。</td></tr><tr><td>硫酸</td><td>和光纯药工业株式会社，日本东京</td><td>192-04755</td><td>我们加入了50 &amp;mu;每孔加入 L 的 2 N 硫酸以终止反应。</td></tr><tr><td>Surflo 静脉留置针&amp;nbsp;</td><td>日本东京 Terumo Corporation&amp;nbsp;</td><td>SR-FS2032</td><td>我们使用Surflo静脉导管经气管注入PBS进行支气管肺泡灌洗。导管规格：20G；导管长度：32 mm；导管内径：0.80 mm；导管外径：1.1 mm；内置针：22G。</td></tr><tr><td>手术直剪</td><td>日本东京，山椒有限公司</td><td>91-7004</td><td>我们使用解剖剪进行解剖。型号：S-3B；总长度：120 mm。</td></tr><tr><td>外科手术板</td><td>日本东京市，NATSUME 制作所有限公司</td><td>KN-321-B</td><td>我们使用一块软木板进行解剖。尺寸为深20 cm、宽15 cm、高3 cm。</td></tr><tr><td>Synergy H1 多功能酶标仪&amp;nbsp;</td><td>安捷伦科技有限公司，美国加利福尼亚州圣克拉拉市</td><td>NA</td><td>使用Synergy H1 Hybrid Multi-Mode Microplate Reader在450 nm处测定样品的吸光度。</td></tr><tr><td>注射器</td><td>日本东京泰尔茂株式会社&amp;nbsp;</td><td>SS-01T</td><td>我们使用1 mL注射器从心脏采集血液。</td></tr><tr><td>穿线</td><td>&amp;nbsp;Niccho Kogyo Co., Ltd. 东京 日本</td><td>NA</td><td>我们用缝线将导管固定，以确保操作过程中位置正确。</td></tr></tbody></table>

无血液污染的小鼠鼻腔灌洗液采集

Murine Nasal Lavage Fluid Collection without Blood Contamination

上呼吸道样本，包括鼻灌洗液（NLF）和鼻拭子，可用于检测引起呼吸道疾病的病原体，例如病毒和细菌。NLF 已被用于研究呼吸系统中的细胞和体液成分，例如评估黏膜疫苗接种后免疫球蛋白（Ig）A 的诱导情况。在实验啮齿类动物中，NLF 样本可通过经咽部或经气管途径采集。尽管已有报道称经咽部途径采集 NLF 样本的效率高于经气管途径，但经咽部途径采集的 NLF 样本常被血液污染，从而影响原始 NLF 样本中细胞和体液成分的水平。因此，本研究旨在建立一种新的实验小鼠 NLF 采集方法，以最大限度减少血液污染。简言之，在分离小鼠下颌之前，先将棉球置于口腔内以吸收血液。待出血停止后，将微量移液器插入后鼻孔，用 200 µL 磷酸盐缓冲液冲洗两次（最终体积：400 µL/只小鼠），以收集 NLF 样本。为检测血液污染，采用了一种简单且灵敏的法医用鲁米诺试验来检测血红蛋白。鲁米诺试验显示，采用传统方法（不使用棉球）采集的 NLF 样本中可检测到血液污染，而采用新方法（使用棉球）采集的样本中则未检测到。由于血液污染的存在，采用传统方法采集的 NLF 样本中总 IgA 和 IgG 浓度高于新方法采集的样本；已知血液中的 IgA 和 IgG 水平远高于 NLF。因此，该独特方法可作为一种简单且灵敏的方法，用于从实验小鼠中采集无血液污染的 NLF 样本。

采用传统方法或新型方法，通过经咽途径从C57BL/6小鼠采集鼻腔灌洗液（NLF）样本。如图1所示，采用传统方法采集的NLF样本呈轻微粉红色（图1A）；而采用新型方法采集的NLF样本则透明清澈（图1B）。由于该差异似乎源于传统方法采集过程中NLF样本中的血液污染，因此使用鲁米诺反应检测了NLF样本中的血液污染情况。如图2所示，采用传统方法采集的NLF样本中化学发光呈阳性，表明存在血液污染（图2A）；而采用新型方法采集的NLF样本中化学发光呈阴性（图2B）。为排除小鼠本身可能存在出血倾向，还采用标准的经气管灌洗法收集了支气管肺泡灌洗液（BALF）；该BALF样本未见血液污染。上述结果表明，新型NLF采集方法优于传统方法。
为了确定鼻...

本方案描述了一种避免小鼠鼻腔灌洗液（NLF）中血液污染的新方法。由于该方法可确保收集无血液污染的NLF，因此能够更准确地检测免疫组分及多种呼吸道病原体。

上呼吸道样本，包括鼻灌洗液（NLF）和鼻拭子，可用于检测病原体，包括病毒和细菌，这些病原体可能……

我们的研究致力于开发一种从鼠类大量采集鼻腔灌洗液的方法，旨在解决两个主要难题：实现高产量和防止血液污染。收集鼻腔灌洗液有两种方法：咽部途径可获得较大体积的样本，而气管途径则可减少血液污染。我们的方法能够从咽部收集大量鼻腔灌洗液，同时在啮齿类动物口腔内放置棉球有助于最大限度减少血液污染。该方法既简单又经济高效。为了检测样本中的血液污染，我们采用法医学方法，即鲁米诺反应。鲁米诺反应是一种简单且比其他方法更敏感的技术。血液中IgG的浓度远高于鼻腔灌洗液中的浓度。我们的方法避免了血液污染，在免疫学研究中至关重要。该方法也适用于分析其他分子，例如微生物组，因为血液污染可能影响分析结果的准确性。[旁白] 首先，将已处死的小鼠仰卧固定于手术板上，并用针固定四肢。使用1毫升注射器从心脏采集血液。用剪刀切开腹腔，暴露内脏器官和膈肌。切开膈肌和肋骨，暴露右心房。然后用剪刀刺破右心房以排出残留血液。将三枚棉球放入动物口腔内，同时将舌头向前牵拉。接着将头部抬高至鼻尖向上的位置，并用剪刀剪开下颌以防止鼻腔灌洗液被血液污染。更换新的棉球以避免血液污染。待出血停止后，向鼻咽部注入200 µL无菌PBS，并用1.5 mL离心管收集从鼻孔排出的鼻腔灌洗液。为制备化学发光检测的储备液，取1毫克鲁米诺和5毫克过氧化钠，溶于1毫升无菌水中（置于1.5 mL离心管内）。用铝箔包裹管子，并于4°C保存备用。接下来，用去离子水将储备液稀释10倍，配制工作液。取2 µL鼻腔灌洗液样本加入96孔板的孔中。每孔加入100 µL稀释后的鲁米诺溶液，并短暂振荡96孔板以混匀内容物。在暗处直接观察化学发光反应。该图展示了不同类型样本中免疫球蛋白A浓度的比较。在鼻腔灌洗液中，采用新方法采集的样本其免疫球蛋白A浓度低于传统方法采集的样本，而血清和支气管肺泡灌洗液样本在两种方法之间无显著差异。该数据表明，新方法减少了鼻腔样本中的污染，从而获得更准确的免疫球蛋白A测定结果。免疫球蛋白G也呈现类似趋势，采用新方法采集的鼻腔灌洗液中免疫球蛋白G浓度显著低于传统方法采集的样本。相比之下，血清和支气管肺泡灌洗液样本在两种方法之间同样无明显差异，提示该新方法能持续减少鼻腔样本污染，提高免疫球蛋白G检测结果的可靠性。

murine-nasal-lavage-fluid-collection-without-blood-contamination

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

无血液污染的小鼠洗鼻液采集

来源： Venuprasad, K., 等 经气管给药 流感嗜血杆菌 在小鼠模型中研究气道炎症。 视频实验杂志 (2016)本视频展示了从感染了无荚膜型细菌的安乐死小鼠中收集和处理支气管肺泡灌洗液的过程 流感嗜血杆菌...

从小鼠模型中采集感染非分型流感嗜血杆菌后的支气管肺泡灌洗液 流感嗜血杆菌

本视频展示了如何使用流式细胞术鉴定和计数支气管肺泡灌洗液中的多种免疫细胞。首先，利用活细胞染料识别单个免疫细胞，随后对表面标志蛋白进行差异化染色，从而实现对每种细胞类型的精确定量。...

通过流式细胞术鉴定和计数支气管肺泡灌洗液中的免疫细胞

小鼠鼻咽部的定植 肺炎链球菌 并描述了随后对黏附或募集细胞的提取方法。该技术包括冲洗鼻咽部并通过鼻孔收集冲洗液，适用于多种检测指标，包括差异细胞计数和mRNA表达分析。 原位.

鼻腔定植Streptococcus pneumoniae期间炎症反应的表征

肺的健康状况可通过肺细支气管中存在的免疫细胞类型和数量来反映。本文介绍一种支气管肺泡灌洗技术，可用于分离和研究小鼠下呼吸道中的非黏附性细胞及可溶性因子。...

小鼠肺部支气管肺泡灌洗以分析炎性细胞浸润

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本文描述了鼻腔和支气管吸收技术的应用，特别是使用合成吸收基质（SAM）来采集上、下呼吸道的黏膜衬液（MLF）。这些方法相较于现有的呼吸道采样技术具有更高的标准化程度和耐受性。...

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用于采样犬鼻腔免疫微环境的生理盐水灌洗法

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小鼠面部静脉采血

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无血液污染的小鼠鼻腔灌洗液采集

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