无血液污染的小鼠洗鼻液采集

本方案描述了一种避免小鼠鼻腔灌洗液 （NLF） 中血液污染的新方法。由于这种方法确保了 NLF 采集没有血液污染，因此可以更准确地检测免疫成分和各种呼吸道病原体。

我们的研究重点是开发一种从小鼠身上大量收集洗鼻液的方法，解决两个主要挑战：实现高产量和防止血液污染。

收集洗鼻液有两种方法：咽部途径（产生更大的体积）和气管途径（减少血液污染）。

我们的方法能够从咽部收集大量洗鼻液，而将棉球放入啮齿动物的嘴里有助于最大限度地减少血液污染。该方法既简单又具有成本效益。

为了检测样本中的血液污染，我们采用法医方法，称为鲁米诺反应。鲁米诺反应是一种简单且比其他方法更灵敏的方法。

血液中IgG的浓度远高于洗鼻液中的浓度。我们的方法避免了血液污染，在免疫学研究中至关重要。它还适用于分析其他分子，例如微生物组，血液污染会影响准确性。

[旁白]首先，将安乐死的小鼠仰卧在手术板上，并用销钉固定所有四个肢体。使用一毫升注射器从心脏收集血液。用剪刀打开腹腔，露出内脏器官和横膈膜。切开横膈膜和肋骨，露出右心房。然后，用剪刀刺破右心房以排出剩余的血液。将三个棉球放入动物的嘴里，同时向前拉舌头。然后，将头部抬高到鼻子向上的位置，并用剪刀将下颌分开，以防止洗鼻液中的血液污染。用新鲜的棉球代替棉球，以免血液污染。止血后，将200微升无菌PBS注射到choana中，并将从鼻孔喷出的洗鼻液收集到1.5毫升的管子中。要制备用于化学发光检测的储备溶液，请将 1 毫克鲁米诺和 5 毫克过氧化钠溶解在 1.5 毫升管内的一毫升无菌水中。用铝箔盖住管子，并将其存放在四摄氏度下直至使用。接下来，通过用去离子水将储备溶液稀释十倍来制备工作溶液。将两微升洗鼻液样品移液到96孔板的孔中。向每个孔中加入 100 微升稀释的鲁米诺溶液，并短暂摇动 96 孔板以混合内容物。在黑暗中直接观察化学发光反应。该图比较了不同样品类型的免疫球蛋白 A 浓度。在鼻腔灌洗液中，与传统方法相比，使用新方法采集的样本中免疫球蛋白 A 的浓度较低，而血清和支气管肺泡灌洗液样本在两种方法之间没有实质性差异。该数据表明，这种新方法减少了鼻腔样本中的污染，从而实现更准确的免疫球蛋白 A 测量。在免疫球蛋白 G 中观察到类似的模式，与传统方法相比，使用新方法收集的鼻腔灌洗液中的浓度显着降低。相比之下，血清和支气管肺泡灌洗液样本再次显示两种方法之间没有有意义的差异，这表明新方法始终减少了鼻腔样本中的污染，并提高了免疫球蛋白 G 测量的可靠性。