Name: 特发性肺纤维化的精细小鼠模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: 了解通过重复口咽给药博来霉素在小鼠中诱导肺纤维化的改进方法。该模型有效模拟特发性肺纤维化的核心病理特征，包括持续性成纤维细胞灶、胶原沉积增加和肺泡支气管化，同时降低死亡率，为研究该疾病的发病机制和治疗方法提供了可靠平台。

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本研究由深圳市科技创新委员会（资助号：JCYJ20230807110800002，负责人：C.L.）、广东省自然科学基金（项目号：2024A1515011087，负责人：C.L.）以及广州市科技计划项目（项目号：202201020299，负责人：Z.L.）资助。

使用4至6个月大的C57BL/6雄性小鼠。所有涉及小鼠的实验均按照中山大学实验动物研究中心批准的动物实验方案（批准号SYSU-IACUC-MED-2021-B0076）进行。本研究遵循中山大学机构动物护理和使用委员会规定的动物护理指南。
1. 实验准备
<ol>
	<li>试剂：获取博来霉素粉末、磷酸盐缓冲液（PBS）和异氟烷。</li>
	<li>设备：获取移液器吸头（200 µL）、移液器、气管注射架、1 mL移液器吸头盒和酒精棉球。</li>
</ol>
2. 实验步骤
<ol>
	<li>使用 PBS 作为溶剂，配制浓度为 1.5 mg/mL 的博来霉素储备液。将 600 µL 储备液分装至 2 mL 微量离心管中，并加入 1200 µL PBS 进行 3 倍稀释（终浓度：0.5 mg/mL）。 
	注意：博来霉素储备液储存于 −20 °C，可稳定保存长达 3 个月。</li>
	<li>在经口咽给予前称量每只小鼠的体重。根据小鼠体重计算所需博来霉素溶液的体积。给药剂量为 1.5 mg/kg，注射体积（µL）等于小鼠体重（克）乘以 3（因进行了 3 倍稀释）。</li>
	<li>将小鼠放入异氟烷麻醉诱导舱中。持续观察小鼠直至其呼吸减慢，表明麻醉充分，随后立即取出。 
	注意：由呼吸急促（tachypnea）转为呼吸缓慢（bradypnea）提示麻醉成功。一旦观察到呼吸减慢应立即取出小鼠，以防止麻醉过量；若在呼吸急促阶段过早取出，可能导致小鼠在后续操作中苏醒。</li>
	<li>将小鼠固定在气管注射架上，使其门齿钩住固定钩。用镊子轻轻拉出舌头，并用拇指和食指夹住（避免持续使用镊子以减少不适）。用中指覆盖小鼠鼻部，以确保给药时的正确方向。</li>
	<li>使用 200 µL 移液器吸头吸取计算好的稀释博来霉素溶液体积，缓慢将溶液注入小鼠口咽部，切勿将吸头深入插入。该方法可最大限度减少组织损伤并确保有效递送。</li>
	<li>倾听是否出现明显的咕噜声，该声音提示溶液已成功进入肺部。当声音消失后，将小鼠从支架上取下并置于加热垫上恢复。 
	注意：特征性的咕噜声是博来霉素成功递送至口咽部的可靠指标。若未听到此声音，提示药物可能误入食管，该动物应从后续实验中剔除，因其给药失败。</li>
	<li>在首次给药 7 天后重复一次口咽给药操作。 
	注意：在博来霉素处理后的 60 天内，需每日监测小鼠是否出现以下情况：体重减轻（&#62;基础体重的 20%）、呼吸困难（呼吸费力、呼吸急促 &#62;160 次/分钟）、活动减少（弓背、独处行为）。</li>
</ol>
3. 组织采集
<ol>
	<li>在预定时间点（末次博来霉素给药后14天和60天）通过颈椎脱位法处死小鼠。</li>
	<li>行正中胸骨切开术以暴露胸腔。左心耳&#160;手术切开后，通过右心室灌注10 mL冰冷的PBS以清除循环中的血细胞。</li>
	<li>插管气管并用1%多聚甲醛（PFA）充气以确保组织完全固定。</li>
	<li>切除肺组织，并在室温下将其浸入1% PFA中固定1小时，以确保充分固定。</li>
	<li>组织处理步骤：将固定后的组织在 PBS 中洗涤 3 次，每次 5 分钟。依次使用梯度乙醇进行脱水：70% 乙醇、95% 乙醇和 100% 乙醇，确保每一步均彻底脱水。脱水完成后，在室温下用二甲苯透明处理 1 小时。随后，将组织置于 60 °C 的熔融石蜡中包埋，至少 2 小时，或直至完全浸透。最后，使用旋转式切片机将包埋组织切成 7 µm 厚的切片。</li>
</ol>
4. 样品评估
<ol>
	<li>进行苏木精-伊红（H&amp;#38;E）染色和Masson三色染色以评估纤维化的严重程度。
	<ol>
		<li>进行H&amp;#38;E染色时，依次使用二甲苯脱蜡，每次5分钟，共2次；然后梯度乙醇复水：100%乙醇处理5分钟，再100%乙醇处理1分钟，接着95%乙醇处理1分钟，最后80%乙醇处理1分钟。用蒸馏水冲洗。用苏木精染色5分钟，随后用自来水冲洗3次，每次冲洗后浸泡5分钟。然后用80%乙醇浸洗1分钟，再用伊红复染45秒。梯度乙醇脱水：95%乙醇浸洗5次，100%乙醇浸洗5次，最后在100%乙醇中浸泡2分钟。用二甲苯透明，每次浸洗5分钟，共2次，最后用中性树胶封片。</li>
		<li>进行Masson染色时，在完成与步骤4.1.1相同的脱蜡步骤后，用ddH2O冲洗切片，用Ponceau S-品红染色5秒，随后用0.2%弱酸溶液（乙酸/水）冲洗1分钟。在磷钼酸溶液中分化5分钟，接着用弱酸溶液冲洗1分钟，然后用苯胺蓝复染1分钟，最后再用弱酸溶液洗涤1分钟。梯度乙醇脱水：先用95%乙醇处理2–3秒，再用无水乙醇处理5–10秒，重复2次。二甲苯透明后用树脂封片。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>进行免疫组织化学（IHC）和免疫荧光（IF）染色，检测α-SMA、KRT5和ΔN-p6314,15等标志物，以评估纤维化及上皮重塑情况。
	<ol>
		<li>进行免疫组织化学染色时，先对石蜡包埋组织切片进行脱蜡和复水，然后在含有0.5% Tween-20的沸腾0.1 M柠檬酸钠缓冲液（pH 6.0）中进行抗原修复，持续90秒。用3% H2O2淬灭内源性过氧化物酶活性，随后用0.5% Triton X-100/PBS进行膜通透处理，并进行非特异性封闭。加入一抗，4 °C孵育过夜，然后室温下与同源二抗孵育1小时，再与链霉亲和素-HRP结合物孵育30分钟。显色反应使用Vector SK-4100 DAB底物，苏木精复染，乙醇脱水，中性树胶封片，完成整个实验流程。</li>
		<li>进行免疫荧光染色时，在完成标准免疫组织化学处理步骤（脱蜡、抗原修复、封闭、一抗和二抗孵育）后，使用Streptavidin-Alexa Fluor 594或647（1:500稀释，室温孵育30分钟）标记生物素化靶点。用DAPI（终浓度20 µg/mL）进行细胞核复染，孵育5分钟，随后使用抗荧光淬灭封片剂封片，以保存荧光信号。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Albera, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+idiopathic+pulmonary+fibrosis+trials%3A+the+point+on+end-points%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+Rev%22%5BJournal%5D)">Challenges in idiopathic pulmonary fibrosis trials: the point on end-points.</a> Eur Respir Rev. 20 (121), 195-200 (2011).</li>
<li>du Bois, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+Mortality+in+Patients+with+Idiopathic+Pulmonary+Fibrosis+%28IPF%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Predictors of Mortality in Patients with Idiopathic Pulmonary Fibrosis (IPF).</a> Am J Respir Crit Care Med. 179, A1114(2009).</li>
<li>Martinez, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Nat Rev Dis Primers. 3, 17074(2017).</li>
<li>Wollin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mode+of+action+of+nintedanib+in+the+treatment+of+idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Mode of action of nintedanib in the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Eur Respir J. 45 (5), 1434-1445 (2015).</li>
<li>Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bleomycin+animal+model%3A+A+useful+tool+to+investigate+treatment+options+for+idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The bleomycin animal model: A useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Int J Biochem Cell Biol. 40 (3), 362-382 (2008).</li>
<li>Fernanda de Mello Costa, M., Weiner, A. I., Vaughan, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal-like+Progenitor+Cells%3A+A+Review+of+Dysplastic+Alveolar+Regeneration+and+Remodeling+in+Lung+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Basal-like Progenitor Cells: A Review of Dysplastic Alveolar Regeneration and Remodeling in Lung Repair.</a> Stem Cell Rep. 15 (5), 1015-1025 (2020).</li>
<li>Kathiriya, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+alveolar+type+2+epithelium+transdifferentiates+into+metaplastic+KRT5%28%2B%29+basal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Human alveolar type 2 epithelium transdifferentiates into metaplastic KRT5(+) basal cells.</a> Nat Cell Biol. 24 (1), 10-23 (2022).</li>
<li>Chung, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+repeated+lung+injury+and+genetic+background+in+bleomycin-induced+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Role of repeated lung injury and genetic background in bleomycin-induced fibrosis.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 29 (3 Pt 1), 375-380 (2003).</li>
<li>Ley, B., Collard, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Clin Epidemiol. 5, 483-492 (2013).</li>
<li>Costabel, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+changing+treatment+landscape+in+idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+Rev%22%5BJournal%5D)">The changing treatment landscape in idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Eur Respir Rev. 24 (135), 65-68 (2015).</li>
<li>Degryse, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+intratracheal+bleomycin+models+several+features+of+idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Repetitive intratracheal bleomycin models several features of idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 299 (4), L442-L452 (2010).</li>
<li>Rydell-Törmänen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+alterations+and+acute+inflammation%3B+developing+in+parallel+during+early+induction+of+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix alterations and acute inflammation; developing in parallel during early induction of pulmonary fibrosis.</a> Lab Invest. 92 (6), 917-925 (2012).</li>
<li>Wang, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+pulmonary+fibrosis%3A+twice-repeated+oropharyngeal+bleomycin+administration+mimicking+human+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of pulmonary fibrosis: twice-repeated oropharyngeal bleomycin administration mimicking human pathology.</a> Biochem Cell Biol. 103, 1-7 (2025).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-184+targets+TP63+to+block+idiopathic+pulmonary+fibrosis+by+inhibiting+proliferation+and+epithelial-mesenchymal+transition+of+airway+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">miR-184 targets TP63 to block idiopathic pulmonary fibrosis by inhibiting proliferation and epithelial-mesenchymal transition of airway epithelial cells.</a> Lab Invest. 101 (2), 142-154 (2021).</li>
<li>Zuo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p63%28%2B%29Krt5%28%2B%29+distal+airway+stem+cells+are+essential+for+lung+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">p63(+)Krt5(+) distal airway stem cells are essential for lung regeneration.</a> Nature. 517 (7536), 616-620 (2015).</li>
<li>Parlar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cannabinoid+receptor+2+synthetic+agonist%2C+AM1241%2C+on+bleomycin+induced+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Effects of cannabinoid receptor 2 synthetic agonist, AM1241, on bleomycin induced pulmonary fibrosis.</a> Biotech Histochem. 96 (1), 48-59 (2021).</li>
<li>Uysal, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Cannabinoid-1+Receptor+Ligands+in+the+Ovalbumin-Induced+Mouse+Model+of+Allergic+Asthma%3A+Is+It+Related+to+Transient+Receptor+Potential+Vanilloid-1+Channels%5BTitle%5D)+AND+%22Cannabis+Cannabinoid+Res%22%5BJournal%5D)">The Role of Cannabinoid-1 Receptor Ligands in the Ovalbumin-Induced Mouse Model of Allergic Asthma: Is It Related to Transient Receptor Potential Vanilloid-1 Channels.</a> Cannabis Cannabinoid Res. 10 (1), e121-e133 (2025).</li>
</ol>

作者声明无利益冲突。

本研究提出了一种改良的小鼠特发性肺纤维化（IPF）模型，通过两次重复经口咽给予博来霉素实现。该方法克服了传统单剂量模型的关键局限性，后者无法再现人类IPF的关键病理特征，例如KRT5+和p63+基底细胞簇7,14,15、持续存在的成纤维细胞灶3以及不可逆的纤维化8。通过优化给药方案和递送方式，本模型能够高保真地模拟IPF的病理变化，包括肺泡上皮的细支气管化、蜂窝样改变以及持续的纤维化反应13，从而为疾病机制研究和治疗干预提供了更具生理相关性的实验平台（表1）。
该模型的成功之处在于其能够克服单剂量博来霉素模型中观察到的纤维化自限性特点8。通过两次给予博来霉素，我们诱导出一种慢...

特发性肺纤维化（IPF）是一种进行性且致命的间质性肺部疾病，其特征为不可逆的肺实质损伤，导致呼吸困难等严重症状以及生活质量显著下降1，2。组织学上，IPF表现为普通型间质性肺炎（UIP），其特点为空间分布异质性的纤维化、肺泡上皮的细支气管化以及成纤维细胞灶3。尽管该疾病具有重要的临床意义，但IPF复杂的发病机制和有限的治疗手段凸显了建立可靠实验模型的迫切需求，以推动对其病理机制的理解并促进治疗策略的开发。
现有的单剂量博来霉素模型虽然被广泛使用4，但无法重现人类特发性肺纤维化（IPF）的关键病理特征，例如KRT5+基底细胞簇5,6,7和持续存在的成纤维灶，且其纤维化具有自限性8。重复给予博来霉素可提高病理保真度9,10，但受限于技术复杂性高、死亡率高以及建模周期长等问题11,12。为克服这些局限，我们开发了一种优化的小鼠模型，采用两次重复经口咽途径给予博来霉素13。该方法结合了重复损伤模型在病理完整性方面的优势9,10与无创给药的技术便利性，在维持低死亡率的同时，实现了超过60天的持续性纤维化进展。通过高度模拟人类IPF的病理特征，包括蜂窝样囊性结构的形成和持续性纤维化，本方法为疾病机制研究和治疗干预评估提供了一个可靠的实验平台。
该方案特别适用于需要建立慢性纤维化模型且避免手术并发症的研究人员。在可重复性、临床相关性以及符合动物福利指南方面，该方法相较于现有技术具有显著优势。在已有经口咽操作技术的基础上，这些优化改进推动了特发性肺纤维化（IPF）的临床前研究，弥合了实验模型与人类疾病病理之间的关键差距。

<table><tbody><tr><td>使用的试剂</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>博来霉素</td><td>MCE</td><td>HY-17565</td><td></td></tr><tr><td>H&amp;E染色试剂盒</td><td>Solarbio</td><td>G1120</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>RWD</td><td>R510-22-10</td><td></td></tr><tr><td>Masson染色试剂盒</td><td>Solarbio</td><td>G1340</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Biosharp</td><td>BL302A</td><td></td></tr><tr><td>使用的抗体</td><td></td><td></td><td>稀释比例</td></tr><tr><td>&amp;alpha;-SMA</td><td>Abcam</td><td>ab5694</td><td>1:100</td></tr><tr><td>细胞角蛋白5</td><td>Immunoway</td><td>YT1271</td><td>1:100</td></tr><tr><td>DeltaN p63</td><td>CST</td><td>67825</td><td>1:100</td></tr><tr><td>羊抗兔IgG H&amp;L（生物素标记）</td><td>Abcam</td><td>ab6720</td><td>1:800</td></tr><tr><td>羟脯氨酸</td><td>CST</td><td>73812</td><td>1:100</td></tr><tr><td>辣根过氧化物酶标记链霉亲和素</td><td>Jackson</td><td>016-030-084</td><td>1:100</td></tr><tr><td>链霉亲和素/AF594</td><td>Bioss</td><td>bs-0437P-AF594</td><td>1:500</td></tr></tbody></table>

改良的小鼠特发性肺纤维化模型

Refined Murine Model of Idiopathic Pulmonary Fibrosis

动物模型在理解疾病机制和测试潜在治疗策略方面发挥着关键作用。然而，依赖单次博来霉素注射的传统特发性肺纤维化（IPF）小鼠模型无法准确复制IPF患者中观察到的复杂病理特征。本研究介绍了一种改进的方法，即在小鼠中连续两次经口咽给予博来霉素，该方法能更有效地模拟IPF的疾病进展。这一新方案可诱导出多种关键病理改变，例如蜂窝状囊腔的形成、成纤维细胞灶以及肺泡上皮的细支气管化，这些均与人类IPF的组织病理学表现高度相似。通过使用该模型，我们能够在更长的时间范围内捕捉到进行性纤维化变化，从而为IPF的发病机制提供更可靠的见解。此外，与传统的单剂量模型相比，这种双剂量方法具有多项优势，包括更高的可重复性以及对疾病发展过程更充分的模拟。该方法增强了我们研究IPF潜在机制和评估潜在治疗干预措施的能力。所提出的实验方案在临床前研究中具有重要意义，为探究肺纤维化的生物学特性及新型治疗方法的疗效提供了有价值的工具。

与传统的单剂量经口咽给予博来霉素方法相比，该方法成功再现了特发性肺纤维化（IPF）的标志性病理特征，包括成纤维细胞灶（图1B），蜂窝状改变（图1G以及肺泡上皮的细支气管化（图1H）。重要的是，该模型表明这些特征在时间上的持续存在（图1B），紧密模拟了人类特发性肺纤维化（IPF）的慢性进行性特征。此外，我们观察到KRT5+和p63+基底细胞簇的形成（图1E- F），这是IPF的关键组织学特征，而在单次给药模型中则不存在。这些发现凸显了我们采用的重复两次博来霉素给药方法在模拟IPF复杂且不可逆病理过程方面的更高保真度。
<img alt="使用不同染色技术研究肺纤维化，显示...

本方案阐述了一种通过反复经口咽给予博来霉素在小鼠中诱导肺纤维化的方法，所产生的病理特征与特发性肺纤维化高度相似。

动物模型在理解疾病机制和测试潜在治疗方法方面发挥着至关重要的作用。然而，传统的鼠类疾病模型……

肺纤维化是一种具有毁灭性且不可逆的疾病，其特征为肺泡的纤维化瘢痕和支气管化。本研究通过建立一种在小鼠中更贴近肺纤维化病理特征的改良方法，解决了现有动物模型的局限性。标准的肺纤维化模型采用气管内单次注射博来霉素，但无法模拟该疾病的关键特征。虽已有研究开发出采用反复多次注射的方法，但该方法耗时较长且导致高死亡率。我们采用两次重复的经口咽注射诱导肺纤维化，该方法在重现疾病核心特征的同时，相较于反复多次注射模型显著节省了时间并降低了小鼠死亡率。[旁白] 首先，在进行经口咽给药前称量每只小鼠的体重，以根据其体重计算所需博来霉素溶液的体积。将小鼠置于气管注射架上，并通过钩住其门齿固定。使用镊子轻轻拉出舌头，并用拇指和食指夹住。用中指覆盖小鼠鼻部，以确保溶液正确递送。使用200微升移液枪头吸取所需体积的稀释博来霉素溶液，并缓慢将其注入咽部，避免移液枪头插入过深。给药完成后，将小鼠从支架上取下并放置于加热垫上恢复。在处死小鼠后，行正中胸骨切开术以打开胸腔。通过右心室灌注10毫升冰冻磷酸盐缓冲液（PBS），以冲洗血液细胞。将套管插入气管，并使用1%多聚甲醛灌注肺组织，以确保完全固定。取出肺组织并浸入1%多聚甲醛中，在室温下固定1小时。进行组织处理时，将固定后的组织在PBS中漂洗三次，每次5分钟。使用70%乙醇对样本进行脱水，确保完全脱水。脱水后，在室温下用二甲苯透明处理1小时。随后将组织浸入60摄氏度熔化的石蜡中包埋，至少2小时或直至完全浸透。使用旋转式切片机将包埋组织切成7微米厚的切片。进行苏木精-伊红（H&E）染色时，依次用二甲苯脱蜡两次，每次5分钟。然后将切片在100%乙醇中复水5分钟。再依次在95%乙醇中复水1分钟，在80%乙醇中复水1分钟。用蒸馏水漂洗。用苏木精染色5分钟。用自来水漂洗三次，并浸泡于水中5分钟。然后在80%乙醇中浸洗1分钟，用伊红复染45秒。经梯度乙醇脱水后，将切片在二甲苯中透明处理两次，每次浸洗5分钟。最后使用中性树胶封片。进行Masson三色染色时，脱蜡后用双蒸水漂洗切片，并用Ponceau S酸性品红溶液染色5秒。然后用0.2%弱酸溶液漂洗1分钟。在磷钼酸溶液中分化5分钟。再次用弱酸溶液漂洗1分钟。用苯胺蓝复染1分钟，之后再次用弱酸溶液漂洗。再次经梯度乙醇脱水后，用二甲苯透明并用树脂封片。进行免疫组织化学染色时，对石蜡包埋切片脱蜡并复水后，进行抗原修复：将切片置于含有0.5%的沸腾0.1摩尔柠檬酸钠缓冲液中处理90秒。使用3%过氧化氢淬灭内源性过氧化物酶活性。使用含0.5% Triton X-100的PBS处理以通透细胞膜，并阻断非特异性结合。加入一抗，4摄氏度孵育过夜。加入同源二抗，室温孵育1小时。如需进行免疫荧光染色，在重复上述免疫组化步骤后，加入链霉亲和素-辣根过氧化物酶（Streptavidin-HRP），室温孵育30分钟。随后加入链霉

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

特发性肺纤维化的精细小鼠模型

本文介绍了一种通过插管将博来霉素直接注入小鼠气管的快速简便方法。该方法的主要优点在于具有高度可重复性、易于掌握，且无需特殊设备或漫长的恢复时间。...

一种改进的小鼠气管快速插管方法

我们介绍一种基于显微CT和荧光分子断层成像的非侵入性多模态成像方法，用于对通过两次气管内滴注博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型进行纵向评估。...

一种基于显微CT与荧光分子断层成像的多模态成像方法用于小鼠博来霉素诱导肺纤维化的纵向评估

已采用博来霉素建立多种肺纤维化动物模型，以阐明肺纤维化的发病机制并寻找新的药物靶点。然而，大多数针对肺组织的肺纤维化模型存在药物分布不均的问题。本文提出一种通过鼻腔雾化博来霉素诱导的均匀性肺纤维化模型。...

通过鼻内博来霉素雾化诱导的肺纤维化小鼠模型

本方案描述了在小鼠模型中通过IL-33刺激肺泡后，分离肺间质巨噬细胞（IMs）并进行过继性转移的方法，该方法可促进对肺部免疫反应的研究 体内...

过继性转移经IL-33刺激的巨噬细胞至博来霉素诱导的小鼠模型以研究其对体内特发性肺纤维化的影响 In Vivo

本方案描述了一种通过反复暴露于二氧化硅悬浮液来建立小鼠矽肺模型的方法 通过...

通过反复吸入结晶二氧化硅粉尘建立的矽肺小鼠模型

本文介绍了通过向气道注射博来霉素建立与肺纤维化相关的肺动脉高压（PF-PH）大鼠模型的方法。同时提供了对该动物模型进行验证的逐步操作流程。...

建立并验证与肺纤维化相关的肺动脉高压大鼠模型

本方案演示了在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型中应用的经口咽部吸入技术。...

小鼠肺纤维化模型中博来霉素的口咽部给药

在此，我们介绍一种通过气溶胶化博来霉素递送在小鼠中建立肺纤维化模型的实验方案 通过 气管。该优化方法能够在无需手术切口的情况下实现均匀、定量且精确的递送，从而提高博来霉素诱导纤维化的可重复性和可靠性。...

一种改进的基于气溶胶的经气管博来霉素递送方法，用于建立可重复且微创的小鼠肺纤维化模型

展示了诱导单侧后肢缺血的手术操作，并通过激光多普勒血流成像证实缺血效果。...

下肢缺血小鼠模型

本视频演示了如何使用一种快速且可靠的模型来研究心肌缺血的病理生物学和病理生理学过程。...

LAD结扎：一种小鼠心肌梗死模型

了解通过重复口咽给药博来霉素在小鼠中诱导肺纤维化的改进方法。该模型有效模拟特发性肺纤维化的核心病理特征，包括持续性成纤维细胞灶、胶原沉积增加和肺泡支气管化，同时降低死亡率，为研究该疾病的发病机制和治疗方法提供了可靠平台。

改良的小鼠特发性肺纤维化模型

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