氧化铁标记的胚胎干细胞和的hMSCs纳米粒子在体内的跟踪与非侵入性磁共振成像

对于新的干细胞疗法的评价，它是重要的非侵入性的追踪体内注射细胞。该视频将告诉你如何标注随后在体内磁共振成像体内的氧化铁造影剂的人类间质细胞和胚胎干细胞。

欢迎来到 Haiku Dal Link 博士的实验室。我们要感谢加州再生医学研究所资助该项目，以评估新的干细胞疗法。在体内无创跟踪注射的细胞很重要。

这可以通过在体外使用特异性或多功能造影剂标记细胞进行 MR 成像或光学成像来实现。本视频将向您展示如何标记人间充质和人胚胎干细胞，以便进行后续的体内成像。大家好，我是来自加州大学旧金山分校放射学系分子和功能成像中心造影剂研究小组的 Tobias Henning。

今天，我将向您展示用 peric、carone 对人间充质干细胞进行体外标记，以及用 phem 氧化物对人胚胎干细胞进行体外标记的程序。该技术可用于在体内定位注射的细胞或获取有关其功能状态的信息。使用 MRI 有意识剂进行细胞标记的程序因胚胎和间充质干细胞而异，但两种技术都涉及以下步骤，准备细胞培养物，即细胞接种粘附在细胞培养物上 准备标记，通过干细胞的简单孵育胰蛋白酶对细胞进行培养基标记，并洗掉游离有意识剂 评估标记效率和细胞活力。

因此，让我们开始标记一些单元格。现在让我们从用 Theo Carbatrol 标记间充质干细胞开始。首先，我将展示使用 theo carron 和基于氧化铁的造影剂标记人间充质干细胞以进行 MR 成像的技术。

首先，我们在标记程序前 18 至 24 小时将细胞接种在 T 75 培养瓶中，汇合度为 80%否则，如果您在第二天使用不同的培养皿，相当于每平方厘米约 10， 000 个细胞，我们首先通过添加 30 微升储备剂到 8 毫升无血清培养基来制备标记培养基。这将以 80% 的共流畅度标记一个 T 75 FLA，对应于每毫升培养基 100 微克铁的浓度。现在我们取下培养基，用 PBS 或无血清培养基洗涤细胞一次。

我们这样做是为了去除残留的血清蛋白和培养基中的其他成分，这些成分可能会结合造影剂并影响标记效率。将标记培养基添加到培养瓶中，然后将培养瓶放回培养箱中。两小时后，加入 2 ml FCS，使 FCS 的最终浓度达到 20%。

我们这样做是为了确保细胞不会受到任何刺激来区分它是在它们熟悉的环境中生长的。现在我们将细胞孵育 18 小时。第二天，我们用 PBS 冲洗细胞，然后根据标准培养方案将它们切碎，以去除游离造影剂。

胰蛋白酶凝固后，通过在 400 RCF 下离心 5 分钟，将细胞悬液洗涤 3 次，并在 PBS 中悬浮 reus。就是这样。最终细胞 P 可以重悬并准备用于进一步实验。

我们现在对细胞进行计数，因为我们可能在之前的洗涤步骤中丢失了一些细胞。此时，我们还使用 trippin 蓝色排斥测定法进行活力测试，并取一些样品进行光谱分析以测量标记效率。现在让我向您展示如何用 phem 氧化物标记人类胚胎干细胞。

首先，我们将人胚胎干细胞接种在 10 厘米的培养皿中。像往常一样，这些培养皿预先编码了明胶，并且上面有辐照的饲养细胞。您也可以将此方案用于无饲养层培养物。

我们让人类胚胎干细胞附着并生长大约 3 到 4 天，以便它们形成中等大小的集落。在此期间，我们确保菌落不会长得太大，因为较大的菌落更难分解。随后，分化的细胞会污染这些培养物。

因此，根据菌落的清洁度，我们可能不得不通过解剖来去除分化的培养物。现在我们准备标记培养基，该培养基由浓度为每毫升 100 微克铁的定理氧化物和完整的人胚胎干细胞培养基组成。为此，我们混合了 89 μL、phem 氧化物和 10 mL 全生长培养基。

至于间充质干细胞，我们用完全培养基清洗培养皿一次，以去除死细胞或碎片。然后，我们在每个培养皿中加入 10 毫升标记培养基，并将细胞孵育 4 小时。现在标记已完成。

下一步，我们需要洗涤细胞并获得单细胞悬液。进一步使用 为此，我们首先用 PBS 冲洗盘子。现在，我们用 5 毫升 0.25% 胰蛋白酶替换 PBS，并在培养箱中孵育 5 分钟或直到细胞分离。

经常敲击培养皿有助于细胞现在已经分离。请记住，如果培养皿包含较大的菌落，则可能会留下一些团块来清除这些团块。我们使用血清移液管上下移液，将整个悬浮液充分混合，然后再静置 2 分钟。

在胰蛋白酶中。我们不使用 eppendorf 移液器，因为如果一切正常，通过细尖端重复移液细胞会破坏细胞膜。我们现在有一种单细胞悬液，它与来自明胶、胚胎干细胞基质和死细胞的大量碎片混合在一起。

我们现在可以通过让细胞通过 40 微米的细胞过滤器来去除残留的团块或复合物。现在我们需要从辐照的饲养细胞中分离出人类胚胎干细胞。这可以通过将细胞悬液接种在明胶涂层培养皿上来有效地完成。

如果我们不作培养皿，所有细胞都会沉淀下来，但饲养层会比人类胚胎干细胞附着得更快。因此，如果我们在 45 分钟后取下 SUP natin，它应该主要包含人胚胎干细胞，而饲养器应该主要附着在培养皿上。通过这种方式，我们获得了磁性标记的人胚胎干细胞的单细胞悬液，可以像以前的方案一样用于进一步的实验。

此时，您需要对细胞进行计数并采集样本以进行活力评估和标记效率测量。我今天想向大家展示的实验方案到此结束。现在让我们看看如何在体内追踪标记的干细胞。

这张幻灯片显示了 OC Carone 标记的干细胞。将它们注射到小鼠的大脑中后，我们将 20， 000 个体积为 75 纳升的悬浮细胞复苏并注射到脑室下区。植入细胞中的氧化铁会导致 MR 上可见的易感伪影。图像。

我们刚刚向您展示了如何标记胚胎和间充质干细胞。在体外使用 Mr.Contrast 剂追踪体内间充质和胚胎干细胞，在评估新的干细胞疗法方面具有巨大潜力。就是这样。

感谢您的观看，祝您的细胞标记好运。